發(fā)布時(shí)間：2020-05-23 06:45

【摘要】：第一部分丹參注射液對(duì)糖尿病大鼠模型腎臟局部腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)的影響目的:通過(guò)高糖高脂飼料聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,分別給予丹參注射液及二甲雙胍進(jìn)行干預(yù),觀察糖尿病大鼠的一般情況、生化指標(biāo)、蛋白尿、腎功能、腎臟病理及腎臟組織血管緊張素II1型受體(AT1)與Mas的表達(dá)水平,探討丹參注射液對(duì)糖尿病大鼠腎臟保護(hù)作用的機(jī)制。方法:40只健康雄性SD大鼠,采用STZ(50 mg/kg)腹腔注射聯(lián)合高糖高脂飼料建立糖尿病大鼠模型,然后隨機(jī)分為造模組、丹參注射液組、二甲雙胍組,同時(shí)設(shè)置正常對(duì)照組。連續(xù)給藥6周,每周記錄體重與血糖變化。給藥六周后,將大鼠置于清潔的代謝籠中收集尿液,檢測(cè)24 h尿蛋白量;10%水合氯醛麻醉后,腹主動(dòng)脈取血分離血清,用生化儀器檢測(cè)血肌酐、尿素氮;取出大鼠腎臟稱(chēng)重后,經(jīng)脫水、透明處理后用石蠟包埋。每個(gè)蠟塊用石蠟切片機(jī)切成厚度為5μm的組織切片,用于HE染色與免疫組化檢測(cè)。結(jié)果:連續(xù)給藥6周后,與正常組相比,糖尿病模型大鼠的體重明顯降低,相對(duì)腎重、血糖、24 h尿蛋白量、血肌酐、尿素氮均有顯著增加。丹參注射液給藥組可以顯著降低24 h尿蛋白量、血肌酐與尿素氮的水平(P0.05)。腎臟組織HE染色結(jié)果表明,丹參注射液可以明顯改善糖尿病大鼠的腎小球肥大,系膜細(xì)胞增生,基底膜增生與腎小管的萎縮。AT1和Mas主要分布在腎小管內(nèi),免疫組化結(jié)果顯示與正常組相比,模型組的AT1表達(dá)量顯著增加、Mas表達(dá)顯著降低;丹參注射液給藥組可以顯著減少AT1表達(dá),同時(shí)增加Mas表達(dá)。結(jié)論:丹參注射液可以有效改善糖尿病腎病大鼠腎小管病變、減少24 h尿蛋白量,血肌酐與尿素氮水平。丹參注射液可以抑制AT1的表達(dá),同時(shí)使Mas蛋白表達(dá)增加,從而說(shuō)明丹參注射液治療糖尿病腎病可能是通過(guò)平衡ACE2-Ang(1-7)-Mas軸與ACE-AngⅡ-AT1軸。第二部分丹參注射液對(duì)高糖誘導(dǎo)NRK-52E細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及AT1和Mas表達(dá)的影響目的:考察高糖對(duì)NRK-52E細(xì)胞AT1和Mas表達(dá)的影響及丹參注射液的干預(yù)作用,并研究PI3K在其中的作用。方法:(1)通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定丹參注射液的作用濃度,將該實(shí)驗(yàn)分為3組:正常對(duì)照組(NG,5.5 mmol/L葡萄糖);高糖模型組(HG,80 mmol/L葡萄糖);丹參組(240μg生藥/m L丹參+80 mmol/L葡萄糖)。各組細(xì)胞孵育24 h,用倒置顯微鏡觀察NRK-52E細(xì)胞形態(tài),采用MTT法檢測(cè)孵育不同時(shí)間(24、48、72 h)丹參注射液對(duì)高糖損傷細(xì)胞增殖的影響;同時(shí)采用免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)PI3K、p-PI3K蛋白表達(dá);Western Blot法檢測(cè)AT1、Mas、PI3K和p-PI3K蛋白表達(dá)。(2)根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn),將該實(shí)驗(yàn)分為4組:正常對(duì)照組(NG,5.5 mmol/L葡萄糖);AngⅡ模型組(AngⅡ,10-5 mol/L);丹參注射液組(240μg生藥/m L丹參+10-5 mol/L AngⅡ);氯沙坦組(10-5 mol/L氯沙坦+10-5 mol/L AngⅡ)。采用MTT法檢測(cè)丹參注射液對(duì)AngⅡ損傷細(xì)胞增殖的影響;同時(shí)采用Western Blot法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)PI3K、p-PI3K蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:(1)MTT結(jié)果顯示:(1)80 mmol/L的高糖培養(yǎng)基作用24 h、48 h、72 h可以顯著抑制NRK-52E細(xì)胞的增殖(P0.01);(2)10-5 mol/L AngⅡ作用24 h可以顯著抑制NRK-52E細(xì)胞的增殖(P0.01)。丹參注射液可以恢復(fù)高糖/AngⅡ引起的NRK-52E細(xì)胞數(shù)的減少(P0.01或P0.05);(2)免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示:與正常組相比,高糖作用24 h后PI3K、p-PI3K蛋白表達(dá)明顯升高。與高糖模型組相比,丹參注射液可以使PI3K、p-PI3K蛋白的表達(dá)減少。(3)Western blot結(jié)果顯示:(1)與正常組相比,高糖作用24 h可以提高NRK-52E細(xì)胞中PI3K、p-PI3K、AT1蛋白的表達(dá),同時(shí)減少M(fèi)as蛋白的表達(dá)(P0.01或P0.05)。與高糖模型組相比,丹參注射液組PI3K、p-PI3K蛋白的表達(dá)量顯著下降,Mas蛋白顯著上升(P0.01或P0.05),AT1蛋白表達(dá)雖有下降,但是沒(méi)有顯著性差異。(2)與正常組相比,高糖作用48 h可以減少NRK-52E細(xì)胞中PI3K、p-PI3K、Mas蛋白的表達(dá)(P0.01或P0.05),同時(shí)略有提高AT1蛋白的表達(dá),但是沒(méi)有顯著性差異。與高糖模型組相比,丹參注射液組細(xì)胞中PI3K、p-PI3K、Mas蛋白的表達(dá)量顯著增加,AT1蛋白的表達(dá)量下降(P0.01)。(3)與正常組相比,10-5 mol/L AngⅡ作用24 h可以減少NRK-52E細(xì)胞中PI3K、p-PI3K蛋白的表達(dá)。與AngⅡ模型組相比,丹參注射液組PI3K、p-PI3K蛋白的表達(dá)量顯著增加(P0.01)。結(jié)論:高糖可以通過(guò)提高AT1表達(dá),減少M(fèi)as表達(dá)激活腎小管細(xì)胞內(nèi)腎素血管緊張素系統(tǒng),丹參注射液可以抑制AT1表達(dá),同時(shí)提高M(jìn)as表達(dá),提示丹參注射液可能是通過(guò)平衡ACE2-Ang(1-7)-Mas與ACE-AngⅡ-AT1途徑發(fā)揮作用,緩解由高糖誘導(dǎo)的NRK-52E細(xì)胞的損傷,并且這種作用與PI3K激活相關(guān)。
【圖文】：

丹參注射液對(duì)糖尿病腎病大鼠體重的影響

18注：#P＜0.01 vs Normal group圖 1.2 丹參注射液對(duì)糖尿病腎病大鼠相對(duì)腎重的影響。（n=6-8）Fig.1.2 Effect of danshen injection on comparison of kidney weight in DN rats.（n=6-8）.
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張翠香;洪曉華;侯金才;王楊慧;劉建勛;;鏈脲佐菌素糖尿病腎病大鼠模型腎小球損傷的機(jī)制[J];中華中醫(yī)藥雜志;2015年09期

2 王曉華;何杏容;華紅艷;王志鋒;;丹參聯(lián)合黃芪對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟線粒體呼吸及能量代謝的影響[J];臨床與病理雜志;2015年02期

3 程海英;池宗偉;李艷輝;;復(fù)方丹參滴丸治療糖尿病腎病療效的Meta分析[J];現(xiàn)代藥物與臨床;2015年01期

4 向鏡芬;楊祥;龔劍鋒;雷偉健;鄧艷瓊;牟丹;鐘國(guó)權(quán);孟啟勇;;PI3K/Akt信號(hào)通路在膿毒癥腎臟損傷誘導(dǎo)的自噬中的調(diào)節(jié)作用[J];中國(guó)病理生理雜志;2014年06期

5 馬丙祥;董寵凱;;丹參的藥理作用研究新進(jìn)展[J];中國(guó)藥房;2014年07期

6 章曉燕;於佳煒;劉春鳳;滕杰;鐘一紅;丁小強(qiáng);;血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑和血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑單藥治療及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)慢性腎臟病患者腎素-血管緊張素系統(tǒng)表達(dá)的影響[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2012年03期

7 曹丹;郝麗榮;;糖尿病腎病與腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的關(guān)系[J];醫(yī)學(xué)綜述;2012年09期

8 黃宇靜;伍錦泉;陳玉平;黃力;傅壁峰;;血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑和血管緊張素受體拮抗劑治療糖尿病腎病的臨床療效分析[J];中國(guó)醫(yī)藥科學(xué);2012年03期

9 張夢(mèng)夢(mèng);;ACEI類(lèi)藥物治療糖尿病腎病的臨床療效觀察[J];中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥;2012年01期

10 王春怡;陳艷芬;李衛(wèi)民;高英;葉雪蘭;;黃芪葛根湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病及胰島素抵抗的影響[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2011年16期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 秦靈靈;匙羹藤總皂苷干預(yù)KK-Ay小鼠胰島素抵抗及作用機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

2 郭登洲;益氣養(yǎng)陰消ve通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎病的干預(yù)作用及對(duì)腎素—血管緊張系統(tǒng)的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前6條

1 李媛媛;不同中藥提取物對(duì)胰島素抵抗L6細(xì)胞葡萄糖攝取率的影響及機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2014年

2 尹娟娟;黃芪丹參合用改善糖尿病腎病腎小管重吸收功能及部分機(jī)制的研究[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2013年

3 賈蕊;活血化瘀通絡(luò)方對(duì)糖尿病腎病大鼠的保護(hù)作用及對(duì)血管緊張素Ⅱ1型受體的影響實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

4 周莉;RAS功能異常在高糖引起的腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

5 賈麗榮;益氣養(yǎng)陰，祛瘀化濁中藥對(duì)糖尿病大鼠腎臟AngⅡ、ET的影響[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2009年

6 郭曉農(nóng);地黃寡糖改善胰島素抵抗的作用和機(jī)理的體外研究[D];蘭州大學(xué);2006年

，

本文編號(hào)：2677294