發(fā)布時間：2020-05-22 16:57

【摘要】：目的:本研究選用云南省名中醫(yī)的臨床經(jīng)驗方——益肺散結(jié)方(亦稱益肺逐瘀方),通過對肺纖維化小鼠模型進(jìn)行藥物干預(yù)研究,初步探討該方調(diào)節(jié)PI3K/AKT/mTOR自噬信號通路干預(yù)肺纖維化的作用機(jī)理,為肺纖維化的中醫(yī)治療提供理論依據(jù)。方法:通過霧化吸入博來霉素,復(fù)制小鼠肺纖維化模型;動物分為空白組、模型組、益肺散結(jié)方低劑量組、益肺散結(jié)方中劑量組、益肺散結(jié)方高劑量組、陽性藥物組和自噬抑制劑+中藥組,分別給予生理鹽水、益肺散結(jié)方臨床等效劑量、2倍臨床等效劑量、4倍臨床等效劑量、吡非尼酮和自噬抑制劑氯喹加益肺散結(jié)方進(jìn)行干預(yù),分7天、14天、28天3個周期進(jìn)行給藥;通過對小鼠肺組織切片HE和Masson染色觀察其病理改變,堿水解法測定小鼠肺組織中羥脯氨酸含量,Western-blot檢測LC3B、p62、p-PI3K、p-AKT、pmTOR蛋白的表達(dá)水平,RT-PCR檢測TGF-β1、beclin1、COL-Ⅰ、CO L-Ⅲ的mRNA相對表達(dá)水平,初步探討益肺散結(jié)方通過PI3K/AKT/mTOR信號通路調(diào)節(jié)自噬干預(yù)肺纖維化的作用機(jī)理。結(jié)果:1、小鼠肺組織病理結(jié)果模型組小鼠肺內(nèi)細(xì)支氣管上皮增生,管腔狹窄,管壁增厚,炎性細(xì)胞浸潤,肺泡間隔明顯增寬,肺泡結(jié)構(gòu)破壞明顯,氣管和血管周圍及肺間質(zhì)有大量膠原纖維沉積,表明肺纖維化動物模型復(fù)制成功。益肺散結(jié)方高中低劑量對小鼠肺組織病理均有不同程度改善,以臨床等效劑量組改善明顯。2、小鼠肺組織羥脯氨酸含量的變化模型組小鼠肺組織內(nèi)羥脯氨酸含量上升,差異顯著(P0.05)。給予益肺散結(jié)方干預(yù)7天、14天、28天后小鼠肺組織內(nèi)羥脯氨酸含量均有所下降,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3、小鼠肺組織TGF-β1、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的表達(dá)變化模型組小鼠肺組織內(nèi)TGF-β1、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的mRNA相對表達(dá)水平上調(diào),差異顯著(P0.05)。給予益肺散結(jié)方干預(yù)7天、14天、28天后小鼠肺組織內(nèi)TGF-β1、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的mRNA相對表達(dá)水平均有所下降,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4、小鼠肺組織LC3B、p62、beclin1、p-PI3K、p-AKT、p-mTO R的表達(dá)變化模型組小鼠肺組織中LC3B、beclin1的表達(dá)下降,p62、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的表達(dá)量升高,差異顯著(P0.05)。給予益肺散結(jié)方干預(yù)7天、14天、28天后小鼠肺組織內(nèi)LC3B、beclin1的表達(dá)升高,p62、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的表達(dá)量降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1、益肺散結(jié)方可通過激活細(xì)胞自噬,促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的分解吸收,減少膠原沉積,進(jìn)而干預(yù)肺纖維化疾病進(jìn)程。2、益肺散結(jié)方通過降低PI3K、AKT、mTOR磷酸化水平,上調(diào)LC 3B、beclin1等自噬標(biāo)記蛋白表達(dá),激活自噬,降低肺組織羥脯氨酸含量及TGF-β1、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ表達(dá),可能是該方干預(yù)肺纖維化發(fā)生發(fā)展的作用機(jī)制之一。
【圖文】：

自噬抑制劑+中藥組圖 1 給藥 7 天各組小圖 1 顯示：空白組：小鼠肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，排列整齊，氣管和血管周圍無明顯炎癥模型組：小鼠肺內(nèi)細(xì)支氣管上皮增生肺泡間隔明顯增寬。中藥治療組與模型組比較，小鼠肺壁增厚的程度有所減輕，炎性細(xì)胞浸潤自噬抑制劑+中藥組與益肺散結(jié)方低生，部分脫落，炎性細(xì)胞浸潤明顯，肺20

自噬抑制劑+中藥組圖 2 給藥 14 天各組小圖 2 顯示：空白組：小鼠肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，排列整齊，氣管和血管周圍無明顯炎癥模型組：小鼠肺內(nèi)細(xì)支氣管上皮增生肺泡間隔明顯增寬。中藥治療組與模型組比較，小鼠肺壁增厚的程度有所減輕，炎性細(xì)胞浸潤自噬抑制劑+中藥組與益肺散結(jié)方低生，，部分脫落，炎性細(xì)胞浸潤明顯，肺20
【學(xué)位授予單位】：云南中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

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本文編號：2676309