【摘要】：肉靈芝民間稱為太歲,李時(shí)珍《本草綱目》記載有肉靈芝,并把它收入“菜”部“芝”類,可食用、入藥,奉為“本經(jīng)上品”,功效為“久食,輕身不老,延年神仙”�，F(xiàn)代研究表明太歲是一種黏菌,是介于生物和真菌之間的一種原質(zhì)體生物,既有原生物特點(diǎn),也有真菌特點(diǎn),是一種“特大型罕見粘菌復(fù)合體”。肉靈芝具有抗氧化、消炎、提高機(jī)體免疫力等多重藥理作用,但其在抗腫瘤研究方面報(bào)道較少。本文以白山市林源春生物科技有限公司與本實(shí)驗(yàn)室合作人工培育的肉靈芝提取物為研究對象,分別測定了肉靈芝提取物中多糖、吡咯喹啉醌(PQQ)的含量;肉靈芝體外抗腫瘤活性研究中采用MTT法、Hocheset染色法、Annexin V-FITC/PI雙熒光染色、PI單染流式細(xì)胞術(shù)檢測肉靈芝提取物對HepG2細(xì)胞增殖、凋亡形態(tài)學(xué)、早期凋率、周期的影響;同時(shí),通過肉靈芝提取物對ICR荷瘤小鼠體重、皮下瘤重、免疫器官、巨噬細(xì)胞吞噬功能、T細(xì)胞和B細(xì)胞刺激指數(shù)、NK細(xì)胞活性、ICR小鼠脾臟免疫細(xì)胞亞群、血清IL-2、IgG、IgM的影響來探討肉靈芝提取物體內(nèi)抗腫瘤活性。對肉靈芝提取物成分分析結(jié)果表明,其中多糖含量為165.800±15.011 mg/g,PQQ含量為4.198±0.641 mg/g,與文獻(xiàn)報(bào)道的野生肉靈芝的含量相當(dāng)。體外細(xì)胞存活率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明肉靈芝提取物對HepG2和LO2細(xì)胞都有抑制作用,其中對HepG2細(xì)胞的抑制作用更強(qiáng)。對HepG2細(xì)胞經(jīng)Hoechst染色結(jié)果說明肉靈芝提取物能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Annexin V FITC/PI雙熒光染色結(jié)果說明肉靈芝提取物可引起HepG2細(xì)胞早期凋亡。PI單染結(jié)果表明肉靈芝提取物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡引起DNA量減少;體內(nèi)ICR小鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:肉靈芝提取物有減緩荷瘤鼠體重下降的趨勢,可明顯抑制荷瘤鼠腫瘤的生長,有明顯保護(hù)胸腺的作用,有改善巨噬細(xì)胞吞噬的趨勢,可顯著提高T細(xì)胞刺激指數(shù)、NK細(xì)胞活性、CD3+T淋巴細(xì)胞亞群百分比、IL-2的含量,因此肉靈芝提取物對荷瘤鼠機(jī)體免疫力具有明顯的增強(qiáng)作用。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果為人工培育肉靈芝應(yīng)用于抗腫瘤的藥物研發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【圖文】：

3.2 免疫細(xì)胞參與機(jī)體免疫應(yīng)答和免疫反應(yīng)的免疫細(xì)胞主要有淋巴細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)然殺傷細(xì)胞等。其中淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫重要的效應(yīng)細(xì)胞[39,40]。1）巨噬細(xì)胞巨噬細(xì)胞(Macrophages，m )主要通過胚胎或骨髓中的單核細(xì)胞分化而,42]。在機(jī)體免疫中具有吞噬等重要功能，是非特異性免疫系統(tǒng)中十分重要的細(xì)胞[43,44]。巨噬細(xì)胞在先天性免疫及獲得性免疫系統(tǒng)中充當(dāng)重要角色[45-48]

（8）采用 200 目細(xì)胞篩網(wǎng)對細(xì)胞進(jìn)行過濾，把各 EP 管中的細(xì)胞液轉(zhuǎn)移到對應(yīng)標(biāo)記的流式管。（9）各加入 PI 染液 400 μL，于 4℃條件下避光染色 45 分鐘。立即采用已經(jīng)開啟的流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。2.2.8 結(jié)果統(tǒng)計(jì)與分析本研究結(jié)果重復(fù)三次以上，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用 Excel 結(jié)合 GraphPad 5 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，，以 GraphPad 5 分析差異（*代表顯著性差異即 P<0.05，**代表非常顯著性差異即 P<0.01，***代表極顯著性差異 P<0.001），平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示。2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論2.3.1 苯酚-硫酸法測定肉靈芝提取物中多糖含量通過苯酚-硫酸法測定肉靈芝提取物中多糖含量，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖 2.1 所示。待測樣品的多糖含量如表 2-5 所示。
【學(xué)位授予單位】：長春理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2675016