【摘要】：目的:在鏈脲佐菌素(streptozocin,STZ)致糖尿病性周圍神經(jīng)病變(diabetic peripheral neuropathy,DPN)大鼠模型上,從緩解動物痛敏尤其改善周圍神經(jīng)的傳導功能、形態(tài)病變和神經(jīng)生化指標、細胞凋亡等方面,較為全面評價鉤吻素子對DPN的治療作用,為其開發(fā)應用提供科學依據(jù)和理論基礎。方法:(1)在STZ致DPN大鼠模型上,把SD大鼠隨機分為對照組、模型組以及模型鼠鉤吻素子(koumine)1.4 mg/kg、0.28 mg/kg處理組。自建模第35天開始灌胃給予相應藥物,每天1次,連續(xù)9天,給藥前及給藥的第3、5、7天給藥后60 min測定大鼠機械痛閾,行為學的方法觀察KM對DPN大鼠機械痛閾的影響。(2)在上述造模前、給藥前和最后一次給藥后60 min進行坐骨神經(jīng)傳導速度的測定,神經(jīng)電生理的方法觀察KM對DPN大鼠神經(jīng)傳導速度的影響。(3)在上述神經(jīng)傳導速度測定后,取大鼠坐骨神經(jīng),用甲苯胺藍染色法和透射電鏡法在光鏡和電鏡下觀察KM對DPN大鼠坐骨神經(jīng)形態(tài)結構的影響。(4)在上述神經(jīng)傳導速度測定后,取大鼠坐骨神經(jīng),用免疫組織化學法觀測KM對DPN大鼠坐骨神經(jīng)中堿性髓鞘蛋白(myelin basic protein,MBP)和神經(jīng)微絲蛋白(neurofilament protein,NFP)水平的影響。(5)在上述神經(jīng)傳導速度測定后,取坐骨神經(jīng),用TUNEL檢測法觀察鉤吻素子對DPN大鼠坐骨神經(jīng)細胞凋亡的影響。結果:(1)行為學結果顯示,KM可顯著提高DPN大鼠的機械痛閾。(2)神經(jīng)電生理學結果表明,KM能提高DPN大鼠坐骨神經(jīng)的運動神經(jīng)傳導速度。(3)甲苯胺藍染色法結果顯示,模型組大鼠坐骨神經(jīng)有髓神經(jīng)纖維整體稀疏松散,髓鞘厚薄不均、扭曲且髓鞘平均面積縮小,軸索內(nèi)出現(xiàn)致密物質(zhì),且軸索面積縮小;與模型組相比,KM治療組結構有所改善,尤其是髓鞘面積和軸索面積(P0.05)。電鏡結果顯示,模型組大鼠坐骨神經(jīng)髓鞘呈節(jié)段性厚薄不均,扭曲,形成凸起,板層結構松解,且向內(nèi)或向外膨出,伴有撕脫現(xiàn)象,軸索被擠壓,軸索內(nèi)部結構無明顯病變;KM治療組相對于模型組,髓鞘結構有所改善,部分髓鞘結構增厚,略有扭曲,板層結構小局灶性撕裂,軸索擠壓程度也得到改善。(4)免疫組織化學法結果顯示,KM可上調(diào)DPN大鼠坐骨神經(jīng)內(nèi)的MBP水平(P0.05),而對DPN大鼠坐骨神經(jīng)內(nèi)的NFP水平未有顯著影響。(5)TUNEL檢測法結果顯示,KM可對抗DPN大鼠坐骨神經(jīng)的細胞凋亡。結論:綜上所述,鉤吻素子對DPN大鼠具有顯著的鎮(zhèn)痛作用;可顯著改善DPN大鼠坐骨神經(jīng)的神經(jīng)傳導功能;顯著改善DPN大鼠坐骨神經(jīng)的病理變化;上調(diào)DPN大鼠坐骨神經(jīng)堿性髓鞘蛋白的水平;對抗DPN大鼠坐骨神經(jīng)的細胞凋亡。表明鉤吻素子對DPN具有顯著的治療作用。
【圖文】：

圖 1 大鼠神經(jīng)傳導速度的測定Figure 1 Measure of motor nerve conduction velocity in rat2.5 甲苯胺藍染色法參照史景泉等[16]的方法稍作修改，進行甲苯胺藍染色。測定大鼠坐骨神經(jīng)傳導速度結束后，50 mg/kg 水合利醛腹腔注射麻醉大鼠，迅速用剪刀剖開股二頭肌與半膜肌之間的皮膚，并沿兩股之間進行鈍性分離，讓坐骨神經(jīng)暴露，，并及時滴加固定液。用鋒利的剪刀近端從坐骨神經(jīng)切跡處剪斷，遠端從脛膝神經(jīng)分叉處剪斷，取 1cm 坐骨神經(jīng)，迅速放入戊二醛中固定。實驗步驟如下:1）前固定：將坐骨神經(jīng)置于 3%戊二醛-1.5%多聚甲醛-0.1 M PBS (pH7.2)固定液中固定 2 h 以上（4 ℃）。

圖 2 鉤吻素子對 STZ 致 DPN 大鼠血糖的影響Figure 2 Effects of koumine on blood glucose of STZ-induced DPN rats. Rats wereadministered i.p. STZ 70 mg/kg or vehicle. The day of STZ administration was regardedas day 0. Koumine (0.28 and 1.4 mg/kg) or vehicle was administered i.g. once per dayfor 9 consecutive days from post-administration day 34. Blood glucose was measuredbefore STZ administration (baseline), post-administration 72 h, post-administrationdays 34 and 43 (pre-drug and post-drug). Data indicate as mean ± S.E.M. (n=10-11 pergroup). ***P<0.001 versus control group, separate one-way ANOVA followed by LSDor Dunnett T3 test for each time point.1.2 鉤吻素子對 STZ 致 DPN 大鼠體重的影響實驗過程中，同時對大鼠的體重進行監(jiān)測。在造模前，測定大鼠的基礎體重值（181.00±0.36 g），在給藥前（第 34 天）、給藥后 3 天（第 37 天）、給藥后 5 天（第39 天）、給藥后 7 天（第 41 天）幾個時間點對大鼠的體重進行監(jiān)測�？梢妼φ战M
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;

本文編號：2674463