發(fā)布時間：2020-05-21 07:38

【摘要】：紅景天(Rhodiola rosea)為景天屬多年生草本植物,種類繁多,主要分布在新疆,有著“高原人參”的稱號,主要成分有皂苷、多糖,黃酮和維生素等。近年來藥理研究發(fā)現(xiàn)紅景天具有抗缺氧、抗疲勞、抗衰老、抗抑郁癥和免疫調(diào)節(jié)等多種作用,作為保健藥物與食品資源已得到認(rèn)可。目前研究最多的是紅景天的活性成分提取工藝和有效成分分離純化,有關(guān)其它成分和藥理研究甚少。本文以抗衰老活性為研究重點,利用HSF和HaCaT細(xì)胞紫外照射受損來建立細(xì)胞光老化衰老模型,從四種天然產(chǎn)物中篩選得到效果最佳的紅景天,從紅景天的化學(xué)成分、生物活性入手,對其有效成分進(jìn)行分離純化,重點研究抗衰老活性。遠(yuǎn)志、酸棗仁、山麥冬和紅景天粉末分別用75%乙醇加熱回流提取得到乙醇粗提物,再經(jīng)過有機溶劑分級萃取得到四個極性部位萃取物(石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相)。建立HSF和HaCaT細(xì)胞UVB照射損傷模型,確定細(xì)胞照射能量。對4個品種進(jìn)行皮膚細(xì)胞的抗光老化衰老實驗篩選,得到效果最佳的為紅景天,再針對紅景天的乙醇粗提物和四個極性部位進(jìn)行抗氧化、抗腫瘤、抗衰老實驗。在抗氧化中,以Vc為陽性對照,采用DPPH、ABTS、FRAP三種體系檢測樣品的抗氧化性,結(jié)果顯示紅景天整體樣品的抗氧化性都很強,乙酸乙酯相和正丁醇相尤為突出;抗腫瘤中,整體效果一般,低濃度時幾乎無抗癌作用;抗衰老中,紅景天乙酸乙酯相和正丁醇相的效果最明顯。綜合考慮研究結(jié)果,證實紅景天經(jīng)過分級萃取后,活性成分大都集中在乙酸乙酯相和正丁醇相中,因此后續(xù)重點研究乙酸乙酯相和正丁醇相。為全面研究紅景天的有效成分,提取紅景天四大類(皂苷、黃酮、多糖和揮發(fā)油),測定四大類的含量,分別為總皂苷含量56.82%,總黃酮含量44.14%,總多糖含量55.58%,揮發(fā)油提取率為0.12%。對四大類進(jìn)行了抗氧化、抗腫瘤和抗衰老活性的研究,結(jié)果表明:抗氧化活性中,黃酮和皂苷的抗氧化性較好于多糖和揮發(fā)油;抗腫瘤活性中,四者的效果都不明顯;在抗衰老活性中,皂苷的效果是最佳的,且好于陽性對照,多糖和揮發(fā)油效果一般。利用硅膠柱、ODS柱、凝膠柱等分離手段,對紅景天的乙酸乙酯相和正丁醇相進(jìn)行分離純化,得到四個單體化合物,結(jié)合現(xiàn)代波譜方法(~1H-NMR和~(13)C-NMR)進(jìn)行物質(zhì)鑒定結(jié)構(gòu),分別為:山奈酚、熊果苷、紅景天苷和紅景天素。探討了四個單體的抗氧化性、抗腫瘤活性和抗衰老活性,結(jié)果顯示單體的抗氧化性都較強,其中山奈酚的效果好于陽性對照,熊果苷效果和陽性對照相當(dāng),順序為山奈酚熊果苷紅景天素紅景天苷;抗腫瘤活性中,低濃度時單體的效果和紅景天整體的效果一致,對癌細(xì)胞無殺害作用,高濃度時,紅景天素表現(xiàn)出較強的抗肝癌和抗肺癌細(xì)胞能力,較強于紅景天整體;在抗光老化衰老實驗中,單體都表現(xiàn)出較強的光老化修復(fù)能力,其中山奈酚和熊果苷的能力好于陽性對照,紅景天苷和紅景天素的修復(fù)能力稍弱于陽性對照,整體的效果都很強,值得深入研究。最后以單體作用于受損傷的HSF細(xì)胞為研究對象,測量細(xì)胞上清液中的炎癥細(xì)胞因子,進(jìn)一步確定細(xì)胞光老化衰老的機制。結(jié)果顯示:模型組和空白組相比,一定量的UVB照射確實會引起炎癥細(xì)胞因子增多,模型組細(xì)胞上清液中IL-6和TNF-α的含量顯著多于空白組;與模型組相比,藥物組細(xì)胞上清液中的IL-6和TNF-α隨著濃度的增大而逐漸減少,說明單體確實能減少炎癥細(xì)胞因子IL-6和TNF-α的釋放,這可能是單體起抗光老化衰老的作用的第一步。通過減少炎癥細(xì)胞因子的釋放量來阻礙其基因蛋白的表達(dá)而起到抗衰老作用.
【圖文】：

A:遠(yuǎn)志；B：酸棗仁；C：山麥冬；D：紅景天圖 2-1 四種天然產(chǎn)物乙醇提取物有機溶劑分級萃取實驗流程圖A: Polygala tenuifolia; B: Semen Zizyphi Spinosae; C: Liriopemuscari Bailey; D: Rhodiola roseaFig. 2-1 The different organic solvent on ethanol extractive of four kinds of TCM.2.2 衰老細(xì)胞建模衰老模型是利用紫外照射進(jìn)行，研究需要適宜的模型，對模型采用科學(xué)的干預(yù)方法成為影響衰老研究的重要因素[57]。角質(zhì)細(xì)胞和纖維細(xì)胞是皮膚衰老中涉及的主要細(xì)胞，本實驗采用 HSF 和 HaCaT 這兩種細(xì)胞建立細(xì)胞體外衰老模型，以此來評價 4 種天然產(chǎn)物的抗衰老效果。C

第二章 紅景天的篩選及乙醇提取物和四個極性部位的制備和活性研究胞實驗設(shè) 3 個組，分別為陽性對照組（上述確定能量照射），實驗藥物組 (確定能量照射，，加含不同濃度樣品的培養(yǎng)液：25，50，100，200，400，800μg/mL)，空白照射組（上述確定能量照），每組設(shè) 3 個平行。利用 MTT 法檢測樣品對細(xì)胞的修復(fù)效果：樣品修復(fù)效果 R (%) = 實驗藥物組 OD/空白對照組 OD×100%當(dāng) R ＞ 100%，說明藥物對細(xì)胞損傷起到修復(fù)作用；當(dāng) R ＝ 100%，說明藥物對細(xì)胞損傷沒有作用；當(dāng) R ＜ 100%，說明藥物對細(xì)胞起傷害作用。2.2.5 結(jié)果與討論2.2.5.1 測定樣品細(xì)胞毒性BA
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2673934