【摘要】：類(lèi)葉牡丹(Caulophyllum robustum Maxim,CRM)為小檗科(Berberidaceae)紅毛七屬植物的根及根莖,又稱(chēng)紅毛七、葳嚴(yán)仙和搜山貓等,在民間具有悠久的歷史。據(jù)《中藥大詞典》記錄,其具有理氣止痛和祛風(fēng)活血的功效,民間用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、扁桃體炎及跌打損傷等癥,且療效顯著。本文以類(lèi)葉牡丹有效部位(CRME)為研究對(duì)象,以膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)為藥效學(xué)模型,選用特征性藥效指標(biāo)進(jìn)行研究,運(yùn)用代謝組學(xué)研究方法考察了 CRME對(duì)CIA大鼠的尿液和血漿代謝譜的干預(yù)作用,基于內(nèi)源性代謝物水平找到CRME治療RA的潛在作用靶點(diǎn)和通路。1、類(lèi)葉牡丹有效部位干預(yù)CIA模型小鼠的藥效學(xué)研究本文采用牛Ⅱ型膠原誘導(dǎo)DBA/1小鼠建立CIA模型,分別以炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β和PGE2的含量作為量化指標(biāo),小鼠體重變化、足爪腫脹度、關(guān)節(jié)炎評(píng)分、免疫臟器指數(shù)、關(guān)節(jié)組織病理學(xué)和免疫組化結(jié)果作為輔助衡量指標(biāo),對(duì)低、中、高三個(gè)劑量的CRME抗炎和免疫作用進(jìn)行評(píng)價(jià)。發(fā)現(xiàn)3種不同劑量的CRME均能顯著改善CIA小鼠的關(guān)節(jié)炎癥狀,且高劑量的CRME抗炎作用優(yōu)于雷公藤多苷片和甲氨蝶呤陽(yáng)性藥。CRME還通過(guò)抑制炎性細(xì)胞因子而具有一定的免疫抑制作用。因此,高劑量的CRME的抗炎和免疫效果最好。2、類(lèi)葉牡丹有效部位干預(yù)CIA模型大鼠的尿液代謝組學(xué)研究以尿液作為生物樣本,采用UPLC-TOF-MS與主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判別分析(PLS-DA)相結(jié)合的代謝組學(xué)方法研究CRME干預(yù)CIA的作用機(jī)制。共鑒定了 56個(gè)與CIA相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物,20條由CIA擾動(dòng)的代謝通路。CRME干預(yù)后,16個(gè)差異代謝物發(fā)生了變化,包括水平上升的2-吲哚羧酸、對(duì)苯二酚、馬尿酸和苯甲酸,水平下降的17β-雌二醇-3-葡萄糖醛酸苷、膽甾烷醇、三羥基膽甾烷、豆甾烷醇、酪氨酸、D-核糖、N1-甲基-4-吡啶酮-3-甲酰胺、吲哚酚、2,4-二氨基丁酸、單異丁基鄰苯二甲酸、α-CEHC和7-羥基-3-氧代膽酸。這些生物標(biāo)志物分別涉及色氨酸代謝、酪氨酸代謝、能量代謝、膽固醇代謝和維生素代謝。給藥后這些生物標(biāo)志物的變化說(shuō)明CRME是通過(guò)調(diào)節(jié)氨基酸代謝、能量代謝和脂質(zhì)代謝來(lái)發(fā)揮治療作用。3、類(lèi)葉牡丹有效部位干預(yù)CIA模型大鼠的血漿代謝組學(xué)研究以血漿作為生物樣本,采用UPLC-TOF-MS與PCA和PLS-DA相結(jié)合的代謝組學(xué)方法研究CRME干預(yù)CIA的作用機(jī)制。共鑒定了 34個(gè)與CIA相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物,17條由CIA擾動(dòng)的代謝通路。CRME干預(yù)后,13個(gè)差異代謝物發(fā)生了變化,包括水平上升的11b-羥基孕酮、磷脂酰乙醇胺(PE)、3,4-二氫呋喃酮、溶血磷脂酰乙醇胺(LysoPE)、溶血卵磷脂(LysoPC)、四氫葉酸、磷脂酰肌醇(PI)、二十碳三烯酸和9-脫氧-亞甲基-前列腺素E2,水平下降的磷脂酰膽堿(PC)和磷脂酰絲氨酸(PS)。這些生物標(biāo)志物分別涉及雌激素代謝、甘氨酸,絲氨酸和蘇氨酸代謝,甘油磷脂代謝,花生四烯酸代謝和不飽和脂肪酸的生物合成途徑。給藥后這些生物標(biāo)志物的變化說(shuō)明CRME是通過(guò)調(diào)節(jié)氨基酸代謝和脂肪酸代謝來(lái)發(fā)揮治療作用。綜上所述,CRME對(duì)CIA模型小鼠具有抗炎和免疫抑制作用,代謝組學(xué)研究結(jié)果說(shuō)明CRME是通過(guò)調(diào)節(jié)氨基酸代謝、維生素代謝、能量代謝和脂質(zhì)代謝通路治療RA,這些潛在靶點(diǎn)通路可以為CRME抗RA作用機(jī)制提供一個(gè)新的解釋。
【圖文】：

圖２－１邋（Ａ）各組小鼠右后肢狀態(tài)圖；（Ｂ）關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分；（Ｃ）右后肢足爪腫脹率逡逑變化；（Ｄ）ＣＩＡ小鼠體重的變化率；（Ｅ）臟器指數(shù)．逡逑注：（ａ）Ｎｏｒｍａｌ：空白組（ｂ）Ｖｅｈｉｃｌｅ：模型組（ｃ）ＭＴＸ：甲氦蝶呤組（ｄ）Ｔｒｉ：雷公藤多苷逡逑片組（ｅ）Ｌｇｒｏｕｐ：ＣＲＭＥ高劑量組．（Ｉ邋土邋ｓ，ｎ＝６）（與空白組相比？？邋＃Ｐ＜０．０１；與模型組逡逑相比：＊Ｐ＜０．０５，邋＊＊Ｐ＜０．０１；與邋ＭＴＸ邋相比：ＡＰ＜０．０５，ＡＡＰ＜０．０１邋ａｎｄ邋ＡＡＡＰ＜０．００１；逡逑與邋Ｔｒｉ邋相比：＊Ｐ＜０．０５，邋☆☆Ｐ＜０．０１邋ａｎｄ邋＊☆☆？＜０．００１）逡逑Ｆｉｇ．２－１邋（Ａ）Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｎ邋ＣＲＭＥ邋ｏｎ邋ｄｉｓｅａｓｅ邋ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ邋ｉｎ邋ｈｉｎｄ邋ｐａｗ邋ｓｗｅｌｌｉｎｇ邋ｉｎ邋ｍｉｃｅ逡逑ｗｉｔｈ邋ＣＩＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ邋ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．（Ｂ）ａｒｔｈｒｉｔｉｃ邋ｉｎｄｅｘ，（Ｃ）ｓｗｅｌｌｉｎｇ邋ｄｅｇｒｅｅ，邋（Ｄ）邋ｂｏｄｙ邋ｗｅｉｇｈｔ％逡逑ａｎｄ邋（Ｅ）邋ｖｉｓｃｅｒａｌ邋ｉｎｄｅｘ．（ａ）邋Ｎｏｒｍａｌ邋ｇｒｏｕｐ，邋（ｂ）邋ＣＩＡ＋ｖｅｈｉｃｌｅ，邋（ｃ）邋ＣＩＡ＋ＭＴＸ，邋（ｄ）逡逑ＣＩＡ＋Ｔｒｉ，邋ａｎｄ邋（ｅ）邋ＣＩＡ＋Ｈ邋ｇｒｏｕｐ邋（９９．４邋ｍｇ／ｋｇ）．逡逑２４逡逑

ＣＩＡ邋ｍｉｃｅ．（Ａ）ＴＮＦ－ａ；（Ｂ）ＩＬ－６；（Ｃ）ＩＬ－ｉｐ邋ａｎｄ邋（Ｄ）ＰＧＥ２．逡逑２．３．４各組小鼠免疫組化的檢測(cè)結(jié)果逡逑如圖２－４邋（Ａ）所示，，棕褐色或棕褐色顆粒是ＮＦ－ｋＢ邋ｐ６５蛋白陽(yáng)性表達(dá)逡逑的部分。圖２－４邋（Ｂ）顯示，ＮＦ－ｋＢ邋ｐ６５蛋白在模型組中的陽(yáng)性表達(dá)率高于逡逑各給藥組（Ｐ＜0．0５）。此外，Ｈ組ＣＩＡ小鼠ＮＦ－ＫＢｐ６５蛋白的ＩＯＤ體積為逡逑１３２５．１８，低于陽(yáng)性藥物組（Ｔｒｉ：１７６５．４３，ＭＴＸ：１７５１．４２），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意逡逑義（Ｐ＜０＿００１邋）。逡逑２６逡逑
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2673879