【摘要】：藤黃(Gamboge)系藤黃科植物藤黃樹所分泌的樹脂。新藤黃酸(Gambogenic acid,GNA)是從藤黃中分離得到的重要成分。GNA抗癌譜廣、抗癌活性強(qiáng)、在體內(nèi)外具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性。然而,其血管刺激性大、半衰期短、水溶性差缺點(diǎn)限制了其臨床應(yīng)用。目的:本課題采用PEG化脂質(zhì)體包裹GNA,以期減小GNA的血管刺激性、延長(zhǎng)半衰期、增強(qiáng)體內(nèi)外抗腫瘤活性。方法:(1)本課題采用注入法制備新藤黃酸PEG化脂質(zhì)體(GNA-PEG-LPs),利用單因素考察和正交試驗(yàn)優(yōu)化處方與工藝;從外觀形態(tài)、包封率、載藥量、粒徑分布、DSC、Zeta電位、穩(wěn)定性試驗(yàn)、體外釋放試驗(yàn)等方面進(jìn)行GNA-PEG-LPs表征和質(zhì)量評(píng)價(jià);(2)選用人肺癌A549細(xì)胞、人胃癌SGC-7901細(xì)胞、人肝癌HepG2細(xì)胞,通過MTT實(shí)驗(yàn)、DAPI染色、Annexin V-FITC/PI雙染流式細(xì)胞儀檢測(cè)、Western blot等試驗(yàn)考察GNA-PEG-LPs的細(xì)胞藥效學(xué);(3)采用家兔耳緣靜脈血管刺激性試驗(yàn)、溶血性試驗(yàn)來評(píng)價(jià)GNA-PEG-LPs的安全性;(4)采用LLC荷瘤小鼠模型,評(píng)價(jià)GNA-PEG-LPs的體內(nèi)抗腫瘤藥效學(xué),對(duì)腫瘤組織進(jìn)行免疫組化檢測(cè)相關(guān)凋亡蛋白的變化,并對(duì)給藥后小鼠主要器官進(jìn)行HE染色初步評(píng)估GNA-PEG-LPs的安全性;(5)采用SD大鼠單次給藥,比較GNA和GNA-PEG-LPs在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)差異。結(jié)果:(1)GNA-PEG-LPs最優(yōu)工藝處方的包封率為(88.13±1.31)%,載藥量為(3.72±0.04)%;在透射電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所得的脂質(zhì)體為規(guī)則的球形,GNA-PEG-LPs的平均粒徑為(90.13±0.16)nm,PDI值為(0.092±0.003),Zeta電位為(-22.10±0.20)mV;DSC分析結(jié)果表明有新物相生成;物理穩(wěn)定性考察結(jié)果表明GNA-PEG-LPs在4℃下放置4周,GNA-PEG-LPs的包封率、粒徑等基本穩(wěn)定;另外體外釋放的結(jié)果表明GNA-PEG-LPs具有緩釋的性質(zhì)。(2)體外細(xì)胞藥效試驗(yàn)結(jié)果表明空白載體基本不對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性。與GNA溶液相比,GNA-PEG-LPs對(duì)A549、SGC-7901和HepG2細(xì)胞抑制作用和促進(jìn)其凋亡的藥效更加明顯,并且上調(diào)Bax,caspase-3,下調(diào)Bcl-2蛋白的趨勢(shì)更加明顯,表明GNA-PEG-LPs很可能通過線粒體途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。(3)耳緣靜脈血管刺激性試驗(yàn)結(jié)果顯示GNA-PEG-LPs血管刺激性較小,溶血實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),當(dāng)GNA-PEG-LPs的脂質(zhì)濃度小于2.28 mg/mL時(shí),明顯的溶血現(xiàn)象不會(huì)產(chǎn)生。(4)體內(nèi)抗腫瘤藥效試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),與GNA原料藥相比,GNA-PEG-LPs可以顯著抑制LLC荷瘤小鼠的腫瘤生長(zhǎng)。免疫組化研究發(fā)現(xiàn)GNA-PEG-LPs上調(diào)了LLC荷瘤小鼠腫瘤組織Bax,caspase-3蛋白的表達(dá),下調(diào)了Bcl-2蛋白的表達(dá)。HE染色表明GNA的給藥劑量(2mg/kg,隔日給藥)對(duì)小鼠的主要器官(心、肝、脾、肺、腎)無明顯影響,同時(shí)也說明了GNA-PEG-LPs的安全性。(5)采用HPLC-UV系統(tǒng),建立了GNA生物樣品的分析方法。比較了單次給藥后GNA和GNA-PEG-LPs的藥動(dòng)學(xué)差異。結(jié)果表明PEG化脂質(zhì)體包裹GNA后,半衰期延長(zhǎng)了2.84倍,AUC增加了2.97倍。結(jié)論:本研究成功制備了新藤黃酸PEG化脂質(zhì)體,可以延長(zhǎng)半衰期,減小血管刺激性,在體內(nèi)外顯示較強(qiáng)的抗腫瘤藥效,是具有潛力的安全有效的納米載體。
【圖文】：

圖 1 圖文摘要：新藤黃酸 PEG 脂質(zhì)體的制備、體內(nèi)外抗腫瘤藥效學(xué)、初步藥動(dòng)學(xué)研究Fig.1 Graphical abstract: Preparation, in vitro/in vivo antitumor activity and preliminarypharmacokinetics of Gambogenic acid-loaded PEGylated liposomes

1 GNA HPLC 色譜圖：A: 空白 PEG 化脂質(zhì)體; B: GNA; C:GNA-PEGPLC chromatograms of GNA: A: Blank PEG-LPs; B: GNA; C: GNA-P曲線的建立取儲(chǔ)備液適量，用甲醇稀釋適當(dāng)倍數(shù)即得濃度為 0.02、0.05.00 和 10.00 μg/mL 的系列對(duì)照品溶液，分別過 0.45 μm 濾膜件進(jìn)樣，，測(cè)定峰面積。重復(fù)測(cè)定多次（n=5）。以峰面積(y圖進(jìn)行線性回歸，回歸方程：y=39656x-243.86，(R2=0.999在 0.02~10.00 μg/mL，峰面積和濃度的線性關(guān)系良好。度試驗(yàn)取對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用甲醇定容，配制低、中、高（0.05
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R283.6;R285

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本文編號(hào)：2672336