發(fā)布時(shí)間：2020-05-20 03:16

【摘要】：沙棘Hippophae thamnoides L.,胡頹子科沙棘屬植物,含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和功效成分,具有健脾消食,止咳祛痰,活血散瘀等功效。對(duì)于沙棘中功效成分的研究,文獻(xiàn)中已有報(bào)導(dǎo),發(fā)現(xiàn)的功效成分包括多糖類、黃酮類、維生素類、脂類以及三萜類和甾醇類等。傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)只能依據(jù)功效成分對(duì)照品對(duì)沙棘進(jìn)行檢測(cè),對(duì)于沒(méi)有對(duì)照品的功效成分,則無(wú)法識(shí)別。由于對(duì)照品價(jià)格昂貴,每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的種類有限,所以目前劉于沙棘中功效成分的研究還不夠全面。本研究通過(guò)充分利用現(xiàn)代色譜及高分辨質(zhì)譜技術(shù),發(fā)展了一種快速、準(zhǔn)確、高通量檢測(cè)鑒定技術(shù),對(duì)沙棘樣品果、葉、莖中的功效成分進(jìn)行了全面鑒定,并開發(fā)了一種五環(huán)三萜類及結(jié)構(gòu)類似物的非靶標(biāo)分析方法,成功用于沙棘樣品中未知五環(huán)三萜的檢測(cè)確證中。該方法為今后充分開發(fā)利用沙棘資源提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù),也為沙棘相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究奠定了基礎(chǔ)。全文共分五章,簡(jiǎn)述如下:第一章介紹了沙棘的產(chǎn)地,藥理作用及其功效成分,其中三萜類作為主要功效成分之一,介紹了其定義及分類,并對(duì)“三萜家族”中重要的五環(huán)三萜類功效成分的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)展進(jìn)行了總結(jié)。第二章為了了解沙棘果莖葉功效成分的整體差異,本研究應(yīng)用超高效液相色譜-四極桿靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC-Q-Exactive)結(jié)合中藥成分高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)(OTCML),對(duì)沙棘果莖葉的化學(xué)成分進(jìn)行了快速鑒定與比較分析。色譜柱為Hypersil GOLD aQ 色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.9 μ m),流動(dòng)相為0.1%甲酸乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)梯度洗脫,流速為0.3mL/min,高分辨質(zhì)譜采用電噴霧離子源(ESI)正、負(fù)離子同時(shí)掃描模式。結(jié)果共鑒定出沙棘中102個(gè)功效成分,包括苷類18個(gè),黃酮類21個(gè),萜類18個(gè),苯丙素類13個(gè),生物堿類6個(gè),揮發(fā)成分14個(gè),多酚12個(gè);其中有17個(gè)化合物是在沙棘中首次發(fā)現(xiàn),對(duì)沙棘果莖葉比較表明這些功效成分在不同部位分布有明顯差異。第三章建立了同時(shí)測(cè)定沙棘中25種五環(huán)三萜類化合物的超高效液相色譜-四極桿靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜聯(lián)用(UPLC-Q-Exactive)的分析方法。沙棘樣品經(jīng)優(yōu)化提取,過(guò)濾膜后經(jīng)Acquity UPLC Hss T3色譜柱(2.1×50mm,1.8 μm)分離,對(duì)流動(dòng)相組成、緩沖液pH值、以及質(zhì)譜各種參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化和探討。結(jié)果表明25種五環(huán)三萜類化合物在各自的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)均大于0.9912,檢出限0.3-1.5 ng/ml,定量限1.0-5.0 ng/ml。回收率80.04-104.08%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差3.01-9.35%(n=6)。本方法已成功應(yīng)用于不同產(chǎn)地沙棘樣品的五環(huán)三萜類化合物同時(shí)測(cè)定及定量分析。第四章開發(fā)了一種快速簡(jiǎn)單的檢測(cè)方法來(lái)精準(zhǔn)檢測(cè)鑒定五環(huán)三萜及結(jié)構(gòu)類似物,主要包括羽扇豆烷型、齊墩果烷型和熊果烷型。本方法基于超高效液相色譜-四極桿靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),運(yùn)用多重中性丟失碎片掃描結(jié)合結(jié)構(gòu)碎片標(biāo)志物鑒定的方法,以沙棘果樣品為檢測(cè)對(duì)象。具體包括以下3大步驟:一、利用已知25種五環(huán)三萜類標(biāo)準(zhǔn)品在正負(fù)離子模式下的二級(jí)質(zhì)譜信息,推導(dǎo)出的此類結(jié)構(gòu)的質(zhì)譜裂解規(guī)律;二、統(tǒng)計(jì)分析得到此類結(jié)構(gòu)在質(zhì)譜中特有的8個(gè)中性丟失碎片和21個(gè)結(jié)構(gòu)碎片標(biāo)志物;三、通過(guò)多重中性丟失碎片掃描在沙棘果樣品中發(fā)現(xiàn)了 15種新的五環(huán)三萜類化合物,然后通過(guò)結(jié)構(gòu)碎片標(biāo)志物信息來(lái)表征新化合物的結(jié)構(gòu)。該方法能有效地用于其他中草藥或食品中五環(huán)三萜類化合物的檢測(cè)鑒別。第五章對(duì)藥食同源產(chǎn)品質(zhì)量控制和功效成分全面檢測(cè)鑒定當(dāng)前亟待解決的問(wèn)題及未來(lái)非靶標(biāo)檢測(cè)研究方向進(jìn)行了展望。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R284.1;O657.63

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