【摘要】：目的:通過(guò)觀察黃芪多糖及聯(lián)合順鉑對(duì)小鼠Lewis肺癌移植瘤生長(zhǎng)、線粒體凋亡相關(guān)蛋白Caspase 3、Cyt C、Omi/HtrA2、Smac/Diablo、XIAP及線粒體超微結(jié)構(gòu)的影響,從線粒體介導(dǎo)途徑探討黃芪多糖抑瘤、抗瘤的機(jī)制。方法:90只C57BL/6J小鼠,隨機(jī)分為9組,正常組、模型組、APS低、中、高劑量組、DDP組、APS聯(lián)合DDP低、中、高劑量組,每組10只。除正常組外,其余80只均接種LLC(1×10~7mL)于右前肢腋窩皮下,造模為荷瘤小鼠。造模次日起,治療組的小鼠給予腹腔注射0.3mL藥物。DDP每周注射1次,其余藥物每天1次,正常組和模型組注射等體積生理鹽水,治療連續(xù)20d,并于第21天處死。觀察指標(biāo)(1)各組小鼠的一般情況;(2)體質(zhì)量及瘤重;(3)HE染色觀察移植瘤小鼠肺組織、腫瘤組織病理學(xué)變化;(4)免疫組化法檢測(cè)移植瘤細(xì)胞中的Caspase 3、Cyt C、Omi/HtrA2、Smac/Diablo、XIAP的表達(dá);(5)Western blot檢測(cè)移植瘤細(xì)胞中的Caspase 3及Smac/Diablo蛋白的表達(dá);(6)透射電鏡觀察腫瘤組織線粒體超微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果:(1)與模型組相比,DDP組小鼠的體質(zhì)量下降明顯,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組相比,3 mg/kg DDP聯(lián)合(100、200)μg/mL APS組的荷瘤小鼠腫瘤質(zhì)量減輕顯著,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與DDP組相比,3 mg/kg DDP聯(lián)合(100、200)μg/m L APS的荷瘤小鼠腫瘤質(zhì)量減輕,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)肺組織HE顯示:正常組肺組織結(jié)構(gòu)完整;模型組的肺泡結(jié)構(gòu)消失,肺充血嚴(yán)重;DDP組肺泡結(jié)構(gòu)較為完整;3 mg/kg DDP聯(lián)合(100、200)μg/mL APS組肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)較為完整,肺局部充血,肺泡隔增厚。腫瘤組織HE顯示:模型組的腫瘤細(xì)胞核大,腫瘤細(xì)胞染色深,周?chē)鷽](méi)有壞死;DDP組的腫瘤細(xì)胞染色深,腫瘤細(xì)胞大片壞死和核固縮,碎裂;200μg/m L APS組聯(lián)合3 mg/kg DDP組可見(jiàn)細(xì)胞壞死和核碎裂,固縮。(3)免疫組化表明:與模型組相比,各治療組的腫瘤組織中Caspase 3、Cyt C、Smac/Diablo、Omi/HtrA2蛋白表達(dá)顯著升高,與DDP組相比,DDP、3 mg/kg聯(lián)合DDP200μg/mL APS組表達(dá)最明顯,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05或P0.01)。XIAP蛋白在模型組中呈陽(yáng)性高表達(dá);DDP及3 mg/kg DDP聯(lián)合200μg/mL APS組的XIAP蛋白呈陰性表達(dá),與模型組組比,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05或P0.01)。(4)Western blot檢測(cè)提示,與模型組相比治療組Caspase 3、Smac/Diablo均有表達(dá),其中DDP、200μg/mL APS聯(lián)合3 mg/kg DDP組Caspase 3、Smac/Diablo表達(dá)顯著增強(qiáng)。(5)電鏡下觀察線粒體形態(tài)的變化:模型組:腫瘤細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)清晰,可見(jiàn)線粒體嵴樣結(jié)構(gòu),無(wú)腫脹、固縮,排列整齊,膜外形基本完整,線粒體密集,無(wú)線粒體空泡化結(jié)構(gòu)。細(xì)胞核染色質(zhì)分布均勻,核大,胞漿少;APS(50、100、200)μg/mL組:腫瘤細(xì)胞核染色質(zhì)聚集,核大,胞漿少,胞漿內(nèi)線粒體腫脹;DDP組:胞漿內(nèi)線粒體腫脹,線粒體排列紊亂,膜模糊不清,嵴樣結(jié)構(gòu)錯(cuò)亂并消失,線粒體疏松溶解,線粒體內(nèi)可見(jiàn)空泡形成;3 mg/kg DDP聯(lián)合200μg/m L APS組:電鏡下觀察到線粒體的數(shù)目增加,細(xì)胞核染色質(zhì)發(fā)生聚集,部分細(xì)胞出現(xiàn)凋亡,核大,胞漿少,胞漿內(nèi)線粒體腫脹,線粒體固縮,嵴樣結(jié)構(gòu)錯(cuò)亂并消失,膜模糊不清,部分膜發(fā)生破裂,線粒體疏松溶解,線粒體內(nèi)可見(jiàn)空泡形成。結(jié)論:APS及聯(lián)合化療藥物DDP對(duì)小鼠移植瘤具有一定的抑制作用;APS及聯(lián)合化療藥物DDP抑制小鼠移植瘤生長(zhǎng)的機(jī)制可能與提高線粒體凋亡途徑相關(guān)蛋白Caspase3、Cyt C、Smac/Diablo、Omi/HtrA2的表達(dá),降低蛋白XIAP的表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

圖 1 線粒體途徑凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑小細(xì)胞肺癌屬于中醫(yī)癌病范疇，目前中醫(yī)學(xué)者普遍認(rèn)為癌病發(fā)生的主要病理基內(nèi)虛，臟腑陰陽(yáng)氣血失調(diào)。而中醫(yī)素有“久病多虛”“久病致虛”之論。經(jīng)研究證非小細(xì)胞肺癌的發(fā)展過(guò)程中，隨病情進(jìn)展，正氣逐漸衰弱，在治療中應(yīng)注意扶]。黃芪歸肺、脾經(jīng)，既可補(bǔ)本臟之氣，又可兼補(bǔ)其母臟，因此在非小細(xì)胞肺癌運(yùn)用頗多。黃芪首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，味甘，性微溫，歸脾、肺經(jīng)，為補(bǔ)氣有補(bǔ)氣升陽(yáng)、固表止汗、利水消腫、生精養(yǎng)血、行滯通痹、脫毒排膿、斂瘡生[69]。黃芪多糖是其最重要的天然有效活性成分，研究指出，，多糖（polysaccharid富含醛基或酮基的天然高分子聚合物，由10個(gè)以上的單糖通過(guò)糖苷鍵連接而成實(shí)驗(yàn)證實(shí)，含醛基或酮基的化學(xué)治療是應(yīng)用于惡性腫瘤全身治療的主要方法大部分抗腫瘤化學(xué)藥物在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，也嚴(yán)重?fù)p傷了正常細(xì)胞。而近究發(fā)現(xiàn)，多糖具有顯著的抗腫瘤活性并且對(duì)人體的毒副作用相對(duì)較小，對(duì)多糖性研究在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外專(zhuān)家學(xué)者研究的熱點(diǎn)，現(xiàn)已應(yīng)用于臨床的有

從線粒體介導(dǎo)途徑探討黃芪多糖聯(lián)合順鉑對(duì)小鼠 Lewis 肺癌移植瘤生長(zhǎng)的影響A 為模型組，B 為 50 μg/mLAPS 處理組，C 為 100 μg/mLAPS 處理組，D 為 200 μg/mLAPS處理組，E 為 6 mg/kg DDP 處理組，F(xiàn) 為 3 mg/kg DDP 聯(lián)合 50 μg/mLAPS 處理組，G 為 3 mg/kgDDP 聯(lián)合 100 μg/mLAPS 處理組，H 為 3 mg/kg DDP 聯(lián)合 200 μg/mLAPS 處理組。
【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2671902