【摘要】：目的:研究大鼠肢體-缺血再灌注損傷(LI-RI)過程中骨骼肌組織中Wnt-5a、蛋白激酶C(protein kinase C PKC)的表達(dá)變化及桃紅四物液預(yù)處理后對(duì)其表達(dá)的影響,進(jìn)一步從分子水平探討導(dǎo)致LI-RI的病理機(jī)制及桃紅四物液對(duì)LI-RI的治療作用。方法:78只SPF級(jí)健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組(M-IR組)、桃紅四物液組(T-IR組)以及磷脂酶C阻斷劑組(P-IR組)等四組,其中正常組大鼠不造成缺血處理,其余M-IR組、T-IR組及P-IR組在造模成功后按恢復(fù)灌注后0h、2h、4h、8h等時(shí)間點(diǎn)分組。取材后采用HE染色、熒光定量PCR檢測(cè)等分子生物學(xué)技術(shù)觀察大鼠腓腸肌形態(tài)變化及檢測(cè)腓腸肌組織中Wnt-5a、PKC的表達(dá)變化,并對(duì)檢測(cè)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果:除正常組外,M-IR組、T-IR組及P-IR組大鼠HE染色結(jié)果顯示均出現(xiàn)腓腸肌纖維不同程度增粗、水腫,纖維間間隙較正常明顯增寬并結(jié)構(gòu)紊亂,同時(shí)伴有不同程度炎性滲出及細(xì)胞凋亡。與正常組相比較,M-IR組、T-IR組及P-IR組大鼠腓腸肌組織中Wnt-5a、PKC的mRNA表達(dá)均不同程度升高,組間對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且T-IR組及P-IR組中Wnt-5a、PKCmRNA的相對(duì)表達(dá)量在恢復(fù)灌注后相同時(shí)間點(diǎn)較M-IR組均降低(P0.05)。結(jié)論:1.肢體缺血-再灌注損傷大鼠骨骼肌組織中Wnt-5a、PKC的表達(dá)均不同程度升高,骨骼肌損傷嚴(yán)重,表明LI-RI大鼠骨骼肌組織損傷可能與Wnt-5a、PKC的高表達(dá)密切相關(guān)。2.桃紅四物液能夠降低LI-RI大鼠骨骼肌組織中Wnt-5a、PKC的高表達(dá),從而減輕LI-RI程度,對(duì)骨骼肌具有一定的保護(hù)作用。
【圖文】：

2.2 造模方法實(shí)驗(yàn)前所有大鼠均置于室溫環(huán)境下飼養(yǎng) 1 周。正常對(duì)照組大鼠不阻斷血流，其余 72 只作為實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物參照張連元[16]《生理科學(xué)試驗(yàn)教材》中的造模方法，根據(jù)本課題組前期實(shí)驗(yàn)發(fā)表論文[17]中的造模步驟。利用 50ml 注射器及直徑為0.8cm 和 1.0cm 大小的橡皮圈各一個(gè)自制成模具（圖 1a），前期研究證實(shí)橡皮圈所產(chǎn)生的壓力足以造成骨骼肌缺血。將橡皮圈套在實(shí)驗(yàn)大鼠右后肢大腿根部復(fù)制LI-RI，事先剪去大腿根部毛發(fā)及造模后橡皮圈處系扎尼龍?jiān)鷰Х乐够�。�?dāng)大鼠右下肢掌趾皮膚顏色變得蒼白淤紫、皮溫發(fā)涼即為右下肢血流成功阻斷，表示造模成功（圖 1d）；缺血阻斷血流時(shí)間為 4 小時(shí)，注意造模時(shí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保溫，避免低溫等對(duì)缺血肢體造成影響及造成大鼠死亡；同時(shí)注意避免大鼠咬斷橡皮筋導(dǎo)致造模失敗。到時(shí)間后切斷橡皮圈恢復(fù)血流灌注，大鼠右后肢掌趾恢復(fù)紅潤(rùn)溫暖即為血流復(fù)灌成功標(biāo)志。

第二部分 結(jié)果與分析1、大鼠腓腸肌形態(tài)學(xué)觀察除正常組大鼠外，其余組均以恢復(fù)灌注后 2 小時(shí)這一相同時(shí)間點(diǎn)觀腸肌形態(tài)。正常組：腓腸肌顏色紅潤(rùn)，肌肉紋理清晰，肌纖維分布均勻，肌肉模型組、桃紅四物液組及 PLC 阻斷劑組與正常組相比可見大鼠腓腸肌明度腫脹增粗，顏色明顯蒼白、伴有淤紫,尤以模型組大鼠明顯，肌肉紋結(jié)構(gòu)模糊，肌纖維增粗，肌肉彈性較正常明顯減弱，同時(shí)伴有少量組織死表現(xiàn)。（見圖 2 示）
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2671815