【摘要】：T2DM的發(fā)生與HPA軸的功能失調(diào)有關,以糖脂代謝異常以及胰島素抵抗為特征。目前治療T2DM,多采用口服降糖藥或注射INS以維持血糖水平,中藥治療也多集中于調(diào)節(jié)胰島素抵抗,而忽略了神經(jīng)內(nèi)分泌在T2DM的發(fā)生、發(fā)展中的作用。因此,本實驗以半枝蓮為研究對象,以T2DM大鼠HPA軸為載體,采用COD-PAP法、GPO-PAP法、直接測定法、HE染色、PAS染色、醛復紅染色法、免疫組化SABC法,檢測半枝蓮對T2DM大鼠HPA軸-糖代謝相關的激素、糖原、神經(jīng)遞質(zhì)和組織結構的影響,闡明在半枝蓮干預下,T2DM大鼠HPA軸的形態(tài)結構、功能變化與糖脂代謝之間的關聯(lián)以及對T2DM的治療效果。實驗一T2DM模型的建立選用Wistar SPF級大鼠168只,4周齡,雄性,按體重無差異原則隨機分為健康對照組(48只)和模型組(120只)。全部大鼠普通飼料適應性飼養(yǎng)1周后,模型組大鼠改為高糖高脂飼料,連續(xù)飼喂30d。第31d,禁食不禁水24h。第32d,全部大鼠稱重,STZ造模:模型組按45mg/kg的體重,腹腔注射5‰STZ;健康對照組腹腔注射4.5ml/kg的檸檬酸鹽緩沖液,30min內(nèi)注射完畢。實驗第34d、38d、45d、59d,觀察大鼠的體重、飲水量;采血測定FBG變化,血清測定INS、CORT、TC、TG、HDL-C、LDL-C變化;HE染色觀察下丘腦PVN與VMH、垂體、腎上腺、胰腺病理組織學變化;PAS染色觀察下丘腦PVN與VMH、垂體、腎上腺內(nèi)糖原數(shù)量變化;醛復紅染色觀察胰腺α細胞、β細胞、膠原纖維的變化;免疫組化SABC法觀察5-HT、GABA在下丘腦PVN與VMH內(nèi)的表達變化。實驗結果如下:與健康對照組比較,模型組大鼠飲水量增高、體重下降;FBG增高,INS降低,血清CORT、TC、TG、LDL-C增高,血清HDL-C降低;下丘腦PVN和VMH內(nèi)神經(jīng)元數(shù)量減少,神經(jīng)膠質(zhì)細胞增多,腺垂體內(nèi)嗜堿性細胞數(shù)量減少,腎上腺束狀帶細胞數(shù)量減少、壞死,胰腺α、β細胞數(shù)量減少、壞死,膠原纖維增多;T2DM大鼠的HPA軸相關組織內(nèi)的糖原數(shù)量增多;5-HT和GABA在下丘腦PVN大細胞內(nèi)的表達量升高,其在小細胞內(nèi)的表達量降低;5-HT在下丘腦VMH-GE內(nèi)的表達量降低,其在GI內(nèi)升高;GABA在VMH-GE和GI內(nèi)表達量均降低。實驗二半枝蓮對T2DM大鼠HPA軸-糖代謝相關指標的影響實驗第38d,確定成模,全部實驗動物分為5個組,依次為健康對照組,模型對照組,半枝蓮低、中、高劑量組,每組24只大鼠。實驗第39d,禁食不禁水24h,實驗第40d,實驗大鼠每天定時灌胃給藥,半枝蓮低、中、高劑量組按照1ml/100g的量分別灌服不同濃度(0.1g/ml、0.25g/ml、0.5g/ml)的提取液;健康對照組和模型對照組均灌服1ml/100g的生理鹽水。整個治療過程中,健康對照組飼喂基礎飼料,其余各組飼喂高糖高脂飼料,實驗期為30d。實驗第44d、49d、59d、69d(半枝蓮治療第5d、10d、20d、30d),觀察相關指標。實驗結果如下:與模型對照組相比,半枝蓮治療組大鼠體重增高;FBG降低,血清CORT、TC、TG、LDL-C、INS降低,血清HDL-C升高;大鼠下丘腦PVN和VMH內(nèi)的神經(jīng)元數(shù)量增多、神經(jīng)膠質(zhì)細胞減少,腺垂體內(nèi)嗜堿性細胞數(shù)量增多,腎上腺束狀帶細胞增多,胰腺β細胞數(shù)量增多、膠原纖維減少;半枝蓮治療組大鼠下丘腦PVN,腺垂體,腎上腺束狀帶內(nèi)糖原數(shù)量減少,下丘腦VMH內(nèi)糖原數(shù)量增多;半枝蓮治療第10d、20d和30d,5-HT在半枝蓮低、高劑量組大鼠下丘腦PVN的表達量相近于健康對照組。半枝蓮治療第5d、10d,5-HT在低劑量組大鼠VMH-GE和GI區(qū)域內(nèi)表達量均相近健康對照組。半枝蓮治療第5d、10d,半枝蓮低劑量組大鼠下丘腦PVN內(nèi)GABA表達量相近于健康對照組。半枝蓮治療第5d、10d,半枝蓮低、高劑量組VMH-GE區(qū)域內(nèi)GABA表達量均相近健康對照組,中、高劑量組GI區(qū)域內(nèi)GABA表達量均相近健康對照組。上述研究結果表明:HPA軸參與了T2DM的發(fā)生、發(fā)展過程;半枝蓮對T2DM大鼠的糖脂代謝異常具有調(diào)節(jié)作用;半枝蓮對T2DM病大鼠HPA軸的功能具有正向調(diào)節(jié)作用;半枝蓮對T2DM大鼠的降糖作用及HPA軸的保護作用存在時間和劑量依賴性,即治療前期(5d~10d)半枝蓮低、中劑量組效果較好,治療后期(20~30d),中、高劑量組對T2DM治療效果較好。
【圖文】：

14同時間的大鼠下丘腦 PVN 的病理組織學結構變化（H.E 染色，bar=50μm）。a1、a2、a3、a4 分別為實驗d、59d 的健康對照組，b1、b2、b3、b4 分別為實驗第 34d、38d、45d、59d 的模型組，其中“1”代表小細胞、“3”代表神經(jīng)膠質(zhì)細胞。e pathological histological changes of PVN in rats hypothalamus at different time (HE staining, bar=50μm)nd a4 are healthy groups on the 34th, 38th, 45th, and 59th days of the experiment. The b1, b2, b3, and b4 aon the 34th, 38th, 45th, and 59th days of the experiment, respectively. "1" for large cells, "2" for small cellsls.

16不同時間的大鼠下丘腦 VMH-GE 的病理組織學結構變化（H.E 染色，bar=50μm）。a1、a2、a3、a4 分別為d、38d、45d、59d 的健康對照組，b1、b2、b3、b4 分別為實驗第 34d、38d、45d、59d 的模型組，“ ”代神經(jīng)元。 The pathological histological changes of the hypothalamus VMH-GE in rats at different time (H.E staining, bar =51, a2, a3, and a4 are healthy groups on the 34th, 38th, 45th, and 59th days of the experiment, respectively. The bnd b4 are model groups on the 34th, 38th, 45th, and 59th days of the experiment, respectively. " "for inhinal cells.
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

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本文編號：2671678