【摘要】：高血脂癥是動脈粥狀硬化的首要危險因素,目前臨床上用于降脂的西藥雖然療效確切,但毒副作用較大,不宜長期服用。因此,尋找開發(fā)無毒而有效的降脂藥品具有重大的意義。本研究分為兩個部分,我們首先探究了松杉靈芝多糖誘導人肝癌細胞HepG2細胞中膽固醇合成抑制的分子機制。在篩選多糖在細胞膜上受體過程,并未在目前熟知的的多糖結合膜蛋白中篩選到相應受體。基于多糖細胞膜上受體研究方法的局限,我們開展了第二部分的研究工作構建了Fe_3O_4@SiO_2/CdTe/CdS-SBT雙功能的磁性熒光納米探針,并成功地驗證了其可操作性一、松杉靈芝多糖誘導人肝癌細胞中膽固醇合成抑制的分子機制研究1.前期研究我們發(fā)現(xiàn),SBT能夠誘導肝細胞內膽固醇合成限速酶HMGCoA表達的降低。為了進一步研究其藥理機制,我們用不同濃度的SBT誘導HepG2細胞48h后,測定了膽固醇生理合成途徑中的多種蛋白的表達情況。結果顯示:隨著SBT濃度的增高,SREBP2蛋白的表達量逐漸升高,而S2P蛋白的表達量呈逐步減少。選用固定濃度誘導HepG2細胞(0,3,6,12,24小時)后,發(fā)現(xiàn)隨著誘導時間的增加,SREBP2蛋白的表達量有微小的下降趨勢;SCAP蛋白的表達量先升高后降低;S2P蛋白的表達量先下降后上升;Insig-1蛋白的表達量呈下降的趨勢。雖然各個蛋白的表達量都存在一定的變化,但由于其變化量較小。因此,我們推斷出SBT對肝細胞內膽固醇調節(jié)的生理合成途徑與SREBP-SCAP通路不相關。2.為了進一步探究多糖SBT抑制肝細胞內膽固醇合成的分子機制。進行了SBT多糖在細胞膜上結合蛋白的篩選。應用細胞免疫熒光法,以肝癌細胞HepG2和人正常肝細胞L02為研究對象,結果顯示肝細胞表面Dectin-1受體蛋白的表達量極低,而Dectin-2蛋白雖有表達,但并不是SBT在肝細胞膜上的受體蛋白。二.雙功能磁性熒光納米探針的構建及在分離膜蛋白中的應用1.首先采用共沉淀法合成了Fe_3O_4磁性納米粒子,并在其外修飾了一層SiO_2,得到了Fe_3O_4@SiO_2磁性納米粒子。借助丁二酸酐的開環(huán)反應,對其表面進行硅羥基修飾,得到了Fe_3O_4@SiO_2-SA磁性納米粒子。表征結果表明:其具有很好的磁分離能力。其次利用一鍋法合成了水溶性的CdTeQDs,并用硫脲在CdTeQDs表面包裹了一層CdS,合成核殼型CdTe/CdS熒光量子點,并使其表面帶有大量的氨基。經(jīng)表征顯示:其熒光強度高,且穩(wěn)定性好。通過酰胺化反應,進一步合成了磁性熒光復合物Fe_3O_4@SiO_2/CdTe/CdS。表征結果顯示,Fe_3O_4@SiO_2/CdTe/CdS復合物具有較好的磁性和較強的熒光強度,在生物醫(yī)學領域具有潛在的應用價值。2.SBT溶于水后,其還原末端暴露,能夠與氨基進行縮合反應。通過縮合反應,將CdTe/CdS、Fe_3O_4@SiO_2-SA與SBT偶聯(lián),構建了Fe_3O_4@SiO_2/CdTe/CdS-SBT磁性熒光納米探針。并用于HepG2細胞表面的SBT的膜蛋白受體的檢測,在細胞表面清晰地看到了磁性熒光納米探針的分布,識別了HepG2細胞表面的SBT受體蛋白的存在。通過超聲裂解提取細胞膜蛋白的方法,用磁分離的方法快速富集了磁性熒光納米探針特異性結合的SBT受體蛋白。本研究為今后膜蛋白的研究提供了新的思路與方法。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285;O657.3

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