【摘要】：高血脂癥是動(dòng)脈粥狀硬化的首要危險(xiǎn)因素,目前臨床上用于降脂的西藥雖然療效確切,但毒副作用較大,不宜長期服用。因此,尋找開發(fā)無毒而有效的降脂藥品具有重大的意義。本研究分為兩個(gè)部分,我們首先探究了松杉靈芝多糖誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞中膽固醇合成抑制的分子機(jī)制。在篩選多糖在細(xì)胞膜上受體過程,并未在目前熟知的的多糖結(jié)合膜蛋白中篩選到相應(yīng)受體�；诙嗵羌�(xì)胞膜上受體研究方法的局限,我們開展了第二部分的研究工作構(gòu)建了Fe_3O_4@SiO_2/CdTe/CdS-SBT雙功能的磁性熒光納米探針,并成功地驗(yàn)證了其可操作性一、松杉靈芝多糖誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞中膽固醇合成抑制的分子機(jī)制研究1.前期研究我們發(fā)現(xiàn),SBT能夠誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)膽固醇合成限速酶HMGCoA表達(dá)的降低。為了進(jìn)一步研究其藥理機(jī)制,我們用不同濃度的SBT誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞48h后,測(cè)定了膽固醇生理合成途徑中的多種蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果顯示:隨著SBT濃度的增高,SREBP2蛋白的表達(dá)量逐漸升高,而S2P蛋白的表達(dá)量呈逐步減少。選用固定濃度誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞(0,3,6,12,24小時(shí))后,發(fā)現(xiàn)隨著誘導(dǎo)時(shí)間的增加,SREBP2蛋白的表達(dá)量有微小的下降趨勢(shì);SCAP蛋白的表達(dá)量先升高后降低;S2P蛋白的表達(dá)量先下降后上升;Insig-1蛋白的表達(dá)量呈下降的趨勢(shì)。雖然各個(gè)蛋白的表達(dá)量都存在一定的變化,但由于其變化量較小。因此,我們推斷出SBT對(duì)肝細(xì)胞內(nèi)膽固醇調(diào)節(jié)的生理合成途徑與SREBP-SCAP通路不相關(guān)。2.為了進(jìn)一步探究多糖SBT抑制肝細(xì)胞內(nèi)膽固醇合成的分子機(jī)制。進(jìn)行了SBT多糖在細(xì)胞膜上結(jié)合蛋白的篩選。應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光法,以肝癌細(xì)胞HepG2和人正常肝細(xì)胞L02為研究對(duì)象,結(jié)果顯示肝細(xì)胞表面Dectin-1受體蛋白的表達(dá)量極低,而Dectin-2蛋白雖有表達(dá),但并不是SBT在肝細(xì)胞膜上的受體蛋白。二.雙功能磁性熒光納米探針的構(gòu)建及在分離膜蛋白中的應(yīng)用1.首先采用共沉淀法合成了Fe_3O_4磁性納米粒子,并在其外修飾了一層SiO_2,得到了Fe_3O_4@SiO_2磁性納米粒子。借助丁二酸酐的開環(huán)反應(yīng),對(duì)其表面進(jìn)行硅羥基修飾,得到了Fe_3O_4@SiO_2-SA磁性納米粒子。表征結(jié)果表明:其具有很好的磁分離能力。其次利用一鍋法合成了水溶性的CdTeQDs,并用硫脲在CdTeQDs表面包裹了一層CdS,合成核殼型CdTe/CdS熒光量子點(diǎn),并使其表面帶有大量的氨基。經(jīng)表征顯示:其熒光強(qiáng)度高,且穩(wěn)定性好。通過酰胺化反應(yīng),進(jìn)一步合成了磁性熒光復(fù)合物Fe_3O_4@SiO_2/CdTe/CdS。表征結(jié)果顯示,Fe_3O_4@SiO_2/CdTe/CdS復(fù)合物具有較好的磁性和較強(qiáng)的熒光強(qiáng)度,在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。2.SBT溶于水后,其還原末端暴露,能夠與氨基進(jìn)行縮合反應(yīng)。通過縮合反應(yīng),將CdTe/CdS、Fe_3O_4@SiO_2-SA與SBT偶聯(lián),構(gòu)建了Fe_3O_4@SiO_2/CdTe/CdS-SBT磁性熒光納米探針。并用于HepG2細(xì)胞表面的SBT的膜蛋白受體的檢測(cè),在細(xì)胞表面清晰地看到了磁性熒光納米探針的分布,識(shí)別了HepG2細(xì)胞表面的SBT受體蛋白的存在。通過超聲裂解提取細(xì)胞膜蛋白的方法,用磁分離的方法快速富集了磁性熒光納米探針特異性結(jié)合的SBT受體蛋白。本研究為今后膜蛋白的研究提供了新的思路與方法。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285;O657.3

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