【摘要】：蜜煎菖蒲方出自《回回藥方》,由石菖蒲和番紅花(西紅花)組成,具有健脾化痰,活血化瘀的作用,專治半身不遂、口眼歪斜,能去本身風(fēng)濕,能言善快,現(xiàn)代藥理和臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明蜜煎菖蒲方對(duì)中風(fēng)后半身不遂、改善語(yǔ)言功能障礙具有良好的促進(jìn)作用。本論文利用UPLC-QTOF-MS聯(lián)用技術(shù),以復(fù)方化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)為切入點(diǎn),對(duì)石菖蒲和番紅花配伍前后原型、入血和入腦成分進(jìn)行整體辨識(shí),明確配伍的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ);以大鼠MCAO致缺血性腦卒中為模型,以LC-MS代謝組學(xué)為手段,考察配伍藥效作用和對(duì)缺血性腦卒中生物標(biāo)志物的調(diào)控作用和代謝途徑。結(jié)合以上化學(xué)物質(zhì)組和代謝組學(xué)兩方面闡明其配伍規(guī)律,為中藥復(fù)方配伍規(guī)律的研究提供思路和方法。本論文采用UPLC-QTOF-MS技術(shù)對(duì)蜜煎菖蒲方的化學(xué)成分進(jìn)行解析,并對(duì)蜜煎菖蒲方給藥后的吸收入血成分和入腦成分進(jìn)行了鑒定。結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)自動(dòng)匹配技術(shù)和二級(jí)碎片離子的方法,在蜜煎菖蒲方中共鑒定了24種原型成分,包括來(lái)自西紅花的7種成分和來(lái)自石菖蒲的17種成分,其主要為揮發(fā)性成分、有機(jī)酸類和萜類成分。在灌胃分別給予正常鼠和MCAO模型鼠蜜煎菖蒲方后,在血清中,我們鑒定出存在于西紅花的成分有8個(gè),除了在藥材中已存在的西紅花酸、番紅花Ⅰ,番紅花苷K和番紅花堿4個(gè)成分外,還出現(xiàn)了4個(gè)新的成分,分別為谷甾醇、番紅花醛、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸和番紅花苷G,推測(cè)可能是西紅花與石菖蒲配伍之后產(chǎn)生了新的成分或是以代謝成分的形式入血的。與此同時(shí),我們對(duì)其入腦成分進(jìn)行了鑒定,結(jié)果顯示,在正常鼠中,檢測(cè)到西紅花入腦成分6個(gè),在模型鼠中檢測(cè)到西紅花入腦成分為7個(gè),與西紅花單味藥材成分相比,只有3種成分(西紅花酸、番紅花苷G和番紅花苷H)以原型成分入腦,另產(chǎn)生了7種新的成分。然后,我們發(fā)現(xiàn)西紅花與石菖蒲配伍之后,原本在西紅花單味藥材腦組織中檢測(cè)不到的物質(zhì)會(huì)出現(xiàn)在配伍之后的腦組織中,主要有西紅花酸、克羅西汀-甲基酯、番紅花I、番紅花醛和3-羥基-4-甲氧基苯甲酸5個(gè)成分,我們推測(cè)石菖蒲能夠促進(jìn)西紅花化學(xué)成分透過(guò)血腦屏障,起到治療腦卒中的作用。以上配伍前后化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)上的解析為后續(xù)蜜煎菖蒲方的質(zhì)量控制和體內(nèi)代謝物分析提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。以線栓法制備的MCAO大鼠為模型,采用UPLC-QTOF-MS技術(shù)對(duì)蜜煎菖蒲方干預(yù)缺血性卒中的作用機(jī)制進(jìn)行了血清代謝組學(xué)研究。在血清中,我們結(jié)合正負(fù)離子模式共篩選了40種腦缺血潛在的血清生物標(biāo)志物,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品驗(yàn)證鑒定了11種內(nèi)源性代謝物,主要包括色氨酸、泛酸、硬脂酸、苯甲酸、3-甲基吲哚、4-羥基苯甲酸-正丁酯、維達(dá)洛芬、1-肉豆蔻酰-2-羥基-sn-甘油-3-PC、豬毛菜酚、茉莉酸甲酯和異嗪吡啶,其余的還在鑒定當(dāng)中。它們主要參與泛酸鹽和輔酶A生物合成、氨基酰-tRNA合成、氨基酸代謝和酮體的合成與降解等代謝通路調(diào)節(jié),差異性代謝物的PLS-DA圖結(jié)果顯示腦卒中大鼠給予蜜煎菖蒲方后血清代謝物較單體成分和單味藥相比更趨近于假手術(shù)組,即石菖蒲和西紅花配伍后能夠協(xié)同調(diào)控腦卒中大鼠血清代謝標(biāo)志物,使之趨近于正常組水平,從而達(dá)到協(xié)同增效的作用。為進(jìn)行全面的代謝組學(xué)分析,建立了基于UPLC-QTOF-MS的腦組織代謝組學(xué)方法。經(jīng)多元統(tǒng)計(jì)分析和潛在生物標(biāo)志物的篩選,在正負(fù)離子模式下我們初步篩選了腦組織中21種差異性代謝物。通路分析結(jié)果表明,主要涉及到的通路有氨基酸代謝、糖降解、三羧酸循環(huán)等,經(jīng)過(guò)含量差異統(tǒng)計(jì),我們發(fā)現(xiàn)21個(gè)差異性代謝物經(jīng)蜜煎菖蒲方干預(yù)給藥后,具有向正常水平接近的趨勢(shì),從而推測(cè)蜜煎菖蒲方對(duì)腦缺血損傷的機(jī)制可能與氨基酸代謝、糖降解、三羧酸循環(huán)等通路的調(diào)節(jié)有關(guān),并且組織的差異性代謝物PLS-DA得分圖結(jié)果與血清代謝物的PLS-DA得分圖趨勢(shì)一致,進(jìn)一步說(shuō)明了西紅花與石菖蒲配伍之后比單味藥的治療效果更接近于假手術(shù)組,具有協(xié)同增效的作用。綜合以上化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)、體內(nèi)整體動(dòng)物藥效學(xué)和代謝組學(xué)結(jié)果,表明蜜煎菖蒲方配伍后促進(jìn)了西紅花苷類有效成分的入血和入腦,從而達(dá)到預(yù)防治療缺血性腦卒中的藥效作用;從代謝組學(xué)角度,是復(fù)方能夠協(xié)同調(diào)控缺血性腦卒中代謝標(biāo)志物,使之較單味藥更趨近于正常水平,從而達(dá)到協(xié)同增效的作用。
【圖文】：

寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 前言陽(yáng)還五湯也具有神經(jīng)保護(hù)作用并促進(jìn)腦修復(fù)的作用[7]�！痘鼗厮幏健分惺蛰d的蜜煎菖蒲方由西紅花和石菖蒲組成（圖 1），專治半身不遂、口眼歪斜，能去本身風(fēng)濕，又能言快。臨床試驗(yàn)證明，蜜煎菖蒲方能明顯的改善腦卒中患者的語(yǔ)言障礙和日常生活活動(dòng)能力，還能夠顯著的降低患者血清總膽固醇和甘油三酯，，對(duì)脂質(zhì)代謝紊亂具有調(diào)節(jié)作用[8]；同時(shí)，體外藥理實(shí)驗(yàn)也證明，蜜煎菖蒲方能夠保護(hù)腦缺血大鼠神經(jīng)元的損傷[9]和抑制血栓的形成[10]。

圖 1-1 基于 UPLC-QTOF-MS 的蜜煎菖蒲方的化學(xué)成分解析Fig. 1-1 Chemical constituents analysis of MJCPD based on UPLC-QTOF-MS1.實(shí)驗(yàn)方法1.1 材料與儀器1.1.1 材料西紅花苷Ⅰ(HPLC≥98%，AF8061502)、西紅花苷Ⅱ(HPLC≥98%，AF7121712)、西紅花酸(HPLC≥98%，PS1410601)、β-細(xì)辛醚（HPLC≥98%，AF7112004）和 α-細(xì)辛醚(HPLC≥98%，AB170305012)對(duì)照品購(gòu)自成都埃法生物科技有限公司；石菖蒲和西紅花飲片均購(gòu)自寧夏明德中藥飲片有限公司，經(jīng)寧夏醫(yī)科大學(xué)生藥教研室董琳副教授鑒定西紅花為鳶尾科植物屬番紅花 Crocus sativus L.的干燥柱頭、石菖蒲來(lái)源于天南新科植物石菖蒲 Acorus tatarinowii Schoott 的干燥根莖，均符合 2015 版《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)記載的藥材來(lái)源。分析級(jí)無(wú)水乙醇、甲醇、乙腈均
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R289.1

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本文編號(hào)：2671491