發(fā)布時間：2020-05-19 15:22

【摘要】：目的:膜性腎病(membranous nephropathy,MN)是以腎小球臟層上皮細胞下免疫復合物彌漫性沉積、腎小球基底膜增厚伴“釘突”形成為病理學特征的腎小球疾病,其中病因未明者稱為特發(fā)性膜性腎病(idiopathic membranous nephropathy,IMN),約占MN的2/3。MN臨床主要表現(xiàn)為大量蛋白尿。本研究運用尾靜脈注射陽離子化牛血清白蛋白(cationic bovine serum albumin,C-BSA)的方法,建立MN大鼠模型,并應用宣通三焦、活血通絡方進行干預治療,通過觀察大鼠的一般情況、24小時尿蛋白定量(24 hours urine total protein,24h UTP)、血清總蛋白(total protein,TP)、白蛋白(albumin,ALB)、血清總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(glycerin three greases,TG)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)等生化指標以及腎組織中CD2AP和Podocin的表達,探討宣通三焦、活血通絡方對MN大鼠腎臟的保護作用及對腎組織中CD2AP和Podocin的影響,從而為防治MN提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。方法:選用清潔級健康雄性SD大鼠40只,體重160±20g,普通飼料適應性喂養(yǎng)一周后測其尿蛋白均為陰性,采用完全隨機法選取10只大鼠作為正常組(C組),30只大鼠為造模組。造模組大鼠預免疫一周后,開始正式免疫,隔日一次進行尾靜脈注射C-BSA,連續(xù)四周,建立MN大鼠模型,C組大鼠尾靜脈注射等量生理鹽水。造模結(jié)束后留取造模組大鼠24小時尿液測定24h UTP,確定模型復制成功后,按體重隨機將其分為模型組(M組)、中藥組(Z組)和雷公藤多苷加醋酸潑尼松組(L組)。Z組和L組分別給予相應藥物進行灌胃,C組和M組均以等量的生理鹽水灌胃,各組連續(xù)給藥四周。給藥結(jié)束后,留取各組大鼠24小時尿液測定24h UTP,麻醉狀態(tài)下股動脈取血測定TP、ALB、TC、TG、BUN、Scr等生化指標,留取新鮮腎臟組織,應用免疫熒光、光鏡、電鏡觀察大鼠腎組織的病理變化,免疫組化、Western-blot和Real-time PCR檢測大鼠腎組織中CD2AP和Podocin蛋白及mRNA表達水平。結(jié)果:1大鼠的一般情況C組大鼠精神良好,活動正常,體毛有光澤、無脫落,進食、飲水正常,二便正常。各造模組大鼠出現(xiàn)不同程度的精神萎靡,抱團少動,體毛欠光澤、有脫落,進食減少,部分大鼠出現(xiàn)陰囊水腫。在造模過程中,造模組大鼠死亡三只,分析大鼠死亡原因可能是前期尾靜脈注射的C-BSA溶液純度不夠,經(jīng)改進過濾方法,大鼠未再出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。給藥結(jié)束后,Z組和L組大鼠一般情況較M組大鼠有所好轉(zhuǎn),M組大鼠一般情況未見明顯變化。2 24hUTP給藥結(jié)束后,各造模組24h UTP均較C組明顯升高,有統(tǒng)計學意義(P0.05),Z組和L組24h UTP均較M組明顯降低,有統(tǒng)計學意義(P0.05),Z組與L組24h UTP比較無明顯差別,無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3各組大鼠血液指標的檢測結(jié)果(1)TP、ALB:給藥結(jié)束后,各造模組TP、ALB均較C組明顯降低,有統(tǒng)計學意義(P0.05);Z組和L組TP、ALB均較M組明顯升高,有統(tǒng)計學意義(P0.05);Z組TP、ALB較L組TP、ALB明顯升高,有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(2)TC、TG:給藥結(jié)束后,各造模組TC、TG均較C組明顯升高,有統(tǒng)計學意義(P0.05);Z組和L組TC、TG均較M組明顯降低,有統(tǒng)計學意義(P0.05);Z組TC、TG較L組TC、TG明顯降低,有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(3)BUN、Scr:給藥結(jié)束后,各組BUN、Scr無明顯變化,無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4免疫熒光C組大鼠腎小球上無明顯免疫復合物沉積;M組大鼠可見IgG沿腎小球毛細血管袢及系膜區(qū)彌漫性沉積;Z組和L組可見IgG沿腎小球毛細血管袢及系膜區(qū)少量沉積。5光鏡C組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)無明顯改變;M組大鼠腎小球毛細血管基底膜彌漫性增厚,“釘突”形成,系膜基質(zhì)增多;Z組和L組大鼠腎小球毛細血管基底膜輕度增厚,少量“釘突”形成,系膜基質(zhì)增多不明顯。6電鏡C組大鼠腎小球足細胞結(jié)構(gòu)無明顯變化;M組大鼠腎小球基底膜增厚,上皮下可見大量電子致密物沉積,足突彌漫融合或消失,有“釘突”形成;Z組和L組大鼠腎小球基底膜輕度增厚,上皮下有少量電子致密物沉積,足突部分融合。7免疫組織化學法CD2AP在C組大鼠腎小球上大量分布,少量表達在腎小管和集合管上,呈棕黃色染色;在M組大鼠腎小球上表達明顯減少;與M組相比,CD2AP在Z組和L組大鼠腎小球上的表達明顯增多。Podocin在C組大鼠腎小球上表達,在腎小管和間質(zhì)上無明顯表達,沿腎小球基底膜呈線性分布,呈棕黃色染色;在M組大鼠腎小球上表達明顯減弱;與M組相比,Podocin在Z組和L組大鼠腎小球上的表達明顯增強。8 Western blot與C組相比,各造模組大鼠腎組織中CD2AP的表達均明顯減少,有統(tǒng)計學意義(P0.05);與M組相比,Z組和L組大鼠腎組織中CD2AP的表達明顯增加,有統(tǒng)計學意義(P0.05);Z組大鼠腎組織中CD2AP的表達和L組大鼠腎組織中CD2AP的表達相比無明顯差別,無統(tǒng)計學意義(P0.05)。與C組相比,各造模組大鼠腎組織中Podocin的表達均明顯減少,有統(tǒng)計學意義(P0.05);與M組相比,Z組和L組大鼠腎組織中Podocin的表達明顯增加,有統(tǒng)計學意義(P0.05);Z組大鼠腎組織中Podocin的表達和L組大鼠腎組織中Podocin的表達相比無明顯差別,無統(tǒng)計學意義(P0.05)。9 Real-time PCR與C組相比,各造模組大鼠腎組織中CD2AP mRNA的表達均明顯減少,有統(tǒng)計學意義(P0.05);與M組相比,Z組和L組大鼠腎組織中CD2AP mRNA的表達明顯增加,有統(tǒng)計學意義(P0.05);Z組大鼠腎組織中CD2AP mRNA的表達和L組大鼠腎組織中CD2AP mRNA的表達相比無明顯差別,無統(tǒng)計學意義(P0.05)。與C組相比,各造模組大鼠腎組織中Podocin mRNA的表達均明顯減少,有統(tǒng)計學意義(P0.05);與M組相比,Z組和L組大鼠腎組織中Podocin mRNA的表達明顯增加,有統(tǒng)計學意義(P0.05);Z組大鼠腎組織中Podocin mRNA的表達和L組大鼠腎組織中Podocin mRNA的表達相比無明顯差別,無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:1宣通三焦、活血通絡方能夠有效地改善MN大鼠的一般情況,顯著降低MN大鼠24h UTP水平,同時還可以調(diào)節(jié)脂代謝,升高血漿蛋白。2宣通三焦、活血通絡方能夠有效地抑制或減少MN大鼠腎小球基底膜免疫復合物的沉積,減輕MN大鼠腎組織病理學改變,延緩腎損害。3宣通三焦、活血通絡方能夠有效地上調(diào)MN大鼠腎組織中CD2AP蛋白及mRNA與Podocin蛋白及mRNA的表達水平,對維持足細胞SD結(jié)構(gòu)和功能的完整性起到了保護作用,這可能是宣通三焦、活血通絡方抑制蛋白尿的作用機制之一。
【圖文】：

27圖 2 各組大鼠 TP、ALB 比較Fig.2 Comparison of TP andALB of rats in different groups (x±S)Note:*P < 0.05 vs C group;#P < 0.05 vs M group;△P < 0.05 vs L group.

圖 1 各組大鼠 24hUTP 比較Fig.1 Comparison of 24h UTP of rats in different groups (x±S)Note:*P < 0.05 vs C group;#P < 0.05 vs M group.
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2671088