【摘要】：補(bǔ)骨脂,辛溫苦燥,能溫補(bǔ)腎陽、溫脾止瀉,通心胞之火與命門之火,對元陽衰損、腎虛腰痛、精氣不固、脾虛泄瀉等癥狀具有治療作用。目前臨床對其炮制工藝、炮制機(jī)理等方面均有不同程度的研究,《雷公炮炙論》描述其為“性本大燥毒”�！毒V目》有記載“鹽水浸炒則入血分而潤燥……”。因此本研究結(jié)合中醫(yī)傳統(tǒng)理論“入鹽走腎”、“咸濡潤”等觀點(diǎn),對補(bǔ)骨脂鹽炙緩和燥毒的炮制機(jī)理進(jìn)行了初步研究,以期能對該藥的臨床用藥指導(dǎo)提供更為詳細(xì)充足的理論依據(jù)。目的選擇單味中藥補(bǔ)骨脂,作為本課題的研究藥材,對補(bǔ)骨脂經(jīng)鹽炙后燥性的改變進(jìn)行研究分析,采用“藥理研究—代謝分析—分子生物學(xué)基因表達(dá)”研究模式,以藥理效應(yīng)體現(xiàn)增效與潤燥,采用尾酒探針法及熒光定量PCR技術(shù)等,結(jié)合正常及模型動物中醫(yī)證型,從藥理效應(yīng)出發(fā),深入至基因水平,對補(bǔ)骨脂鹽炙緩和燥性的炮制原理,進(jìn)行一個(gè)多層次和角度的分析闡明,為炮制理論的深入認(rèn)識及中藥炮制學(xué)科的發(fā)展增磚添瓦。方法飲片的制備及藥材提取均以課題組前期研究所得工藝參數(shù)結(jié)果為準(zhǔn),分別對補(bǔ)骨脂生品及鹽炙品飲片進(jìn)行制備提取。鹽炙藥材以悶潤炒炙法制備;供試品制備采用醇水雙提法;腎陽虛模型動物以氫化可的松肌肉注射進(jìn)行復(fù)制。考察分析補(bǔ)骨脂炮制前后對正常及模型動物相關(guān)指標(biāo)的影響,研究補(bǔ)骨脂鹽炙前后對大鼠肝腎功能、肝藥酶亞型活性改變及水通道蛋白mRNA表達(dá)的影響。1.以天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)為評價(jià)指標(biāo),研究補(bǔ)骨脂鹽炙前后對腎陽虛模型大鼠燥毒的影響。2.以咖啡因(CYP1A2),氯唑沙宗(CYP2E1),氨苯砜(CYP3A4)為探針?biāo)幬?安替比林為內(nèi)標(biāo)藥物,探究補(bǔ)骨脂生品及鹽炙品對CYP450酶系的3種主要代謝酶亞型CYP1A2、CYP2E1、CYP3A4的活性的影響。3.以水液代謝變化為主要研究對象,以熒光定量PCR(qRT-PCR)法測定口腔唾液腺AQP_5、結(jié)腸AQP_4、腎臟AQP_2mRNA的表達(dá)水平。分別研究不同炮制品對AQP_5、AQP_4、AQP_2的調(diào)控表達(dá)的影響,分析闡明鹽炙緩和燥性原理。結(jié)果1.與模型組比較,補(bǔ)骨脂生品和鹽炙品組大鼠血清中的ALT、AST顯著升高(P0.01),Alb顯著降低(P0.01)。補(bǔ)骨脂鹽炙品組大鼠血清中ALT、AST水平低于生品組,Alb水平高于生品組,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。模型組與對照組相比,大鼠的Scr顯著降低(P0.05),BUN無明顯變化;生品組和鹽炙品組的BUN及Scr水平與模型組比較,顯著上升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.對t_(1/2)的影響:生品組的咖啡因t_(1/2)顯著高于對照組(P0.01),生品組及鹽炙品組的氨苯砜、氯唑沙宗t_(1/2)均明顯小于對照組(P0.01);鹽炙組咖啡因、氨苯砜、氯唑沙宗t_(1/2)則明顯低于生品組(P0.01)。對表觀體積V的影響:鹽炙組咖啡因、氨苯砜V明顯小于對照組和生品組(P0.05),生品組及鹽炙品組氯唑沙宗V明顯小于對照組。對清除率CL的影響:鹽炙品組體內(nèi)氨苯砜、氯唑沙宗CL明顯高于對照組(P0.01)。對曲線下面積AUC_(0-∞)的影響:生品組及鹽炙品組氨苯砜AUC_(0-∞)明顯低于對照組(P0.05),鹽炙品組氯唑沙宗AUC_(0-∞)明顯低于對照組(P0.05)。3.模型組大鼠的AQP_2、AQP_4mRNA表達(dá)顯著降低,明顯低于對照組(P0.05),AQP_5mRNA表達(dá)顯著高于對照組(P0.05);與模型組比較,補(bǔ)骨脂生品組大鼠AQP_4mRNA表達(dá)顯著增加(P0.05),AQP_5mRNA表達(dá)顯著降低(P0.05);與補(bǔ)骨脂生品組比較,鹽炙品組大鼠AQP_2、AQP_5mRNA表達(dá)顯著上升(P0.05),AQP_4mRNA表達(dá)顯著降低(P0.05)。結(jié)論補(bǔ)骨脂生品對大鼠肝功能有一定的損傷,鹽炙后可能有所緩解。補(bǔ)骨脂經(jīng)鹽炙后可其降低生品對CYP1A2的抑制,加強(qiáng)對CYP3A4、CYP2E1的誘導(dǎo)作用相關(guān),即補(bǔ)骨脂鹽炙后其經(jīng)CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1代謝酶代謝的相關(guān)燥性成分或代謝產(chǎn)物的代謝速率增加、血藥濃度降低、而緩和了補(bǔ)骨脂生品的燥性。補(bǔ)骨脂鹽炙后可緩解生品的燥性,還可能與其對體內(nèi)AQP的基因表達(dá)調(diào)控有關(guān),相比服用補(bǔ)骨脂生品,補(bǔ)骨脂鹽炙后可上調(diào)AQP_2、AQP_5mRNA的表達(dá),降低AQP_4mRNA的表達(dá),提示鹽炙后可能緩解藥物燥性。
【圖文】：

B圖3-2 AQP2mRNA表達(dá)分析溫度預(yù)實(shí)驗(yàn)（A擴(kuò)增曲線 B擴(kuò)增效率） AQP2mRNA 表達(dá)擴(kuò)增及溶解曲線情況QP2mRNA 表達(dá)擴(kuò)增及溶解曲線情況見 3-3。

AQP4mRNA表達(dá)分析溫度預(yù)實(shí)驗(yàn)（A擴(kuò)增曲線B溶解曲線C溶解峰）
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R283

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2671044