【摘要】：目的:本研究課題通過觀察STC大鼠模型的ICC自噬情況,探討通便湯治療STC機制及其量效關系。方法:將80只健康SD大鼠隨機分為空白組20只,造模組60只。運用復方苯乙哌啶復制STC大鼠模型,隨機抽取空白組10只,造模組10只,觀察大鼠一般情況(體質量、進食量、飲水量),測定大鼠24h糞便總量和含水量、腸道傳輸功能、結腸肌電,并運用免疫組化法、蛋白免疫印跡法和PCR法檢測ICC及c-kit的表達。停藥1w后,檢測造模結束1d后、7d后,造模組大鼠24h糞便總量和含水量。STC大鼠模型復制成功后,將造模組剩余的50只隨機分為模型組10只,通便湯低、中、高劑量組各10只,莫沙必利組10只,藥物干預6w后,觀察大鼠一般情況(體質量、進食量、飲水量)、測定大鼠24h糞便總量和含水量、腸道傳輸功能、結腸肌電,運用透射電鏡觀察大鼠結腸組織中ICC,蛋白免疫印跡法和PCR法檢測c-kit、Beclin1、LC3的表達。結果:1.與空白組相比,造模組大鼠一般情況較差,24h糞便總量和含水量減低(P0.01),炭末推進率降低(P0.01),結腸留存糞便增多(P0.01),肌電圖頻率和振幅變異程度升高(P0.01),ICC和c-kit表達降低(P0.01)。停藥1w后,造模組大鼠24h糞便總量和含水量未見明顯改變(P0.05)。2.與空白組相比,模型組ICC細胞結構明顯改變,自噬增加;與模型組相比,通便湯治療6w后,通便湯低、中、高劑量組大鼠體質量增加、進食量增加、飲水量減少(P0.01),24h糞便總量和含水量增多(P0.01),炭末推進率升高(P0.01),結腸留存糞便減少(P0.01),肌電圖頻率和振幅變異程度降低(P0.01),ICC和c-kit表達升高(P0.01),Beclin1、LC3表達下降(P0.01),并且低、中、高劑量通便湯組間差異有明顯統(tǒng)計學意義(P0.01),高劑量通便湯與低、中組間差異顯著(P0.01)。3.與模型組相比,莫沙比利組大鼠體質量增加、進食量增加、飲水量減少(P0.01),24h糞便總量和含水量增多(P0.01),炭末推進率升高(P0.01),結腸留存糞便減少(P0.01),肌電圖頻率和振幅變異程度降低(P0.01),但是ICC和c-kit表達未見明顯變化(P0.05),Beclin1、LC3表達未見明顯變化(P0.05)。結論:1.運用復方苯乙哌啶成功復制STC大鼠模型,且STC大鼠模型穩(wěn)定性好,安全性高,可用于后期實驗研究。2.通便湯能明顯改善STC癥狀,主要機制可能與下調Beclin1、LC3表達而抑制ICC過度自噬,上調c-kit表達,促進ICC修復有關,從而能刺激腸道蠕動,增加腸道水分。3.通便湯治療STC與用藥劑量有一定聯(lián)系,高劑量通便湯治療STC效果最佳。4.莫沙比利通過改善大鼠一般情況(體質量、進食量、飲水量),促進腸道蠕動,增加糞便總量和含水量,增加腸道傳輸功能治療STC,但并未抑制ICC過度自噬,其作用機制與抑制ICC過度自噬無關。
【圖文】：

鼠造模成功，ＳＴＣ大鼠結腸組織中ＩＣＣ細胞中ｏｋｉｔ明顯減少，自噬標志蛋白Ｂｅｃｌｉｎｌ、逡逑ＬＣ３明顯增加，大量ＩＣＣ細胞發(fā)生自噬是ＳＴＣ大鼠模型制備成功的關鍵。有具體數值見逡逑表８、９。見圖２。逡逑：邋—邐＂邋＂邋．邐Ｔ－逡逑ｗ邋ＪＶｉ．邋Ｌ逡逑Ｂｅｃｌｉｎｌ邐？邋．廁逡逑ＬＣ３邐＊邋一逡逑ＧＡＰＤＨ邐ｍｍｍ逡逑圖２邋空白組造模組逡逑表８復方苯乙哌啶造模１２０ｄ后對兩組大鼠結腸組織中ｃ－ｋｉｔ、Ｂｅｃｌｉｎｌ、ＬＣ３蛋白表達影響逡逑（ｘ±ｎ邋）逡逑組別邐例數邐ｃ－ｋｉｔ／ＧＡＤＰＨ邐Ｂｅｃｌｉｎｌ／ＧＡＤＰＨ邐ＬＣ３／ＧＡＤＰＨ逡逑空白組邋１０邐１．２９邋土邋０．０７邐０．５７±０．２３邐０．３９±０．２２逡逑造模組邐１０邐０．４５±０．１１＊邐２．０８±０．３１＊邐１．７４±０．４２＊逡逑注：與空白組相比，＊Ｐ＜０．０１逡逑表９復方苯乙哌啶造模１２０ｄ后對兩組大鼠結腸組織中ｏｋｉｔ、Ｂｅｃｌｉｎｌ、ＬＣ３邋ｍＲＮＡ表達影逡逑響（ｘ±ｎ邋）逡逑組別邐例數邐ｃ－ｋｉｔ邐Ｂｅｃｌｉｎｌ邐ＬＣ３逡逑空白組邐１０邐１．２９±０．０７邐０．５７±０．２３邐０．３９±０．２２逡逑造模組邐１０邐０．４５±０．１１＊邐２．０８±０．３１＊邐１．７４±０．４２＊逡逑注：與空白組相比，＊Ｐ＜０．０１逡逑２７逡逑

結構未見明顯變化。表明通便湯可以減少自噬體和自噬溶酶體的產生，減少線粒體損害，逡逑抑制ＩＣＣ過度自噬，，促進ＩＣＣ修復和生長，并且呈現(xiàn)劑量有相關性，劑量較高，恢復ＩＣＣ逡逑越好。但是莫沙必利不能通過改善ＩＣＣ形態(tài)結構治療ＳＴＣ。見圖３。逡逑＿酬逡逑空白組邐模型組邐通便湯低劑量組逡逑■灥逡逑通便湯中劑量組邐通便湯高劑量組邐莫沙必利組逡逑圖３藥物干預６邋ｗ后各組大鼠結腸組織中ＩＣＣ超微結構逡逑２．４．６藥物干預６ｗ后各組大鼠結腸組織中ＩＣＣ、ｃ－ｋｉｔ表達逡逑免疫組化結果顯示，與空白組大鼠相比，模型組大鼠的ＩＣＣ、ｃ－ｋｉｔ呈現(xiàn)棕色表達的陽逡逑性細胞減少，與模型組相比，通便湯干預的大鼠的ＩＣＣ、ｃ－ｋｉｔ呈現(xiàn)棕色表達的陽性細胞增逡逑多。運用軟件分析各組的小鼠光密度值（ＭＯＤ）發(fā)現(xiàn)，與空白組大鼠相比，模型組大鼠逡逑結腸組織中ＩＣＣ、ｃ－ｋｉｔ表達減少，差異有明顯統(tǒng)計學意義（ＰＣ０．０１）。藥物干預６邋ｗ后，逡逑與模型組大鼠相比，通便湯低劑量組大鼠結腸組織中的ＩＣＣ、ｃ－ｌｃｉｔ表達明顯增多，差異有逡逑明顯統(tǒng)計學意義（Ｐ＜０．０１），莫沙比利組大鼠未見明顯變化，差異未見明顯統(tǒng)計學意義逡逑（Ｐ＞０．０５）。與通便湯低劑量組大鼠相比，通便湯中劑量組結腸組織中的ＩＣＣ、ｃ－ｋｉｔ表達逡逑同樣增加
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2670530