【摘要】：目的探討銀杏葉中異鼠李素(isorhamnetin,ISO)對(duì)RAW264.7細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化的影響及其可能的相關(guān)分子機(jī)制。方法在核因子κB受體活化因子配基(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞分化為破骨細(xì)胞的同時(shí),加入不同濃度的ISO(1~10μM),研究其對(duì)RAW264.7細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化的影響,通過CCK8法檢測(cè)及評(píng)估各作用濃度ISO的細(xì)胞毒性,通過抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resis-tant acid phosphatase staining,TRAP)染色及骨片吸收效果判定其對(duì)RAW264.7細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化的影響。實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)破骨細(xì)胞分化過程的標(biāo)志性基因:TRAP、組織蛋白酶K(cathepsin K,Ctsk)、金屬基質(zhì)蛋白酶9(matrix metallo protein,MMP-9);分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子:原癌基因c-Fos(proto-oncogene protein,c-Fos)、核轉(zhuǎn)錄因子激活的T細(xì)胞1(nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic 1,NFATc1)的表達(dá)及破骨細(xì)胞分化下游因子NF-κB p65信號(hào)通路的磷酸化水平。結(jié)果不同濃度的ISO(1~10μM)對(duì)RAW264.7細(xì)胞無細(xì)胞毒性,并且能抑制TRAP活性,減少骨吸收陷窩數(shù)量,在濃度為10μM時(shí)最為顯著;ISO能顯著降低TRAP、Ctsk、MMP-9、c-Fos、NFATc1及NF-κB p65的m RNA表達(dá)。結(jié)論 ISO對(duì)RAW264.7細(xì)胞向破骨細(xì)胞的分化具有抑制作用,其機(jī)制可能與經(jīng)典NF-κB通路的抑制有關(guān)。
【圖文】：

yISOtreatmentasdetectedbyPCR0μM1μM2μM5μM10μM1.51.00.50.0吸收面積相對(duì)比****a：空白對(duì)照組（0μMISO＋0ng/mLRANKL）；b：陽性對(duì)照組（0μMISO＋50ng/mLRANKL）；c：1μMISO＋50ng/mLRANKL；d：2μMISO＋50ng/mLRANKL；e：5μMISO＋50ng/mLRANKL；f：10μMISO＋50ng/mLRANKL；g：陽性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的相對(duì)于對(duì)照組的骨吸收面積比值；*為與陽性對(duì)照組比較P<0.05；**為與陽性對(duì)照組比較P<0.01；***為與陽性對(duì)照組比較P<0.001。ISO：異鼠李素；RANKL：核因子κB受體活化因子配基。圖5ISO作用后各組骨片骨吸收陷窩形成情況掃描電鏡×400Figure5SEMpicturesoftheboneresorptionlacuna（×400）defabcg100500吸收面積相對(duì)百分比（%）****g陽性對(duì)照組1μMISO組2μMISO組5μMISO組10μMISO組組別defabca：空白對(duì)照組（0μMISO＋0ng/mLRANKL）；b：陽性對(duì)照組（0μMISO＋50ng/mLRANKL）；c：1μMISO組（1μMISO＋50ng/mLRANKL）；d：2μMISO組（2μMISO＋50ng/mLRANKL）；e：5μMISO組（5μMISO＋50ng/mLRANKL）；f：10μMISO組（10μMISO＋50ng/mLRANKL）；g：陽性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組相對(duì)于空白對(duì)照組的骨吸收面積百分比；*為與陽性對(duì)照組比較P<0.05；**為與陽性對(duì)照組比較P<0.01。ISO：異鼠李素；RANKL：核因子κB受體活化因子配基。圖5ISO作用后各組骨片骨吸收陷窩形成情況掃描電鏡×400Figure5SEMimagesofboneresorptionlacuna×400·163·

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