【摘要】：目的:本文旨在研究鉤藤平肝潛陽(yáng)作用的效應(yīng)物質(zhì),識(shí)別其中的核心成分和周圍成分,實(shí)現(xiàn)核心成分體內(nèi)作用機(jī)制的分子生物學(xué)精確描述和周圍成分體內(nèi)作用機(jī)制的代謝組學(xué)模糊描述,構(gòu)建鉤藤平肝潛陽(yáng)“成分-靶標(biāo)-通路”網(wǎng)絡(luò)藥理圖。方法:1.采用自發(fā)性高血壓大鼠加灌附子湯的方法制備高血壓病肝陽(yáng)上亢證大鼠模型,采用鉤藤不同成分敲出組分進(jìn)行干預(yù),觀察干預(yù)過程中各組大鼠血壓、易激惹程度、痛閾、旋轉(zhuǎn)時(shí)間、24 h飲水量以及面溫等指標(biāo)的變化,并在干預(yù)結(jié)束后對(duì)各組大鼠血清生化指標(biāo)和代謝組學(xué)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)和分析。整合前期研究和本次研究的各項(xiàng)指標(biāo)數(shù)據(jù),采用SIMCA-P 11.5軟件進(jìn)行偏最小二乘回歸分析,根據(jù)回歸分析的相關(guān)系數(shù)和變量重要性參數(shù)識(shí)別效應(yīng)物質(zhì)組的核心成分和周圍成分。2.采用鉤藤平肝潛陽(yáng)效應(yīng)物質(zhì)組的核心成分和周圍成分干預(yù)高血壓病肝陽(yáng)上亢證大鼠模型,監(jiān)測(cè)干預(yù)過程中各組大鼠血壓指標(biāo)以及“癥狀和體征”指標(biāo)的變化。干預(yù)結(jié)束后,對(duì)于正常組、病證組、核心成分組:采用ELISA法檢測(cè)各組大鼠血清生化指標(biāo),HE染色觀察各組大鼠心、腦、腎組織病理學(xué)變化,掃描電鏡觀察各組大鼠腎動(dòng)脈和腸系膜動(dòng)脈內(nèi)膜形態(tài),Western Blot檢測(cè)各組大鼠胸主動(dòng)脈AKT和TGF-β1蛋白的表達(dá),RT-PCR檢測(cè)各組大鼠胸主動(dòng)脈KK、ACE2和mas-1基因的表達(dá);對(duì)于正常組、病證組和周圍成分組,采用基于UPLC-Q-Exactive/MS的代謝組學(xué)技術(shù)檢測(cè)各組大鼠血清代謝物信息,探索鉤藤平肝潛陽(yáng)周圍成分的系統(tǒng)生物學(xué)代謝模式和干預(yù)標(biāo)志物。經(jīng)過以上實(shí)驗(yàn),最終實(shí)現(xiàn)鉤藤平肝潛陽(yáng)效應(yīng)物質(zhì)組核心成分體內(nèi)作用機(jī)制的分子生物學(xué)精確描述和周圍成分體內(nèi)作用機(jī)制的代謝組學(xué)模糊描述。3.應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)手段,對(duì)鉤藤平肝潛陽(yáng)核心成分與周圍成分的效應(yīng)機(jī)制進(jìn)行全面探究,構(gòu)建平肝潛陽(yáng)“成分-靶標(biāo)-通路”網(wǎng)絡(luò)藥理圖。結(jié)果:1.鉤藤敲出熊果酸組分和敲出齊墩果酸組分均能有效降低高血壓病肝陽(yáng)上亢證大鼠血壓水平,降低大鼠面溫,減少飲水量,能夠提高大鼠痛閾、延長(zhǎng)旋轉(zhuǎn)時(shí)間,同時(shí)逆轉(zhuǎn)高血壓病肝陽(yáng)上亢證大鼠血清生化指標(biāo)的變化以及11個(gè)生物標(biāo)志物的異常表達(dá)。結(jié)合前期研究結(jié)果進(jìn)行綜合藥效分析發(fā)現(xiàn),敲出熊果酸組、敲出異去氫鉤藤堿組和纈沙坦組對(duì)高血壓病肝陽(yáng)上亢證大鼠的干預(yù)效果最好,其次為敲出去氫鉤藤堿組,而敲出齊墩果酸組、敲出鉤藤堿組和敲出異鉤藤堿組效果較差,尤以敲出異鉤藤堿組效果最差。2.異鉤藤堿能夠有效降低高血壓病肝陽(yáng)上亢證大鼠血壓水平,改善大鼠的“癥狀與體征”量化指標(biāo),逆轉(zhuǎn)大鼠血清生化指標(biāo)的異常變化,改善大鼠心、腦、腎組織光鏡下的病理學(xué)變化,改善腎動(dòng)脈和腸系膜動(dòng)脈內(nèi)膜形態(tài),調(diào)整大鼠胸主動(dòng)脈AKT、TGF-β1蛋白以及KK、ACE2和mas-1 mRNA的異常表達(dá)。鉤藤平肝潛陽(yáng)周圍成分能夠有效降低高血壓病肝陽(yáng)上亢證大鼠血壓水平,改善大鼠的“癥狀與體征”量化指標(biāo),對(duì)大鼠血清中參與脂類代謝以及能量代謝的13個(gè)差異代謝物的異常表達(dá)產(chǎn)生不同程度的調(diào)節(jié)。3.網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)鉤藤平肝潛陽(yáng)效應(yīng)成分主要通過調(diào)控AKT2、CASP、IL4、IL10、MAPK1等50個(gè)靶點(diǎn),干預(yù)MAPK信號(hào)通路、T細(xì)胞受體信號(hào)通路、Ras信號(hào)通路以及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子信號(hào)通路等8條主要通路,調(diào)節(jié)細(xì)胞因子、神經(jīng)遞質(zhì)、激素等的表達(dá)從而發(fā)揮平肝潛陽(yáng)的效應(yīng)。結(jié)論:1.異鉤藤堿為鉤藤平肝潛陽(yáng)效應(yīng)的核心成分。2.異鉤藤堿對(duì)高血壓病肝陽(yáng)上亢證大鼠產(chǎn)生干預(yù)效應(yīng)的機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮舒縮因子包括Ang II、ET-1和NO的水平,抑制RAAS系統(tǒng)和交感神經(jīng)系統(tǒng)活性以及促進(jìn)ACE-Ang1-7-mas-AKT信號(hào)通路中相關(guān)信號(hào)分子的表達(dá),增強(qiáng)KK基因的表達(dá),調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮舒縮因子的釋放等途徑實(shí)現(xiàn)的。異鉤藤堿能夠有效改善高血壓病肝陽(yáng)上亢證大鼠心、腦、腎組織病理形態(tài)學(xué)變化,改善大鼠腎動(dòng)脈和腸系膜動(dòng)脈內(nèi)膜形態(tài)結(jié)構(gòu),抑制TGFβ-1蛋白的表達(dá),從而改善大鼠血管的重構(gòu)。鉤藤平肝潛陽(yáng)效應(yīng)周圍成分對(duì)高血壓病肝陽(yáng)上亢證大鼠干預(yù)效應(yīng)的代謝組學(xué)機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)大鼠血清脂類代謝和能量代謝通路中13個(gè)相關(guān)的差異代謝物的異常表達(dá)來(lái)完成的。3.鉤藤平肝潛陽(yáng)效應(yīng)成分主要通過干預(yù)MAPK信號(hào)通路、T細(xì)胞受體信號(hào)通路、Ras信號(hào)通路以及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子信號(hào)通路等8條主要信號(hào)通路發(fā)揮平肝潛陽(yáng)的效應(yīng)。
【圖文】：

圖 1-1 模型復(fù)制效果 PLS 二維得分圖 group，model control group，，模型組；DS group，disease syndrome group，nmined group，驗(yàn)證組。物干預(yù)對(duì)各組大鼠血壓的影響

圖 1-2 治療前后各組大鼠血壓變化比較注：*與同一時(shí)間點(diǎn)正常組比較，P<0.01；■與同一時(shí)間點(diǎn)模型組比較，P<0.01；●與同一時(shí)間點(diǎn)病證組比較，P<0.05；▲與本組治療前比較，P<0.01。NC, normal control group, 正常組；MC, modelcontrol group, 模型組；DS, disease syndrome group，病證組；DS+(-UA), disease syndrome+(-ursolic
【學(xué)位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2669821