【摘要】：目的:乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)等因素所致的肝損傷進一步發(fā)展會產(chǎn)生肝纖維化,而肝纖維化的控制與預(yù)防對慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)的治療具有至關(guān)重要的作用。雞骨草是豆科相思子屬植物廣州相思子(Abrus cantoniensis Hance,AC)的干燥全草,《中國藥典》收載,具有利濕退黃、清熱解毒、疏肝止痛的功效。臨床上用于治療肝硬化腹水、急慢性肝炎具有較好療效。我們前期研究也證實雞骨草具有抗肝纖維化作用。然而其物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機制尚不清楚。為了科學(xué)地評價雞骨草資源及質(zhì)量,闡明其抗肝纖維化的物質(zhì)基礎(chǔ),本課題對雞骨草和毛雞骨草進行生藥學(xué)比較研究及其抗肝纖維化活性的系統(tǒng)評價,為雞骨草的合理開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。方法:1、通過搜索中國植物志、中國數(shù)字植物標(biāo)本館、維普、萬方、Pubmed等數(shù)據(jù)庫,結(jié)合野外調(diào)查與市場調(diào)查,對雞骨草的資源分布進行調(diào)查研究以及對其生藥學(xué)特性進行研究。2、通過制作雞骨草和毛雞骨草莖和葉片的石蠟切片,用顯微鏡觀察二者的組織構(gòu)造區(qū)別。3、對雞骨草和毛雞骨草的揮發(fā)油和脂肪酸的成分進行比較。并對雞骨草的乙酸乙酯和正丁醇部位進行LC-MS分析。4、應(yīng)用Discovery Studio 3.0軟件中的分子對接模塊和ADMET(藥物的吸收、分布、代謝、排泄和毒性)模塊對相思子屬的243個已知化合物進行活性預(yù)測和成藥性評價。5、采用HSC-T6細胞篩選雞骨草的抗肝纖維化活性成分;采用昆明小鼠(Kunming mice,KM)制作免疫性肝纖維化模型進行雞骨草預(yù)防和治療肝纖維化活性成分的體內(nèi)篩選。結(jié)果:1、調(diào)查研究表明雞骨草主要分布在我國廣西和廣東地區(qū),湖南、海南和香港也有分布,喜高溫,不耐寒,耐旱怕澇。2、通過雞骨草與毛雞骨草的形態(tài)鑒定和顯微鑒定,基于其小葉、外形、株重以及次生木質(zhì)部導(dǎo)管和葉片的柵欄組織特征,建立雞骨草與毛雞骨草的特征檢索表,可對兩者進行正確區(qū)分。3、通過比較雞骨草和毛雞骨草的揮發(fā)油成分,二者主要成分中除了(±)-α-乙酸松油酯(24.30%和20.07%)為共有成分外,雞骨草藥材中含量較高的丁香酚甲醚(22.22%)、茴香腦(14.08%)、鄰乙酰苯酚(3.07%)、芍藥醇(2.41%)等成分,在毛雞骨草中都未檢測出。而在毛雞骨草藥材中含量較高的α-乙基-己酸(25.84%)揮發(fā)油成分在雞骨草中也并未檢測出來。4、通過比較雞骨草與毛雞骨草脂肪酸的成分,二者共有成分為棕櫚酸(27.12%和19.31%)、十八烷酸(5.22%和9.64%)、十五烷酸(0.22%和0.34%),此外,從主要成分來看雞骨草中含有亞油酸(16.89%)和豆甾烷醇(1.68%),而毛雞骨草中則含有豆甾醇(6.81%)和菜油甾醇(1.34%)。5、通過分析雞骨草乙酸乙酯和正丁醇萃取部位的lc-ms,分別鑒定出了36和26個化合物,其中乙酸乙酯萃取部位的主要成分為有機酸類和黃酮類,并存在許多其他類成分。而正丁醇萃取部位則存在四類成分(三萜皂苷類、黃酮類、生物堿類以及糖類)且都具有一定的藥理活性。6、通過分子對接和admet預(yù)測,提示雞骨草中的三萜皂苷類和有機酸類成分與肝病有關(guān)受體對接分?jǐn)?shù)較高,且admet預(yù)測中具有較好的水溶性、較好的人體腸道吸收性、無肝毒性、無細胞色素p4502d6的抑制性、良好的血腦屏障通透性以及較低的血漿蛋白結(jié)合率,而生物堿的預(yù)測表明具有肝毒性、細胞色素p4502d6的抑制性以及較差的血腦屏障透通性,在開發(fā)研究時應(yīng)注意。7、體外抗肝纖維化實驗結(jié)果表明,雞骨草石油醚萃取部位對hsc-t6細胞具有最佳的抑制作用(p0.001),抑制率達87%。8、體內(nèi)牛血清白蛋白(bovineserumalbumin,bsa)免疫性肝纖維化模型實驗表明,雞骨草正丁醇萃取部位和石油醚萃取部位分別對預(yù)防和治療肝纖維化疾病具有較好的療效,與模型組相比,二者均能明顯地降低血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶的值,同時能顯著性地降低肝組織中羥脯氨酸、單胺氧化酶、層黏蛋白、透明質(zhì)酸、Ⅲ型前膠原、Ⅳ型膠原、轉(zhuǎn)化生長因子β1的值(p0.05)。9、體外抗肝纖維化實驗結(jié)果表明,亞油酸對hsc-t6細胞具有最佳的抑制作用(p0.001),抑制率達90%。結(jié)論:1、通過雞骨草資源調(diào)查明確了雞骨草資源主要分布在兩廣地區(qū),主要的混淆品是毛雞骨草、相思子、小葉三點金和小葉黑面神。2、通過雞骨草和毛雞骨草的形態(tài)鑒定和顯微鑒定明確了雞骨草和毛雞骨草的形態(tài)差異和顯微差異,為正確鑒別雞骨草藥材提供依據(jù)。3、通過雞骨草各萃取部位的成分分析、化合物的虛擬篩選以及體內(nèi)外實驗明確了雞骨草的石油醚萃取部位在治療肝纖維化上具有顯著作用(p0.05),而雞骨草正丁醇部位則在預(yù)防肝纖維化過程中具有顯著作用(P0.05)。并通過體外實驗證實雞骨草有機酸類成分的抗肝纖維化活性。
【圖文】：

達到社會、經(jīng)濟及生態(tài)三者協(xié)調(diào)發(fā)展，為人類衛(wèi)足量的中藥材原料[22]。紹中藥雞骨草的資源調(diào)查，首先是介紹雞骨草的進行調(diào)研研究，最后是對現(xiàn)在市場上雞骨草的偽草的資源分布豆科相思子屬植物廣州相思子 Abrus cantoniensi品種。通過野外實地考察，國內(nèi)主要標(biāo)本館及中國.org.cn/）標(biāo)本查閱，結(jié)合文獻調(diào)查可知，雞骨草主南、海南、香港也有分布（圖 1-1），廣西主要分布分布在中部地區(qū)（圖 1-3）[23]。該植物主要生長荒山坡地、草叢、林緣及稀林中。雞骨草喜高溫 20.9℃~22.4℃，年降雨量約 1202~2080mm[24]。

雞骨草主要分布在我國廣西、廣東地區(qū)，湖南、海南、香港也有分布（圖 1-1），廣西主要分布在其東南地區(qū)（圖1-2），廣東則主要分布在中部地區(qū)（圖 1-3）[23]。該植物主要生長在海拔 200m 以下陽光充足的丘陵、荒山坡地、草叢、林緣及稀林中。雞骨草喜高溫，，不耐寒，耐旱怕澇，年均氣溫應(yīng)達 20.9℃~22.4℃，年降雨量約 1202~2080mm[24]。圖 1-1 雞骨草藥材在全國的分布圖Fig. 1-1 national distribution ofAC注：紅色區(qū)域雞骨草植物分布較綠色區(qū)域密集
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284.1;R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2668705