【摘要】：目的:石見穿是我國的傳統(tǒng)中草藥,擁有活血化瘀、清熱解毒、消腫止痛的功效,常用來治療感染性疾病和婦科疾病。藥理實驗研究證明,石見穿擁有良好的抗癌效果,對多種惡性腫瘤均有較好治療作用。本實驗通過制備石見穿含藥血清,并作用于乳腺癌細胞MCF-7,觀察石見穿對乳腺癌細胞增殖和凋亡的影響,及microRNA-21與凋亡蛋白Bcl-2表達的影響,探究石見穿的抗癌機制,為乳腺癌的中醫(yī)藥治療提供新的臨床用藥參考與依據(jù)。方法:以石見穿為研究對象,篩選32只SPF級雌性SD大鼠,隨機分為A、B、C、D四組,分別為石見穿組、中藥復(fù)方對照組、陽性對照(環(huán)磷酰胺)組、空白對照組(生理鹽水),每日進行灌胃給藥,7日后經(jīng)腹主動脈采血,分離血清,獲得含藥血清。用含藥血清處理乳腺癌細胞MCF-7,通過CCK8實驗觀察含藥血清作用下乳腺癌細胞的增殖抑制率,并用流式細胞術(shù)檢測乳腺癌細胞的凋亡情況;運用real-time PCR和Western Blot分別檢測microRNA-21和Bcl-2表達水平,探討石見穿抗乳腺癌的分子機制。結(jié)果:1.石見穿對乳腺癌細胞MCF-7的增殖與凋亡的影響CCK8實驗結(jié)果:含藥血清A、B、C組分別作用于乳腺癌細胞MCF-7 24小時,48小時,72小時后,乳腺癌細胞的吸光度逐漸降低,且與濃度的增加成反比。其中10%復(fù)方組、20%復(fù)方組、10%陽性組的含藥血清作用24小時及5%復(fù)方組含藥血清作用48小時,與同濃度同時間空白對照組(D組)比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);20%石見穿組、20%陽性組的含藥血清作用24小時,石見穿組的三個濃度組(5%、10%、20%)、10%復(fù)方組、20%復(fù)方組、陽性組的三個濃度組(5%、10%、20%)作用48小時及石見穿組、復(fù)方組、陽性組的三個濃度組(5%、10%、20%)含藥血清作用72小時,與同時間同濃度空白組比較,均具有顯著性差異(P0.01)。而含藥血清作用24小時的5%的石見穿組、復(fù)方組、陽性組和10%石見穿組,分別與同濃度同時間空白組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。流式細胞術(shù)實驗結(jié)果:20%含藥血清作用于乳腺癌細胞24小時后,A組(石見穿組)凋亡率為48%,B組(復(fù)方組)凋亡率為38%,C組(環(huán)磷酰胺組)凋亡率為75.8%,D組(空白組)凋亡率為1.2%。A、B、C三組凋亡率與D組比較有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)。20%含藥血清作用于細胞48小時后,A組凋亡率為65.6%,B組凋亡率為47.7%,C組凋亡率為79%,D組凋亡率為1.1%。A、B、C三組凋亡率與D組比較均有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)。2.石見穿對miR-21、Bcl-2的表達影響Real-time PCR實驗:A、B、C、D組含藥血清作用于乳腺癌細胞MCF-748小時后,miR-21的表達量有差異,表達量由低到高依次是C、A、B、D。且A、B、C組與D組之間比較,表達量有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)。Western Blot實驗:A、B、C、D組含藥血清作用于乳腺癌細胞MCF-7 48小時后,Bcl-2的表達量有差異,表達量由高到低依次是D、B、A、C。且A、B、C組與D組之間比較,表達量有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)。結(jié)論:石見穿能通過抑制乳腺癌細胞的增殖和促使乳腺癌細胞凋亡起到抗腫瘤的作用,且可下調(diào)microRNA-21表達,下調(diào)Bcl-2蛋白表達水平,表明石見穿抗癌的機制可能與下調(diào)microRNA-21及Bcl-2有關(guān),從而抑制乳腺癌細胞的增殖和誘導(dǎo)乳腺癌的凋亡,起到抗癌作用。
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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