【摘要】：目的:石見穿是我國的傳統(tǒng)中草藥,擁有活血化瘀、清熱解毒、消腫止痛的功效,常用來治療感染性疾病和婦科疾病。藥理實(shí)驗(yàn)研究證明,石見穿擁有良好的抗癌效果,對(duì)多種惡性腫瘤均有較好治療作用。本實(shí)驗(yàn)通過制備石見穿含藥血清,并作用于乳腺癌細(xì)胞MCF-7,觀察石見穿對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響,及microRNA-21與凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)的影響,探究石見穿的抗癌機(jī)制,為乳腺癌的中醫(yī)藥治療提供新的臨床用藥參考與依據(jù)。方法:以石見穿為研究對(duì)象,篩選32只SPF級(jí)雌性SD大鼠,隨機(jī)分為A、B、C、D四組,分別為石見穿組、中藥復(fù)方對(duì)照組、陽性對(duì)照(環(huán)磷酰胺)組、空白對(duì)照組(生理鹽水),每日進(jìn)行灌胃給藥,7日后經(jīng)腹主動(dòng)脈采血,分離血清,獲得含藥血清。用含藥血清處理乳腺癌細(xì)胞MCF-7,通過CCK8實(shí)驗(yàn)觀察含藥血清作用下乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制率,并用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞的凋亡情況;運(yùn)用real-time PCR和Western Blot分別檢測(cè)microRNA-21和Bcl-2表達(dá)水平,探討石見穿抗乳腺癌的分子機(jī)制。結(jié)果:1.石見穿對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖與凋亡的影響CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果:含藥血清A、B、C組分別作用于乳腺癌細(xì)胞MCF-7 24小時(shí),48小時(shí),72小時(shí)后,乳腺癌細(xì)胞的吸光度逐漸降低,且與濃度的增加成反比。其中10%復(fù)方組、20%復(fù)方組、10%陽性組的含藥血清作用24小時(shí)及5%復(fù)方組含藥血清作用48小時(shí),與同濃度同時(shí)間空白對(duì)照組(D組)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);20%石見穿組、20%陽性組的含藥血清作用24小時(shí),石見穿組的三個(gè)濃度組(5%、10%、20%)、10%復(fù)方組、20%復(fù)方組、陽性組的三個(gè)濃度組(5%、10%、20%)作用48小時(shí)及石見穿組、復(fù)方組、陽性組的三個(gè)濃度組(5%、10%、20%)含藥血清作用72小時(shí),與同時(shí)間同濃度空白組比較,均具有顯著性差異(P0.01)。而含藥血清作用24小時(shí)的5%的石見穿組、復(fù)方組、陽性組和10%石見穿組,分別與同濃度同時(shí)間空白組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:20%含藥血清作用于乳腺癌細(xì)胞24小時(shí)后,A組(石見穿組)凋亡率為48%,B組(復(fù)方組)凋亡率為38%,C組(環(huán)磷酰胺組)凋亡率為75.8%,D組(空白組)凋亡率為1.2%。A、B、C三組凋亡率與D組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。20%含藥血清作用于細(xì)胞48小時(shí)后,A組凋亡率為65.6%,B組凋亡率為47.7%,C組凋亡率為79%,D組凋亡率為1.1%。A、B、C三組凋亡率與D組比較均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。2.石見穿對(duì)miR-21、Bcl-2的表達(dá)影響Real-time PCR實(shí)驗(yàn):A、B、C、D組含藥血清作用于乳腺癌細(xì)胞MCF-748小時(shí)后,miR-21的表達(dá)量有差異,表達(dá)量由低到高依次是C、A、B、D。且A、B、C組與D組之間比較,表達(dá)量有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。Western Blot實(shí)驗(yàn):A、B、C、D組含藥血清作用于乳腺癌細(xì)胞MCF-7 48小時(shí)后,Bcl-2的表達(dá)量有差異,表達(dá)量由高到低依次是D、B、A、C。且A、B、C組與D組之間比較,表達(dá)量有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。結(jié)論:石見穿能通過抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖和促使乳腺癌細(xì)胞凋亡起到抗腫瘤的作用,且可下調(diào)microRNA-21表達(dá),下調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)水平,表明石見穿抗癌的機(jī)制可能與下調(diào)microRNA-21及Bcl-2有關(guān),從而抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)乳腺癌的凋亡,起到抗癌作用。
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2667434