【摘要】：目的通過觀察參地補腎膠囊含藥血清對高糖誘導的人腎小管上皮(HK-2)細胞轉分化中細胞形態(tài)學變化及對ZO-1、α-SMA表達的影響,從分子生物學水平探討參地補腎膠囊干預腎小管上皮細胞轉分化的機制。方法1.健康雄性SD大鼠40只,隨機分成四組后,分別給予參地補腎膠囊、貝那普利、生理鹽水連續(xù)灌胃7天,于末次灌胃2h后,制備大鼠含藥血清。2.將體外培養(yǎng)的人腎小管上皮細胞隨機分為四組,C組空白對照組(10%大鼠正常血清+K-SFM培養(yǎng)基+5.5m M D-葡萄糖)、H組高糖模型組(10%大鼠正常血清+K-SFM培養(yǎng)基+25m M D-葡萄糖)、B組貝那普利組(10%大鼠貝那普利藥物血清+K-SFM培養(yǎng)基+25m M D-葡萄糖)、S組參地補腎組(10%大鼠參地補腎藥物血清+K-SFM培養(yǎng)基+25m M D-葡萄糖),作用72h后,用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)學變化,用Western Blot方法檢測ZO-1、α-SMA蛋白的表達情況,用Real Time PCR方法檢測ZO-1m RNA的表達情況。結果1.各組細胞形態(tài)學變化:空白對照組細胞貼壁生長,細胞呈方形或多角形,細胞間緊密連接,形成典型“鋪路石”樣形態(tài)。高糖模型組細胞變大變長,呈梭型改變,表現(xiàn)為成纖維細胞樣形態(tài),細胞間隙變大,排列松散,大量細胞脫落,喪失原有“鋪路石”樣外觀。貝那普利組及參地補腎組細胞接近空白對照組細胞,與高糖模型組比較,脫落細胞及“變形”細胞減少,細胞間隙縮小,大部分細胞仍呈貼壁生長,呈多邊鵝卵石狀。貝那普利組及參地補腎組細胞無明顯差異。2.各組細胞ZO-1、ZO-1m RNA的表達情況:空白對照組細胞ZO-1呈高表達,高糖模型組、貝那普利組與參地補腎組表達量均低于空白對照組,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);與高糖模型組比較,貝那普利組、參地補腎組ZO-1表達量均高于高糖模型組,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),與貝那普利組比,參地補腎組ZO-1表達量更高,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。Real time PCR檢測結果顯示,與空白對照組比較,高糖模型組、貝那普利組及參地補腎組ZO-1m RNA表達量均低于空白對照組,高糖模型組與空白對照組差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),貝那普利組與空白對照組差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),參地補腎組與空白對照組差異無統(tǒng)計學意義(p0.05);與高糖模型組比,貝那普利組及參地補腎組ZO-1m RNA表達量高于高糖模型組,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),與貝那普利組比較,參地補腎組ZO-1m RNA表達量更高,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。3.各組細胞a-SMA的表達情況:空白對照組細胞a-SMA呈低表達,高糖模型組、貝那普利組、參地補腎組a-SMA表達均高于空白對照組,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。與高糖模型組比,貝那普利組及參地補腎組a-SMA表達均低于高糖模型組,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。與貝那普利組比,參地補腎組a-SMA表達低于貝那普利組,有統(tǒng)計學意義(p0.05)。結論1.參地補腎膠囊能夠抑制腎小管上皮細胞向肌成纖維細胞轉分化。2.參地補腎膠囊可能是通過上調細胞ZO-1,下調α-SMA的表達延緩腎小管上皮細胞EMT。
【圖文】：

各組勿維T}1mRIVA的表達偏祝

黑龍江省中醫(yī)藥科學院碩士學位論文表 7 各組細胞 ZO-1mRNA 表達結果（ X ± S ）組別 ZO-1mRNA空白對照組（C 組）1.00±0.010A0.37±0.008C0.69±0.096B0.91±0.013A高糖模型組（H 組）貝那普利組（B 組）參地補腎組（S 組）標有不同字母表示組間差異顯著（P<0.05），，數(shù)值均為半定量標準化表達數(shù)
【學位授予單位】：黑龍江省中醫(yī)藥科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2666724