發(fā)布時(shí)間：2020-05-16 00:21

【摘要】：目的:胃癌是一種常見的實(shí)體惡性腫瘤,具有較高的發(fā)病率和死亡率。我國屬于胃癌高發(fā)地區(qū),嚴(yán)重威脅著人民生命安全和生活質(zhì)量。目前的醫(yī)療現(xiàn)狀表明,胃癌的治療狀況不盡如人意,迫切需要尋求新的治療思路和方法。小白菊內(nèi)酯(PN)是一種倍半萜內(nèi)酯類天然產(chǎn)物,以往的研究表明,PN具有多種重要的藥理活性,尤其是PN可以在多種癌癥中發(fā)揮抗腫瘤作用,但是PN在腫瘤細(xì)胞中發(fā)揮細(xì)胞毒作用的機(jī)制卻不夠清晰。本研究旨在探索及闡明PN在胃癌中的抗腫瘤作用及機(jī)制。方法:胃癌細(xì)胞BGC-823、SGC-7901和MGC-803,均被分為二甲亞砜(DMSO)組、PN組及PN聯(lián)合N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)組,DMSO組常規(guī)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),PN組采用不同濃度的PN處理細(xì)胞,PN聯(lián)合NAC組采用PN聯(lián)合NAC處理細(xì)胞。運(yùn)用cck8技術(shù)檢測在不同時(shí)間點(diǎn)以不同濃度的PN處理細(xì)胞后,三種胃癌細(xì)胞的活力,并檢測PN聯(lián)合使用NAC前后細(xì)胞活力的變化;PN處理前后細(xì)胞增殖能力的變化則運(yùn)用克隆形成實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測;而PN處理前后細(xì)胞周期的比例、細(xì)胞凋亡水平的變化以及PN聯(lián)合NAC處理細(xì)胞前后的細(xì)胞凋亡水平、細(xì)胞內(nèi)ROS生成水平的變化則采取流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測;運(yùn)用還原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)檢測試劑盒檢測使用PN處理前后細(xì)胞內(nèi)GSH水平的變化;western blot用以檢測細(xì)胞周期相關(guān)蛋白、細(xì)胞死亡相關(guān)蛋白以及絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(Akt)/叉頭框蛋白O3a(FoxO3a)和酪氨酸激酶2(JAK2)/信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄因子3(STAT3)信號通路相關(guān)蛋白水平的變化。結(jié)果:隨著PN處理時(shí)間及給藥濃度的增加,與DMSO組相比,BGC-823、SGC-7901和MGC-803三種胃癌細(xì)胞的活力及增殖能力均下降(P0.01)。細(xì)胞周期被阻滯在G1期(P0.01),周期相關(guān)細(xì)胞周期蛋白(Cyclin)D1及CyclinE1水平下降,P53及P21蛋白表達(dá)增加(P0.01)�？偟蛲霰壤黠@增加(P0.01),且凋亡相關(guān)蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)8、caspase9和caspase3剪切型表達(dá)水平上升,B淋巴細(xì)胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2同源殺傷劑(Bak)的蛋白表達(dá)變化不明顯、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)水平顯著上升,而細(xì)胞FADD樣IL-1β轉(zhuǎn)換酶抑制蛋白(c-HLIP)的長型和短型蛋白的表達(dá)均下降(P0.01)。并且,ADP-核糖聚合酶1(PARP1)的剪切型及核內(nèi)凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)、巨噬細(xì)胞遷移抑制因子(MIF)的水平明顯上升(P0.01);受體相互作用蛋白激酶(RIP)、RIP3蛋白的磷酸化水平同樣升高(P0.01)。同時(shí),與DMSO組進(jìn)行比較,細(xì)胞內(nèi)活性氧簇(ROS)生成水平均上升(P0.01);而聯(lián)合使用NAC后,細(xì)胞內(nèi)ROS的生成水平顯著降低,細(xì)胞活力升高,細(xì)胞凋亡率降低(P0.01)。PN處理后細(xì)胞內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)水平降低,而與GSH聯(lián)用后,細(xì)胞活力顯著回升(P0.01)。Akt、p-FoxO3a蛋白表達(dá)水平顯著上升,p-JAK2、p-STAT3蛋白表達(dá)水平則呈下降趨勢(P0.01)。結(jié)論:PN通過ROS依賴性途徑誘導(dǎo)人源胃癌細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞周期阻滯、細(xì)胞凋亡、parthanatos和壞死性凋亡。
【圖文】：

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1 PN 對胃癌細(xì)胞有細(xì)胞毒作用光鏡下可清晰的觀察到，DMSO 組中的胃癌細(xì)胞形態(tài)清晰，排列整齊，貼壁性良好，結(jié)構(gòu)完整；PN 組中的胃癌細(xì)胞排列紊亂、細(xì)胞體積縮小，結(jié)構(gòu)不完整，細(xì)胞間隙增大，并且形成大量空泡，，細(xì)胞膜皺縮、破裂，細(xì)胞核皺縮，細(xì)胞大面積死亡。見圖 1。

第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.2 PN 對胃癌細(xì)胞的細(xì)胞活力有抑制作用使用 CCK-8 技術(shù)測定評估 PN 對人胃癌細(xì)胞 BGC-823，SGC-7901 和 MGC-803 的細(xì)胞活力的影響。與 DMSO 組相比，不同濃度（12.5、15、17.5、20、22.5μM）的 PN 作用于胃癌細(xì)胞 24h、48h 和 72h 后，能明顯抑制胃癌細(xì)胞的細(xì)胞活力，隨著 PN濃度的增加，細(xì)胞活力呈顯著下降趨勢（P＜0. 001），呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴效應(yīng)。經(jīng)過擬合計(jì)算 IC50，以 24h后 PN的濃度為 17.5μM 時(shí)對胃癌細(xì)胞活力的抑制作用最為明顯，因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)采用 17.5μM 為工作濃度。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PN呈現(xiàn)時(shí)間-劑量依賴性抑制胃癌細(xì)胞的細(xì)胞活力。見圖 2。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2665851