黃柏水煎液對(duì)下肢靜脈性潰瘍愈合中NF-KB、鋅指蛋白A20表達(dá)的影響

發(fā)布時(shí)間：2020-05-16 00:00

【摘要】：目的:通過臨床觀察及動(dòng)物實(shí)驗(yàn),來證明黃柏治療下肢靜脈性潰瘍的有效性,進(jìn)一步研究黃柏對(duì)下肢靜脈性潰瘍愈合中NF-κB、鋅指蛋白A20表達(dá)的影響。方法:臨床觀察上,應(yīng)用隨機(jī)平均分組法,將48例下肢靜脈性潰瘍的患者分為治療組與對(duì)照組以及空白組。治療組在常規(guī)給予丹參川芎嗪注射液靜脈滴注基礎(chǔ)上,給予黃柏水煎液外敷潰瘍處。對(duì)照組在常規(guī)給予丹參川芎嗪注射液靜脈滴注基礎(chǔ)上,給予復(fù)方黃柏液外敷�？瞻捉M給予丹參川芎嗪注射液靜脈滴注基礎(chǔ)上,給予生理鹽水清創(chuàng)換藥,不給于外敷藥物。通過觀察其潰瘍表面色澤,創(chuàng)面肉芽組織,潰瘍面積大小以及愈合時(shí)間的改變情況,來評(píng)判藥物效果。實(shí)驗(yàn)研究上,創(chuàng)新建立了大鼠下肢靜脈性潰瘍模型。治療組選擇黃柏水煎液外敷大鼠創(chuàng)面,陽性藥對(duì)照組選擇復(fù)方黃柏液外敷。采用ELISA法檢測(cè)血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平,應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)潰瘍組織中NFκBp65、IκBα和TNFAIP3mRNA表達(dá),以及WB法檢測(cè)潰瘍組織中NFκBp65、IκB和TNFAIP3蛋白的表達(dá)。結(jié)果:臨床觀察:黃柏水煎液外用治療下肢靜脈性潰瘍16例,治愈5例,顯效5例,進(jìn)步1例,無效5例,總有效率為68.75%。對(duì)照組治療下肢靜脈性潰瘍16例,治愈6例,顯效4例,進(jìn)步2例,無效4例,總有效率為75%。空白組治愈3例,顯效4例,進(jìn)步3例,無效6例,總有效率為62.5%。1.治療組與空白組相比,總有效率有明顯的差異(P0.05),證明黃柏水煎液治療下肢靜脈性潰瘍有效。2.治療組與對(duì)照組相比,總有效率有明顯的差異(P0.05),證明復(fù)方黃柏液治療效果優(yōu)于黃柏水煎液。3.治療組在潰瘍表面色澤,創(chuàng)面肉芽組織,潰瘍面積大小以及愈合時(shí)間的改變與空白組對(duì)比,均有明顯差異(P0.05);治療組在與對(duì)照組對(duì)比上,均無明顯差異(P0.05)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn):1.本實(shí)驗(yàn)創(chuàng)新建立了大鼠下肢靜脈性潰瘍模型。大鼠造模后陸續(xù)出現(xiàn)下肢腫脹、皮色暗紅,潰瘍創(chuàng)面有膿性分泌物滲出,食量減少、飲水減少、少動(dòng)、弓背等癥狀。給藥后對(duì)照組與治療組癥狀緩解較空白組明顯,對(duì)照組與治療組比較無明顯差異。2.HE染色光鏡下的變化空白7天組:細(xì)胞呈梭形,組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)排列整齊,大小均勻。模型7天組:炎細(xì)胞大量出現(xiàn),組織水腫明顯,紅細(xì)胞明顯,組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)疏松。治療7天組:組織水腫開始消退,炎細(xì)胞減少,結(jié)締組織開始增生。對(duì)照7天組:組織水腫開始消退,炎細(xì)胞減少,結(jié)締組織開始增生。模型14天組:正常細(xì)胞組織破壞明顯,大量炎細(xì)胞增生,纖維結(jié)締組織增生。治療14天組:組織水腫消失,炎細(xì)胞減少明顯幾乎消失,結(jié)締組織增生明顯。對(duì)照14天組:水腫消失,炎細(xì)胞消失不見,結(jié)締組織大量增生。3.取創(chuàng)面組織檢測(cè)的IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,在模型成立后,模型組隨著時(shí)間的推移,其含量增加明顯。在治療組與對(duì)照組中以上三者含量與模型組比較有顯著的降低。治療組與模型組比較得出,治療組含量明顯低于模型組,有顯著性差異(P0.05)。治療組與對(duì)照組比較,含量沒有明顯差異,P0.05,不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.通過PCR以及WB檢測(cè)得出,隨著模型成立后時(shí)間的延長,在模型組上,NF-κB mRNA陽性表達(dá)明顯,IκBα、TNFAIP3/A20表達(dá)水平下降。在治療組與對(duì)照組上,NF-KBmRNA水平下降,IκBα、TNFAIP3/A20的水平上調(diào)明顯。治療組與模型組比較,NF-κB表達(dá)降低明顯,IκBα、TNFAIP3/A20表達(dá)量增高,有顯著性差異(P0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療組與對(duì)照組比較,在NF-κB與TNFAIP3/A20表達(dá)上,兩者不具有明顯差異,P0.05,不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而在檢測(cè)IκBα表達(dá)時(shí),在14天結(jié)果中通過統(tǒng)計(jì)學(xué)得出,對(duì)照組表達(dá)優(yōu)于治療組,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:臨床觀察:黃柏水煎液外用治療下肢靜脈性潰瘍有效,其總效率為81.25%動(dòng)物實(shí)驗(yàn):1.本實(shí)驗(yàn)創(chuàng)新建立了大鼠下肢靜脈性潰瘍模型。2.通過測(cè)定IL-1β、IL-6、TNF-α的含量以及大鼠創(chuàng)面的變化情況,驗(yàn)證大鼠下肢靜脈性潰瘍模型的成功建立。進(jìn)一步驗(yàn)證了黃柏水煎液通過降低IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,有效治療下肢靜脈性潰瘍。3.TNFAIP3/A20是通過激活I(lǐng)κB,從而抑制NF-κB通路,降低了炎癥反應(yīng),達(dá)到治療下肢靜脈性潰瘍的目的,為臨床治療提供了新的思路與途徑。4.黃柏水煎液可通過提高TNFAIP3/A20蛋白的表達(dá),從而抑制NF-κB的表達(dá)而有效的治療了大鼠下肢靜脈性潰瘍。5.黃柏水煎液與復(fù)方黃柏液對(duì)比發(fā)現(xiàn),結(jié)果沒有顯著性差異(P0.05)。
【圖文】：

標(biāo)準(zhǔn)曲線,標(biāo)準(zhǔn)曲線,中醫(yī)藥大學(xué),博士學(xué)位論文