【摘要】：目的:研究雷公藤紅素對人骨肉瘤細(xì)胞系HOS中膜聯(lián)蛋白A3(Annexin A3,ANXA3)表達(dá)的影響及對骨肉瘤細(xì)胞抑制的作用機(jī)制,為骨肉瘤免疫靶向治療尋求新方法。方法:先用Western blot法檢測成骨細(xì)胞及骨肉瘤HOS、U2OS細(xì)胞中ANXA3表達(dá)水平,然后選取各濃度的雷公藤紅素干預(yù)培養(yǎng)骨肉瘤HOS細(xì)胞,通過相差顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)改變并拍照。用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法分析各濃度藥物對人骨肉瘤細(xì)胞增殖活性的影響,再用Western blot法檢測各組細(xì)胞中ANXA3及自噬特異性蛋白LC3B的表達(dá)水平,最后通過流式細(xì)胞術(shù)檢測人骨肉瘤HOS細(xì)胞凋亡率。結(jié)果:通過Western blot法證實ANXA3在成骨細(xì)胞及骨肉瘤細(xì)胞HOS、U2OS中表達(dá),并且在HOS、U2OS細(xì)胞中表達(dá)較成骨細(xì)胞顯著升高,以HOS細(xì)胞尤為明顯。雷公藤紅素可改變?nèi)斯侨饬黾?xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu),抑制人骨肉瘤細(xì)胞HOS增殖,具有濃度依賴性,并促進(jìn)人骨肉瘤細(xì)胞凋亡,激活自噬特異性蛋白LC3B,抑制ANXA3表達(dá)。結(jié)論:雷公藤紅素通過抑制ANXA3表達(dá),激活自噬特異性蛋白LC3B,抑制骨肉瘤細(xì)胞HOS生長,誘導(dǎo)人HOS細(xì)胞凋亡,高濃度雷公藤紅素可有效殺滅人骨肉瘤HOS細(xì)胞。
【圖文】：

2 結(jié)果2.1 細(xì)胞生長情況光學(xué)顯微鏡下觀察到細(xì)胞貼壁生長，細(xì)胞形狀似梭型或葉狀，滿，，胞核呈圓形，愛抱團(tuán)生長。骨肉瘤細(xì)胞生長較成骨細(xì)胞迅速，U2OS 細(xì)胞傳代 12h 后生長占瓶底面積約 50%，傳代 36h 后占瓶底70-80%。成骨細(xì)胞傳代 12h 后生長占瓶底面積約 30%，傳代 48h 后面積約 50%，傳代 72 小時后占瓶底面積約 70%。2.2 成骨細(xì)胞及骨肉瘤 HOS、U2OS 細(xì)胞中 ANXA3 的蛋白表達(dá)本實驗通過 Western blot 證實 ANXA3 在成骨細(xì)胞，骨肉瘤 HOS細(xì)胞中均表達(dá)，且在骨肉瘤 HOS、U2OS 細(xì)胞中，ANXA3 表達(dá)量明骨細(xì)胞中升高，其中 HOS 細(xì)胞表達(dá)最高，各組間 ANXA3 表達(dá)水平具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，圖 1，2）。

圖 3 雷公藤紅素作用下骨肉瘤 HOS 細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變（10×10）Figure 3 Morphological changes of HOS cells induced by Celastrol2.5 雷公藤紅素抑制 ANXA3 表達(dá)該實驗證實，隨著藥物濃度增加，骨肉瘤 HOS 細(xì)胞中 ANXA3 蛋白表達(dá)逐漸降低，呈濃度依耐性，當(dāng)雷公藤紅素濃度為 0.125μmol/L、0.25μmol/L時，兩組間 ANXA3 表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05,圖 4、圖 5），當(dāng)雷公藤紅素濃度為 0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L 時，各組間 ANXA3 表達(dá)有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05,圖 4、圖 5）。隨著藥物濃度增加，自噬特異性蛋白 LC3B 表達(dá)逐漸升高，0.125μmol/L 與 0.25μmol/L 濃度組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05，圖 4、圖 5）, 當(dāng)雷公藤紅素濃度為 0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L 時，各組間 ANXA3 表達(dá)有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05,圖 4、圖 5）。
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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