【摘要】：據(jù)報道,糖尿病病人的數(shù)量每年都在逐漸增加,形勢十分嚴(yán)峻。本課題所研究的核桃楸葉,是胡桃科胡桃屬植物核桃楸(Juglans Mandshurica Maxim.)的樹葉。據(jù)報道,核桃楸植物的樹根、樹皮,葉、青果皮,果仁均可入藥,主要用于治療抗腫瘤,抗氧化,降血糖等疾病。近些年來,人們對核桃楸樹皮、根皮、果皮和果實的化學(xué)成分及其藥理作用研究報道比較多,但對核桃楸葉的深入研究報道比較少,為了進一步確定核桃楸葉降血糖的活性物質(zhì)及其作用機理,特對核桃楸葉進行深入的研究。目的:基于中藥譜效學(xué)確定核桃楸葉降血糖有效部位、有效成分及其作用。方法:采用系統(tǒng)溶劑法制備核桃楸葉乙醇提取物的不同溶劑萃取部位:建立體外α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性測定模型,測定核桃楸葉乙醇提取物各萃取部位降血糖活性,確定核桃楸葉降血糖有效部位;基于中藥譜效學(xué),運用靶向親和-液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)快速篩選核桃楸葉活性部位中的降血糖的潛在活性成分:建立體外活性篩選模型對潛在活性成分進行單體活性測定;基于分子對接技術(shù)對核桃楸葉中α-葡萄糖苷酶抑制活性成分與α-葡萄糖苷酶分子作用機制的研究。結(jié)果:體外酶活性抑制試驗顯示,核桃楸葉乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位在體外有明顯的抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶作用,其最大半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為0.014 mg/ml和0.130 mg/ml,均強于陽性藥阿卡波糖(IC50分別為0.044 mg/ml和0.158 mg/ml);采用靶向親和-液質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)篩選核桃楸葉中能夠抑制α-葡萄糖苷酶的活性成分,篩選出15種具有潛在抑制α-葡萄糖苷酶的活性成分并推測了其中8種化合物結(jié)構(gòu),根據(jù)親和度大小,選取前6種單體化合物進行單體活性驗證,其中山奈酚,槲皮素,沒食子酸抑制活性均強于陽性藥阿卡波糖,有價值作為重點活性成分進一步研究;采用靶向親和-液質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)篩選核桃楸葉中能夠抑制α-淀粉酶的活性成分,篩選出11種具有潛在抑制α-淀粉酶的活性成分并推測了其中5種化合物結(jié)構(gòu)。根據(jù)親和度大小,選取前4種單體化合物進行單體活性驗證,其中山奈酚抑制活性強于陽性藥阿卡波糖,是核桃楸葉主要的α-淀粉酶抑制活性成分:基于分子對接技術(shù),從抑制活性和對活性單體的選擇性指數(shù)綜合評價,山奈酚為最優(yōu)化合物,槲皮素、沒食子酸、槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷次之,它們均強與阿卡波糖。山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄喃葡萄糖苷和槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷較差,均弱與阿卡波糖。結(jié)論:通過體外酶活性測定實驗,初步確定核桃楸葉乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位應(yīng)為核桃楸葉降血糖的有效部位,通過靶向親和-液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)初步推斷核桃楸葉乙酸乙酯層中有8種潛在的α-葡萄糖苷酶抑制活性成分,針對其中6種潛在的α-葡萄糖苷酶抑制活性成分進行體外單體活性測定,結(jié)果表明6種潛在的α-葡萄糖苷酶抑制活性成分對α-葡萄糖苷酶均有抑制作用,而且其中山奈酚、槲皮素和沒食子酸的抑制活性好于阿卡波糖,可以作為有效的α-葡萄糖苷酶抑制活性成分;通過靶向親和-液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)初步推斷核桃楸葉乙酸乙酯層中5種潛在的α-淀粉酶抑制活性成分,針對其中4種潛在的α-淀粉酶抑制活性成分進行體外單體活性測定,結(jié)果表明4種潛在的α-淀粉酶抑制劑對α-淀粉酶均有抑制作用,而且其中山奈酚抑制活性比阿卡波糖好,可以作為有效的α-淀粉酶抑制活性成分。基于分子對接技術(shù)對核桃楸葉中潛在的α-葡萄糖苷酶抑制活性成分的抑制活性機理進行研究,山奈酚等6種成分均能和α-葡萄糖苷酶進行結(jié)合,根據(jù)對接位點信息可以預(yù)測該類化合物降血糖活性的作用機制。
【學(xué)位授予單位】：長春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R284;R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2660429