【摘要】：目的:本文旨在進(jìn)行對(duì)葉百部遺傳多樣性AFLP分析及對(duì)葉百部總生物堿(TAST,Total alkaloids of Stemona Tuberosa Lour)止咳作用機(jī)制研究。方法:1.利用熒光AFLP標(biāo)記技術(shù),8對(duì)EcoR I/Mse I引物組合對(duì)38份供試材料的基因DNA擴(kuò)增,進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè),用NTSYSpc-2.11F軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。以DICE相似系數(shù)為基礎(chǔ)而得出UPGMA個(gè)體間聚類圖和相似系數(shù)。2.對(duì)葉百部總生物堿(TAST)止咳作用機(jī)制研究:(1)采用氨水噴霧復(fù)制小鼠咳嗽模型,記錄咳嗽次數(shù)和咳嗽潛伏期后;在造模和不造模條件下,酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)氨水引咳小鼠腦組織中5-羥色胺(5-HT,5-hydroxytryptamine)、5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA,5-hydroxyindoleacetic acid)、去甲腎上腺素(NE,norepinephrine)和多巴胺(DA,Dopamine)水平;(2)采用辣椒素噴霧復(fù)制豚鼠咳嗽模型,記錄咳嗽次數(shù)和咳嗽潛伏期;酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)豚鼠空腹血清和肺組織中P物質(zhì)(SP)水平;采用伊紅-蘇木素(HE,Hematoxylin-EosinH)染色觀察氣管和肺組織的病理變化。結(jié)果:1.共獲得條帶數(shù)1477條,多態(tài)性條帶數(shù)1477條,多態(tài)性達(dá)到了100%。UPGMA個(gè)體間聚類結(jié)果表明,對(duì)葉百部種群間的遺傳距離與地理距離有相關(guān)性。2.與模型組比較,TAST組小鼠咳嗽潛伏期延長(zhǎng),咳嗽次數(shù)顯著減少(P0.01);TAST中、高劑量組均能顯著增加小鼠腦中5-HT水平和5-HIAA水平(P0.01);TAST低、中、高劑量組中NE和DA水平與模型組均無顯著性差異(P0.05)。3.與正常組比較,模型組豚鼠血清和肺組織SP水平顯著增加(P0.01),氣管和肺組織均出現(xiàn)不同程度損傷,氣管黏膜增厚和腫脹,肺泡萎陷;與模型組比較,TAST組豚鼠咳嗽潛伏期延長(zhǎng),咳嗽次數(shù)顯著減少(P0.01),血清和肺組織SP水平顯著降低(P0.01),氣管和肺組織病理損傷明顯減輕。結(jié)論:對(duì)葉百部不同居群間的遺傳多樣性豐富,為對(duì)葉百部種質(zhì)資源的合理利用和品種選育提供了分子水平的理論依據(jù);TAST具有明顯的止咳活性,其中樞性止咳機(jī)制可能是通過增加小鼠腦中5-HT、5-HIAA含量起到止咳活性,但與阿片受體機(jī)制能關(guān)系不大;外周性止咳機(jī)制與其可減輕辣椒素抑制神經(jīng)肽SP表達(dá)有關(guān),也與ATP-K~+抑制劑對(duì)其止咳活性有關(guān)。
【圖文】：

-1供試材料分布圖

圖 2-1-2 引物組合 E-AAC/M-CAG 的樣品 AFLP 圖譜注:縱坐標(biāo):右側(cè) marker DNA 片段從下往上依次為 70、80、90、100、120、140、160、180、0、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、425、450、475、490、500 bp;
【學(xué)位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2658133