【摘要】：目的:構(gòu)建基于抗流感病毒神經(jīng)氨酸酶試劑盒的對清熱解毒類中臨床常用藥—板藍(lán)根、草珊瑚、連花清瘟膠囊的生物活性評價方法的探索研究與應(yīng)用方法:1.對流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制效價檢測試劑盒穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、一致性考察;2.基于抗NA活性的草珊瑚質(zhì)量評價技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化及應(yīng)用研究;3.基于抗NA活性的中藥復(fù)方連花清瘟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化研究;4.基于抗NA的板藍(lán)根活性的質(zhì)量評價技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化及應(yīng)用研究。結(jié)果:1.對流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制效價檢測試劑盒穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、一致性考察;同一樣品的日內(nèi)精密度平均抑制率85.34%,RSD1.3%,日間精密度平均抑制率85.39%,RSD2.5%,重復(fù)性平均抑制率85.42%,RSD3.15%;同一試劑盒六次凍融平均空白OD值11239.96,RSD5.8%,同一試劑盒六次凍融平均參比OD值1498.48,RSD12.75%,同一試劑盒六次凍融平均抑制率86.61%,RSD1.70%。建議試劑盒在凍融六次內(nèi)使用。進(jìn)行了6個實驗室的重現(xiàn)性實驗,試驗間結(jié)果沒有顯著性差異。通過研究發(fā)現(xiàn)該方法精密度、重復(fù)性良好,可用于評價藥物的抑制流感病毒活性。在此基礎(chǔ)上建立了流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制效價檢測試劑盒標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。2.草珊瑚的抗NA活性質(zhì)量評價技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化及應(yīng)用:草珊瑚具有抗菌消炎、清熱解毒、通經(jīng)接骨等功效,具有抗菌消炎、抑制流感病毒、促進(jìn)骨折愈合及抗腫瘤等生物活性,本研究收集了10批草珊瑚進(jìn)行了化學(xué)成分含量測定和特征性圖譜的建立,在此基礎(chǔ)上應(yīng)用流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制效價檢測試劑盒進(jìn)行了檢測,測定了10批次草珊瑚樣品的生物效價,初步探索了草珊瑚(腫節(jié)風(fēng))的質(zhì)量控制的生物評價方法。3.連花清瘟膠囊的抗NA活性質(zhì)量評價技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化及應(yīng)用:收集了18批連花清瘟膠囊進(jìn)行了化學(xué)成分含量測定和特征性圖譜的建立,測定了各個批次的生物效價,建立了連花清瘟膠囊的質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)化方法。4.板藍(lán)根抗NA活性質(zhì)量評價技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化及應(yīng)用:板藍(lán)根為常用的清熱解毒藥,具有抑制流感病毒活性,測定33批基原清楚的板藍(lán)根藥材進(jìn)行了化學(xué)評價和生物效價的測定,建立了板藍(lán)根的質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)化體系,板藍(lán)根的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)一直都是其研究的薄弱環(huán)節(jié),在此基礎(chǔ)上,以現(xiàn)行2015版中國藥典質(zhì)控性指標(biāo)(R,S)-告依春為主要物質(zhì)基礎(chǔ),研究其和抑制神經(jīng)氨酸酶活性間的量效關(guān)系及相關(guān)性,為闡明板藍(lán)根藥效物質(zhì)基礎(chǔ)奠定了化學(xué)基礎(chǔ)并開拓了新的發(fā)展方向。結(jié)論:本課題在前期研究的基礎(chǔ)上對基于流感病毒神經(jīng)氨酸酶抗病毒活性檢測的生物評價試劑盒進(jìn)行了優(yōu)化,應(yīng)用其建立了板藍(lán)根、草珊瑚、連花清瘟膠囊的質(zhì)量評價技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化體系,為清熱解毒了中藥建立以生物評價為核心的質(zhì)量評價技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化體系打下基礎(chǔ)。
【圖文】：

圖 1 原理示意圖Figure 0-1 Theprinciple diagram一種借助空氣飛沫傳播，傳染性，，寄生性強(qiáng)的病毒，首先侵入人體的呼吸系統(tǒng)。主要原理反應(yīng)，使得病毒不能復(fù)制，最終病毒死亡圖.2.流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制效價檢測試劑盒Figure.2Assay kitfor detection of anti-NAactivity神經(jīng)氨酸酶抑制效價檢測試劑盒是由原解放軍第三零二全軍中醫(yī)藥研究所原

圖.2.流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制效價檢測試劑盒Figure.2Assay kitfor detection of anti-NAactivity毒神經(jīng)氨酸酶抑制效價檢測試劑盒是由原解放軍第三零二全軍中醫(yī)藥研究所原創(chuàng)，有緩沖液、酶、熒光底物組成，儲藏、運輸條件適宜，并且適用性、可及性、操作圖.3.檢測程序示意圖Figure.3 Schematic diagram of detection program操作步驟簡單，所需實驗材料較少，檢測時間短，比較適用一般科研機(jī)構(gòu)、實驗機(jī)構(gòu)及
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R284.1

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本文編號：2657860