【摘要】：葫蘆茶苷是從植物葫蘆茶(Tadehagi triquetrum Linn.)分離、提純出來的,全稱為3,5-二羥基苯基-6-O-反式-對羥基肉桂�；�-β-D-葡萄吡喃糖苷。它是一種苯丙素苷的化合物。近年來研究發(fā)現(xiàn)葫蘆茶苷具有降血糖及抗肝炎等生物活性,但對其在動物和人的體內(nèi)研究,尤其藥代動力學的研究,仍為空白。本課題首先從植物葫蘆茶提取、分離、純化、鑒定出葫蘆茶苷,然后將其用于藥代動力學的研究。建立專屬、靈敏的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)用于測定大鼠血漿的葫蘆茶苷原形及其主要代謝物,考察組織中葫蘆茶苷的分布情況,以獲得葫蘆茶苷在SD大鼠的體內(nèi)藥動學行為,為中草藥葫蘆茶的進一步開發(fā)提供科學依據(jù)。實驗建立了適用于檢測SD大鼠血漿中的葫蘆茶苷的LC-MS/MS法。質(zhì)譜采用電噴霧離子源(ESI源),負離子化模式,掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(MRM);用于定量的離子對m/z433.3→m/z125.2(葫蘆茶苷)和m/z301.1→m/z151.0(內(nèi)標,槲皮素)。液相條件:色譜柱為 SynergiTM Fusion-RP 80A C18(4 μm,2.10 mm i.d × 50 mm,美國Phenomenex公司);柱溫為40℃;流動相為水(含0.1%甲酸)-甲醇(含0.1%甲酸);梯度洗脫;流速0.5 mL/min。經(jīng)方法學驗證,血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾葫蘆茶苷及內(nèi)標槲皮素的測定;葫蘆茶苷在血漿中濃度范圍1～2000 ng/mL內(nèi),線性良好(r0.99);定量下限為1 ng/mL。準確度、精密度、基質(zhì)效應(yīng)、提取回收率、穩(wěn)定性等良好,滿足生物樣品定量分析的要求。對SD大鼠灌胃給藥和靜脈給藥后血漿中葫蘆茶苷進行檢測,應(yīng)用DAS3.2.8軟件處理,藥動學結(jié)果顯示:單次灌胃給葫蘆茶苷25mg/kg 后,血漿中葫蘆茶苷 t1/2z為(2.51±2.21)h,Tmax 為(0.25±0.08)h,Cmax 為(6.01±2.15)ng/mL;單次靜脈給藥5 mg/kg后,血漿中葫蘆茶苷的t1/2z為(1.27±1.19)h,Tmax 為 0.08h,Cmax 為(109.77±4.29)ng/mL。然后建立測定組織中葫蘆茶苷濃度的LC-MS/MS法:腦、心、肝、脾、肺、腎、胃、小腸、骨骼肌、體脂和睪丸的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測定;線性范圍濃度為5～2000ng/mL(r0.99);定量下限均為5 ng/mL;肝與腎組織的精密度、準確度、基質(zhì)效應(yīng)、提取回收率、穩(wěn)定性均符合生物樣品定量分析要求。靜脈給藥(5 mg/kg)后組織測定數(shù)據(jù)表明,葫蘆茶苷主要分布在腎、心、脾、肺、肝、小腸和骨骼肌,給藥2 h后點各組織未檢出葫蘆茶苷。最后建立用于測定血漿中葫蘆茶苷代謝物對羥基桂皮酸的LC-MS/MS法:對羥基桂皮在血漿中濃度范圍10～2000 ng/mL內(nèi),線性良好(r0.99);定量下限10 ng/mL;精密度、準確度、提取回收率、穩(wěn)定性等均符合生物樣本定量分析要求。應(yīng)用DAS3.2.8對血漿中對羥基桂皮酸濃度進行處理,得到其藥代學結(jié)果:單次靜脈給藥5 mg/kg的t1/2z為(0.86±0.58)h,Tmax 為 0.08 h,Cmax 為(1536.45±193.93)ng/mL;單次灌胃給葫蘆茶苷20、25 mg/kg后,血漿中對羥基桂皮酸的t1/2z為1.24～1.67 h,Tmax為1.15～1.25h,平均 Cmax 分別為 452.98、837.75 μg/mL,平均 AUC0-t 分別為 1138.75、2027.58 h·ng/mL,Cmax和AUC0-t均隨著劑量增加而增大。實驗結(jié)果:(1)從葫蘆茶提取物中得到純度大于95%的葫蘆茶苷,可用于藥代試驗;(2)用于測定SD大鼠血漿中葫蘆茶苷的LC-MS/MS方法準確可靠,穩(wěn)定性良好,可重復(fù);SD大鼠灌胃給予葫蘆茶苷,血漿中只檢測到少量的原形,葫蘆茶苷血漿末端消除半衰期為(2.51±2.21)h;而靜脈給藥其半衰期為(1.27±1.27)h。(3)采用本法測定SD大鼠組織中葫蘆茶苷,該法靈敏、準確可靠。葫蘆茶苷主要分布在肺、腎、心、肝、脾、骨骼肌和小腸,腦幾乎未檢測到。給藥后30min不同組織的分布濃度從高到低排列為腎、脾、肺、心、骨骼肌、肝、小腸;給藥2 h后,各個組織均未檢測到葫蘆茶苷,說明該供試品在SD大鼠體內(nèi)無蓄積。(4)應(yīng)用LC-MS/MS法測定SD大鼠血漿中葫蘆茶苷的代謝產(chǎn)物對羥基桂皮酸,方法可行,穩(wěn)定性良好。灌胃(20、25 mg/kg)和尾靜脈(5 mg/kg)給予葫蘆茶苷后,對羥基桂皮酸在血漿的t1/2分別為(1.24～1.67)h和(0.86±0.58)h。單次灌胃給葫蘆茶苷20～25mg/kg劑量范圍,血漿中對羥基桂皮酸的Cmax和AUC0-t均隨著劑量增加而增大。本課題建立LC-MS/MS檢測方法及其葫蘆茶苷的藥代動力學結(jié)果,為葫蘆茶及其苷的體內(nèi)體外代謝等評價提供依據(jù),為其進一步開發(fā)及臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ)。
【圖文】：

（Ｃ－２＂，６〃），１１６．９邋（Ｃ－３＂，５＂），１６０．２邋（Ｃ－４＂），１４７．０邋（Ｃ－７”），１１５．８邋（Ｃ－８〃），１６９．４邋（Ｃ－９〃）。以上數(shù)據(jù)逡逑分進一步說明化合物中含有三個結(jié)構(gòu)片段：一個葡萄糖基片段，一個間苯三酚片段和順逡逑式－對羥基肉桂酰基。通過與文獻［３６１比較，最終確定葫蘆茶苷的結(jié)構(gòu)，如圖２－１所示。逡逑Ｔ邋ＦＴＭＳ邋＋邋ｐ邋ＥＳＩ邋Ｆｕｌｌ邋ｍｓ邋［２００．００－２０００．００Ｊ逡逑，００＾，邋４５７，１０４逡逑Ｊ逡逑Ｊ逡逑ｅＪ逡逑三邐４３７．１９３５逡逑８0ｉ逡逑７５－Ｉ逡逑７0ｉ逡逑６５—逡逑６０－邐Ｉ逡逑５５｜邐ｊ逡逑５0：逡逑４５ｉ邐３８１．２９７５邋；逡逑４0邋三邐３５３．２６６２逡逑３５—逡逑３0］逡逑２５１邐８９２．２３７６逡逑２０三逡逑ｓｊ邐６１９．５２７３逡逑１邐４７３．０８４９逡逑Ｅ邐３０１．１４０９邐丨邋｜邋｜邐５９１邋４９｜６０邐６７１０５３邋７５８．２２２２邐９０８．２０８１逡逑ｔＬ邋．邐．邋－，１；０６�。罚梗玻村�，邋＾２］６．０５６２逡逑２００邐３００邐４００邐５００邐６００邐７００邐８００邐９００邐１０００邐１１Ｏ０邐１２００逡逑ｍ／ｚ逡逑圖２－２葫蘆茶苷的ＨＲ－ＥＳＩ－ＭＳ譜逡逑Ｆｉｇ．邋２－２邋ＨＲ－ＥＳＩ－ＭＳ邋Ｓｐｅｃｔｒｕｍ邋ｏｆ邋ｔａｄｅｈａｇｉｎｏｓｉｄｅ逡逑－８邋－逡逑

圖２－４葫蘆茶SD的１３Ｃ邋ＡＰＴ譜逡逑Ｆｉｇ．邋２－４邋１３Ｃ邋ＡＰＴ邋Ｓｐｅｃｔｒｕｍ邋ｏｆ邋ｔａｄｅｈａｇｉｎｏｓｉｄｅ逡逑２．４本章小結(jié)逡逑本章對植物葫蘆茶進行提取、分離及純化，得到適用于藥代動力學試驗的葫蘆茶作逡逑Ｉ２０ｍｇ，，并應(yīng)用丨ＩＲ－ＥＳ丨－ＭＳ、ｌＨ－ＮＭＲ、ｌ３Ｃ－ＡＰＴ等波普技術(shù)對其結(jié)構(gòu)進行鑒定。逡逑－９－逡逑
【學位授予單位】：哈爾濱商業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2657820