【摘要】：葫蘆茶苷是從植物葫蘆茶(Tadehagi triquetrum Linn.)分離、提純出來(lái)的,全稱為3,5-二羥基苯基-6-O-反式-對(duì)羥基肉桂�；�-β-D-葡萄吡喃糖苷。它是一種苯丙素苷的化合物。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)葫蘆茶苷具有降血糖及抗肝炎等生物活性,但對(duì)其在動(dòng)物和人的體內(nèi)研究,尤其藥代動(dòng)力學(xué)的研究,仍為空白。本課題首先從植物葫蘆茶提取、分離、純化、鑒定出葫蘆茶苷,然后將其用于藥代動(dòng)力學(xué)的研究。建立專屬、靈敏的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)用于測(cè)定大鼠血漿的葫蘆茶苷原形及其主要代謝物,考察組織中葫蘆茶苷的分布情況,以獲得葫蘆茶苷在SD大鼠的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)行為,為中草藥葫蘆茶的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)建立了適用于檢測(cè)SD大鼠血漿中的葫蘆茶苷的LC-MS/MS法。質(zhì)譜采用電噴霧離子源(ESI源),負(fù)離子化模式,掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM);用于定量的離子對(duì)m/z433.3→m/z125.2(葫蘆茶苷)和m/z301.1→m/z151.0(內(nèi)標(biāo),槲皮素)。液相條件:色譜柱為 SynergiTM Fusion-RP 80A C18(4 μm,2.10 mm i.d × 50 mm,美國(guó)Phenomenex公司);柱溫為40℃;流動(dòng)相為水(含0.1%甲酸)-甲醇(含0.1%甲酸);梯度洗脫;流速0.5 mL/min。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證,血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾葫蘆茶苷及內(nèi)標(biāo)槲皮素的測(cè)定;葫蘆茶苷在血漿中濃度范圍1～2000 ng/mL內(nèi),線性良好(r0.99);定量下限為1 ng/mL。準(zhǔn)確度、精密度、基質(zhì)效應(yīng)、提取回收率、穩(wěn)定性等良好,滿足生物樣品定量分析的要求。對(duì)SD大鼠灌胃給藥和靜脈給藥后血漿中葫蘆茶苷進(jìn)行檢測(cè),應(yīng)用DAS3.2.8軟件處理,藥動(dòng)學(xué)結(jié)果顯示:單次灌胃給葫蘆茶苷25mg/kg 后,血漿中葫蘆茶苷 t1/2z為(2.51±2.21)h,Tmax 為(0.25±0.08)h,Cmax 為(6.01±2.15)ng/mL;單次靜脈給藥5 mg/kg后,血漿中葫蘆茶苷的t1/2z為(1.27±1.19)h,Tmax 為 0.08h,Cmax 為(109.77±4.29)ng/mL。然后建立測(cè)定組織中葫蘆茶苷濃度的LC-MS/MS法:腦、心、肝、脾、肺、腎、胃、小腸、骨骼肌、體脂和睪丸的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測(cè)定;線性范圍濃度為5～2000ng/mL(r0.99);定量下限均為5 ng/mL;肝與腎組織的精密度、準(zhǔn)確度、基質(zhì)效應(yīng)、提取回收率、穩(wěn)定性均符合生物樣品定量分析要求。靜脈給藥(5 mg/kg)后組織測(cè)定數(shù)據(jù)表明,葫蘆茶苷主要分布在腎、心、脾、肺、肝、小腸和骨骼肌,給藥2 h后點(diǎn)各組織未檢出葫蘆茶苷。最后建立用于測(cè)定血漿中葫蘆茶苷代謝物對(duì)羥基桂皮酸的LC-MS/MS法:對(duì)羥基桂皮在血漿中濃度范圍10～2000 ng/mL內(nèi),線性良好(r0.99);定量下限10 ng/mL;精密度、準(zhǔn)確度、提取回收率、穩(wěn)定性等均符合生物樣本定量分析要求。應(yīng)用DAS3.2.8對(duì)血漿中對(duì)羥基桂皮酸濃度進(jìn)行處理,得到其藥代學(xué)結(jié)果:單次靜脈給藥5 mg/kg的t1/2z為(0.86±0.58)h,Tmax 為 0.08 h,Cmax 為(1536.45±193.93)ng/mL;單次灌胃給葫蘆茶苷20、25 mg/kg后,血漿中對(duì)羥基桂皮酸的t1/2z為1.24～1.67 h,Tmax為1.15～1.25h,平均 Cmax 分別為 452.98、837.75 μg/mL,平均 AUC0-t 分別為 1138.75、2027.58 h·ng/mL,Cmax和AUC0-t均隨著劑量增加而增大。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:(1)從葫蘆茶提取物中得到純度大于95%的葫蘆茶苷,可用于藥代試驗(yàn);(2)用于測(cè)定SD大鼠血漿中葫蘆茶苷的LC-MS/MS方法準(zhǔn)確可靠,穩(wěn)定性良好,可重復(fù);SD大鼠灌胃給予葫蘆茶苷,血漿中只檢測(cè)到少量的原形,葫蘆茶苷血漿末端消除半衰期為(2.51±2.21)h;而靜脈給藥其半衰期為(1.27±1.27)h。(3)采用本法測(cè)定SD大鼠組織中葫蘆茶苷,該法靈敏、準(zhǔn)確可靠。葫蘆茶苷主要分布在肺、腎、心、肝、脾、骨骼肌和小腸,腦幾乎未檢測(cè)到。給藥后30min不同組織的分布濃度從高到低排列為腎、脾、肺、心、骨骼肌、肝、小腸;給藥2 h后,各個(gè)組織均未檢測(cè)到葫蘆茶苷,說(shuō)明該供試品在SD大鼠體內(nèi)無(wú)蓄積。(4)應(yīng)用LC-MS/MS法測(cè)定SD大鼠血漿中葫蘆茶苷的代謝產(chǎn)物對(duì)羥基桂皮酸,方法可行,穩(wěn)定性良好。灌胃(20、25 mg/kg)和尾靜脈(5 mg/kg)給予葫蘆茶苷后,對(duì)羥基桂皮酸在血漿的t1/2分別為(1.24～1.67)h和(0.86±0.58)h。單次灌胃給葫蘆茶苷20～25mg/kg劑量范圍,血漿中對(duì)羥基桂皮酸的Cmax和AUC0-t均隨著劑量增加而增大。本課題建立LC-MS/MS檢測(cè)方法及其葫蘆茶苷的藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果,為葫蘆茶及其苷的體內(nèi)體外代謝等評(píng)價(jià)提供依據(jù),為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)及臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ)。
【圖文】：

（Ｃ－２＂，６〃），１１６．９邋（Ｃ－３＂，５＂），１６０．２邋（Ｃ－４＂），１４７．０邋（Ｃ－７”），１１５．８邋（Ｃ－８〃），１６９．４邋（Ｃ－９〃）。以上數(shù)據(jù)逡逑分進(jìn)一步說(shuō)明化合物中含有三個(gè)結(jié)構(gòu)片段：一個(gè)葡萄糖基片段，一個(gè)間苯三酚片段和順逡逑式－對(duì)羥基肉桂�；Ｍㄟ^(guò)與文獻(xiàn)［３６１比較，最終確定葫蘆茶苷的結(jié)構(gòu)，如圖２－１所示。逡逑Ｔ邋ＦＴＭＳ邋＋邋ｐ邋ＥＳＩ邋Ｆｕｌｌ邋ｍｓ邋［２００．００－２０００．００Ｊ逡逑，００＾，邋４５７，１０４逡逑Ｊ逡逑Ｊ逡逑ｅＪ逡逑三邐４３７．１９３５逡逑８0ｉ逡逑７５－Ｉ逡逑７0ｉ逡逑６５—逡逑６０－邐Ｉ逡逑５５｜邐ｊ逡逑５0：逡逑４５ｉ邐３８１．２９７５邋；逡逑４0邋三邐３５３．２６６２逡逑３５—逡逑３0］逡逑２５１邐８９２．２３７６逡逑２０三逡逑ｓｊ邐６１９．５２７３逡逑１邐４７３．０８４９逡逑Ｅ邐３０１．１４０９邐丨邋｜邋｜邐５９１邋４９｜６０邐６７１０５３邋７５８．２２２２邐９０８．２０８１逡逑ｔＬ邋．邐．邋－，１；０６�。罚梗玻村�，邋＾２］６．０５６２逡逑２００邐３００邐４００邐５００邐６００邐７００邐８００邐９００邐１０００邐１１Ｏ０邐１２００逡逑ｍ／ｚ逡逑圖２－２葫蘆茶苷的ＨＲ－ＥＳＩ－ＭＳ譜逡逑Ｆｉｇ．邋２－２邋ＨＲ－ＥＳＩ－ＭＳ邋Ｓｐｅｃｔｒｕｍ邋ｏｆ邋ｔａｄｅｈａｇｉｎｏｓｉｄｅ逡逑－８邋－逡逑

圖２－４葫蘆茶SD的１３Ｃ邋ＡＰＴ譜逡逑Ｆｉｇ．邋２－４邋１３Ｃ邋ＡＰＴ邋Ｓｐｅｃｔｒｕｍ邋ｏｆ邋ｔａｄｅｈａｇｉｎｏｓｉｄｅ逡逑２．４本章小結(jié)逡逑本章對(duì)植物葫蘆茶進(jìn)行提取、分離及純化，得到適用于藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)的葫蘆茶作逡逑Ｉ２０ｍｇ，，并應(yīng)用丨ＩＲ－ＥＳ丨－ＭＳ、ｌＨ－ＮＭＲ、ｌ３Ｃ－ＡＰＴ等波普技術(shù)對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。逡逑－９－逡逑
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱商業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 柳春娣;張衛(wèi);施曉卉;劉曉燕;韓怡;呂玲燕;蔣志濤;;UPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定感冒寧顆粒5種成分含量[J];國(guó)際中醫(yī)中藥雜志;2019年01期

2 吳曉毅;張可一;張睿;賈怡;余慧芳;;UPLC-MS/MS同時(shí)測(cè)定雷公藤懸浮細(xì)胞中8種萜類成分[J];國(guó)際中醫(yī)中藥雜志;2018年12期

3 陳大偉;冉興無(wú);;糖尿病新藥熱點(diǎn)[J];中華糖尿病雜志;2018年02期

4 金燕;林娜;任少琳;;葫蘆茶化學(xué)成分的研究[J];中國(guó)藥物化學(xué)雜志;2015年04期

5 張小坡;李海龍;譚銀豐;賴偉勇;陳峰;;液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定大鼠血漿中葫蘆茶苷及其代謝物[J];海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2015年02期

6 吳偉;朱章志;李紅;耿華;;葛根素治療早期2型糖尿病腎病的Meta分析[J];中成藥;2013年07期

7 周旭東;呂曉超;史麗穎;于大永;王永奇;;葫蘆茶地上部分化學(xué)成分的研究[J];廣西植物;2013年04期

8 田小華;;葫蘆茶治療嬰兒膿皰瘡50例觀察[J];中國(guó)社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學(xué)專業(yè));2013年01期

9 袁曉丹;樓青青;張丹毓;姚平;申翹璇;;糖尿病個(gè)案管理模式的研究進(jìn)展[J];中華護(hù)理雜志;2013年01期

10 李海英;唐愛(ài)存;梁麗英;盧秋玉;張志偉;;葫蘆茶不同提取物對(duì)鏈脲佐菌素致糖尿病小鼠的影響[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2012年20期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 何秀玲;TCDCA抗炎免疫藥理學(xué)及藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

2 楊波;1，5-二咖啡�？鼘幩岬捏w內(nèi)外代謝及藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];沈陽(yáng)藥科大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 魏立平;石菖蒲揮發(fā)油中β-細(xì)辛醚的藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

本文編號(hào)：2657820