【摘要】：研究背景及目的:糖尿病腎病是糖尿病微血管病變的嚴(yán)重并發(fā)癥之一,糖尿病腎病疾病進(jìn)展程度可由尿白蛋白量間接反映。尿中白蛋白增多可加速腎小球硬化、腎小管間質(zhì)纖維化和腎功能減退。此外在糖尿病患者中白蛋白尿與腎臟事件、心血管事件和全因死亡率密切相關(guān),尿中白蛋白水平升高是腎臟事件的強(qiáng)烈預(yù)測因子。近幾年研究發(fā)現(xiàn)在糖尿病腎病的早期階段,尿中白蛋白增多由腎小管重吸收功能受損所致,然而其潛在的機(jī)制尚未完全闡明。目前研究表明,2型糖尿病以胰島素信號受損導(dǎo)致胰島素抵抗為特點(diǎn),而慢性亞急性炎癥是導(dǎo)致胰島素抵抗的重要參與因素之一。臨床研究提示尿中白蛋白與胰島素抵抗密切相關(guān),但其中機(jī)制尚未闡述明確。在該研究中,我們猜想腎臟局部炎癥反應(yīng)損傷胰島素信號通路是促進(jìn)尿中白蛋白增多的原因之一。我們進(jìn)一步探究減輕炎癥反應(yīng)并改善胰島素信號受損,能否改善糖尿病腎病腎小管對白蛋白的攝取,從而為減輕白蛋白尿提供新的治療思路。研究方法:1)構(gòu)建糖尿病腎病動物模型,利用倍半萜內(nèi)酯(Parthenolide,PTN)建立藥物干預(yù)組。篩選8周齡的db/db(C57BLKS/J-LepRdb/LepRdb)小鼠和db/m(C57BLKS/J-LepRdb/+)小鼠作為研究對象,將實(shí)驗(yàn)小鼠分為三組:db/m組(db/m小鼠組/正常對照組)、db/db組(db/db小鼠組/糖尿病腎病組)、db/db+PTN 組(db/db 小鼠+PTN 組/PTN 干預(yù)組)。在 db/db+PTN 組,給予 db/db小鼠隔日1次腹腔注射1mg/kg核轉(zhuǎn)錄因子κB抑制劑PTN,并給予db/m組及db/db組小鼠等劑量的藥物溶解液作對照處理。藥物處理8周后留取各組16周齡小鼠的血、尿及腎組織標(biāo)本,檢測腎臟核轉(zhuǎn)錄因子κB p65水平、胰島素信號通路蛋白p-AKT/AKT表達(dá)水平、白蛋白受體amnionless-cubilin表達(dá)水平。2)體外培養(yǎng)HKC細(xì)胞,用100nM胰島素刺激HKC細(xì)胞,檢測HKC細(xì)胞amnionless-cubilin表達(dá)水平和細(xì)胞攝取白蛋白能力改變。體外模擬2型糖尿病腎病病理狀態(tài),用25ng/ml腫瘤壞死因子α刺激HKC細(xì)胞,檢測核轉(zhuǎn)錄因子κB p65水平、p-IRS-1/IRS-1及p-AKT/AKT表達(dá)、amnionless-cubilin表達(dá)和細(xì)胞對白蛋白攝取變化;并予5μmol/L PTN進(jìn)行干預(yù)后,檢測相應(yīng)觀察指標(biāo)的變化。研究結(jié)果:1)16周齡db/db小鼠較db/m小鼠全身胰島素抵抗指數(shù)(Homeostatic model assessment for insulin resistance,HOMA-IR)水平升高(P0.05),尿白蛋白肌酐比值(Urine albumin-to-creatinine ratio,UACR)水平升高(P0.05)。與db/db小鼠比較,PTN干預(yù)后db/db小鼠HOMA-IR水平降和UACR水平略有降低趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2)小鼠腎臟組織經(jīng)PAS染色后,與db/m小鼠相比較,db/db小鼠可見腎小球肥大、系膜基質(zhì)增多及系膜區(qū)擴(kuò)張。經(jīng)PTN干預(yù)后,db/db+PTN組小鼠上述病理變化較db/db小鼠減輕。3)與db/m小鼠比較,db/db小鼠腎臟組織核轉(zhuǎn)錄因子κBp65表達(dá)水平增加,Akt(Ser473)磷酸化水平降低(P0.05)。PTN能夠顯著降低小鼠腎臟轉(zhuǎn)錄因子bκBp65的表達(dá)水平,改善AKT(Ser473)磷酸化的下降水平(P0.05)。與db/m小鼠比較,db/db小鼠腎臟白蛋白受體amnionless和cubilin的表達(dá)水平降低,而·PTN能夠部分逆轉(zhuǎn)這一變化,能夠顯著改善cubilin的降低(P0.05)。4)胰島素可促進(jìn)HKC細(xì)胞的amnionless和cubilin表達(dá)水平升高(P0.05),從而促進(jìn)白蛋白的攝取增加(P0.05)。經(jīng)腫瘤壞死因子α刺激后,HKC細(xì)胞的腫瘤壞死因子κBp65表達(dá)水平顯著增高,并且IRS-1(Ser307)磷酸化水平表達(dá)增高,而AKT(Ser473)磷酸化水平降低(P0.05)。PTN能夠顯著降低HKC細(xì)胞腫瘤壞死因子κB p65的表達(dá)水平,逆轉(zhuǎn)IRS-1(Ser307)及AKT(Ser473)的磷酸化水平(P0.05)。腫瘤壞死因子α能夠減少HKC細(xì)胞amnionless和cubilin的表達(dá)水平(P0.05),而PTN能夠部分逆轉(zhuǎn)這一變化,能夠顯著改善cubilin的降低(P0.05)。研究結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)腎臟局部炎癥損傷胰島素信號通路可以引起amnionless和cubilin表達(dá)減低,進(jìn)而引起腎小管白蛋白攝取減少。PTN能夠通過減輕炎癥反應(yīng),重塑受損的胰島素信號通路,改善腎小管上皮細(xì)胞白蛋白受體的表達(dá),進(jìn)而增加腎小管白蛋白的攝取。
【圖文】：

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院博士研究生論文驗(yàn)結(jié)果逡逑驗(yàn)動物基本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)逡逑表１－８各組小鼠１６周基本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)逡逑ｄｂ／ｍ（ｎ＝５）邐ｄｂ／ｄｂ（ｎ＝８）邐ｄｂ／ｄｂ＋ＰＴＮ（ｎ＝ｏｌ／Ｌ）邐１0．0１±１．７３邐４１．１９±７．３１＊邐４１．００±１４．７８逡逑素（ｍｌＵ／Ｌ）邐１４．９３±４．００邐２１．０２±９．９５邐２１．３０±７．３０逡逑Ｒ邐６．６０±１．７０邐３６．８３±１４．０９＊邐３１．０７±２８．０５逡逑（ｍｍｏｌ／Ｌ）邐２．３６±０．２６邐３＿２１±０．２８＊邐３．１Ｕ０．４１逡逑（ｍｍｏｌ／Ｌ）邐０．８２士０＿５０邐１．４５±０．６８邐１．１６±０．３８逡逑（，，0ｌ／Ｌ）邐９．５６±０．９８邐７．２０±２．８２邐７．５６±２．４２逡逑ｇＺｍｍｏｌ）邐１９．６±１４．６邐１９１．３±８．３＊邐１４３．５±９７．５與ｄｂ／ｍ組相比較有統(tǒng)計學(xué)差異（Ｐ＜０．０５）逡逑＊逡逑

圖１－２各組小鼠血清膽固醇、甘油三酯數(shù)據(jù)逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2657669