【摘要】：人類免疫缺陷病毒是艾滋病的元兇,病毒編碼蛋白Tat在HIV-1的潛伏與激活中發(fā)揮著類似于“開關(guān)”的功能。以Tat調(diào)控功能為核心的研究對于HIV-1基因轉(zhuǎn)錄延伸機制的揭示以及開發(fā)艾滋病治療的靶點新藥物具有重要意義。雷公藤甲素(triptolide,TPL)作為一個著名的中草藥成分,已經(jīng)被用來治療包括自身免疫病、癌癥等在內(nèi)的多種疾病,近來人們發(fā)現(xiàn)其在HIV-1方面的作用,本研究致力于揭示其引起Tat降解的機制,該機制研究將極大推進TPL在艾滋病方面的治療。研究基于HIV-1轉(zhuǎn)錄細胞模型,對多個雷公藤來源活性成分進行篩選,發(fā)現(xiàn)TPL以時間、濃度依賴性抑制HIV-1的轉(zhuǎn)錄,并且TPL可以特異性引起HIV-1編碼蛋白Tat的降解繼而抑制HIV-1的轉(zhuǎn)錄。研究顯示TPL不是通過阻斷CycT1對于Tat的保護作用,也不是在轉(zhuǎn)錄、翻譯水平影響Tat的含量,而是通過泛素蛋白酶體降解途徑促進了 Tat的降解。為了尋找在該過程中起作用的E3泛素連接酶,運用親和純化、質(zhì)譜、SILAC(穩(wěn)定同位素標記氨基酸細胞培養(yǎng))蛋白組學定量技術(shù)對Tat相互作用蛋白進行定量分析,共鑒定出1234種蛋白,其中包括12個E3泛素連接酶。需要指出的是,CUL4B不是在TPL處理時而是天然條件下引起Tat降解的E3泛素連接酶,而且TPL不是通過單一位點的泛素化引起Tat的降解。
【圖文】：

圖１．１邋Ｐ－ＴＥＦｂ在Ｔａｔ激活的ＨＩＶ－ｌ的轉(zhuǎn)錄中起重要作用州逡逑關(guān)于Ｐ－ＴＥＦｂ在幫助ＲＮＡ邋ＰｏｌＩＩ方面的作用并不能指示其在ＨＩＶ－丨轉(zhuǎn)錄方面的逡逑作用，因為Ｐ－ＴＥＦｂ只是基因轉(zhuǎn)錄過程中所需要的眾多轉(zhuǎn)錄因子的一員。但逡逑有任何真核生物或病毒的基因要比ＨＩＶ－１病毒基因?qū)τ冢校撸裕牛疲獾氖褂萌绱隋义希欤常梗?#176;］，ＨＩＶ－１采用了一種非常精細復(fù)雜的方式來捕捉和招募宿主細胞的逡逑ＥＦｂ來轉(zhuǎn)錄ＨＩＶ－１前病毒ＤＮＡ，因此，對于從ＨＩＶ－１邋ＬＴＲ起始的轉(zhuǎn)錄，Ｐ－ＴＥＦｂ逡逑為一種特殊的輔因子在ＨＩＶ－１的轉(zhuǎn)錄過程中發(fā)揮著重要作用事實上，我們逡逑于Ｐ－ＴＥＦｂ激活Ｐｏｌ邋ＩＩ轉(zhuǎn)錄延伸的機制研究極大程度上得益于對于Ｐ－ＴＥＦｂ在逡逑Ｖ－１轉(zhuǎn)錄方面的調(diào)控。逡逑．２邋Ｐ－ＴＥＦｂ的負性調(diào)控機制逡逑ＣＤＫ激酶的活性都是受到其相應(yīng)調(diào)控蛋白的嚴格調(diào)控的，ＣＤＫ９也不例外。逡逑表明，細胞內(nèi)并不是所有的ＣＤＫ９－ＣｙｃＴｌ復(fù)合物都有激酶和轉(zhuǎn)錄活性，，有兩逡逑

圖１．３邋ＨＩＶ－１編碼的Ｔａｔ通過與ＨＩＶ－１邋ＴＡＲ結(jié)合激活全長轉(zhuǎn)錄本的形成ｌ２９這個過程中，一方面Ｔａｔ可以與ＣｙｃＴｌ結(jié)合招募Ｐ－ＴＥＦｂ到鄰近的病毒ＲＴＡＲ上，另一方面，Ｔａｔ可以特異地與ＴＡＲ結(jié)合，ＣｙｃＴｌ也可以識別Ｔ的頂端環(huán)結(jié)構(gòu)，所以在Ｔａｔ的幫助下，Ｔａｔ、ＴＡＲ和Ｐ－ＴＥＦｂ形成一種穩(wěn)定的物，繼而招募Ｐ－ＴＥＦｂ到鄰近的處于暫停狀態(tài)的Ｐｏｌ邋ＩＩ上，Ｔａｔ招募的Ｐ－ＴＥ磷酸化Ｐｏ丨ＩＩ的最大亞基ＣＴＤ（Ｃ－ｔｅｍ＾ｉｎａ丨ｄｏｍａ丨ｎ）、ＤＳＩＦ和ＮＥＬＦ，導致級聯(lián)反應(yīng)最終激活ＨＩＶ－１的轉(zhuǎn)錄延伸％７３，邋Ｗ。逡逑如之前提到的，存在大量的結(jié)構(gòu)與功能的證據(jù)揭示了邋Ｔａｔ－ＴＡＲ－Ｐ－ＴＥＦｂ７ＳＫｓｎＲＮＰ之間有很多有趣的相似性。首先，Ｔａｔ上的精氨酸富集ＴＡＲ與ＨＥＸＩＭ１上與７ＳＫ結(jié)合基序具有功能可替換性Ｉ５３］。其次，ＴＡＲＲＮＡ上別結(jié)合的區(qū)域與７ＳＫＲＮＡ被ＨＥＸＩＭ１識別結(jié)合的區(qū)域在結(jié)構(gòu)和功能上也近［７５］。最后，蛋白ＣｙｃＴｌ的ｃｙｃｌｉｎ－ｂｏｘ既可以被ＨＥＸＩＭ１又可以被Ｔａｔ結(jié)合［
【學位授予單位】：廈門大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前6條

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本文編號：2657397