【摘要】：人類(lèi)免疫缺陷病毒是艾滋病的元兇,病毒編碼蛋白Tat在HIV-1的潛伏與激活中發(fā)揮著類(lèi)似于“開(kāi)關(guān)”的功能。以Tat調(diào)控功能為核心的研究對(duì)于HIV-1基因轉(zhuǎn)錄延伸機(jī)制的揭示以及開(kāi)發(fā)艾滋病治療的靶點(diǎn)新藥物具有重要意義。雷公藤甲素(triptolide,TPL)作為一個(gè)著名的中草藥成分,已經(jīng)被用來(lái)治療包括自身免疫病、癌癥等在內(nèi)的多種疾病,近來(lái)人們發(fā)現(xiàn)其在HIV-1方面的作用,本研究致力于揭示其引起Tat降解的機(jī)制,該機(jī)制研究將極大推進(jìn)TPL在艾滋病方面的治療。研究基于HIV-1轉(zhuǎn)錄細(xì)胞模型,對(duì)多個(gè)雷公藤來(lái)源活性成分進(jìn)行篩選,發(fā)現(xiàn)TPL以時(shí)間、濃度依賴(lài)性抑制HIV-1的轉(zhuǎn)錄,并且TPL可以特異性引起HIV-1編碼蛋白Tat的降解繼而抑制HIV-1的轉(zhuǎn)錄。研究顯示TPL不是通過(guò)阻斷CycT1對(duì)于Tat的保護(hù)作用,也不是在轉(zhuǎn)錄、翻譯水平影響Tat的含量,而是通過(guò)泛素蛋白酶體降解途徑促進(jìn)了 Tat的降解。為了尋找在該過(guò)程中起作用的E3泛素連接酶,運(yùn)用親和純化、質(zhì)譜、SILAC(穩(wěn)定同位素標(biāo)記氨基酸細(xì)胞培養(yǎng))蛋白組學(xué)定量技術(shù)對(duì)Tat相互作用蛋白進(jìn)行定量分析,共鑒定出1234種蛋白,其中包括12個(gè)E3泛素連接酶。需要指出的是,CUL4B不是在TPL處理時(shí)而是天然條件下引起Tat降解的E3泛素連接酶,而且TPL不是通過(guò)單一位點(diǎn)的泛素化引起Tat的降解。
【圖文】：

圖１．１邋Ｐ－ＴＥＦｂ在Ｔａｔ激活的ＨＩＶ－ｌ的轉(zhuǎn)錄中起重要作用州逡逑關(guān)于Ｐ－ＴＥＦｂ在幫助ＲＮＡ邋ＰｏｌＩＩ方面的作用并不能指示其在ＨＩＶ－丨轉(zhuǎn)錄方面的逡逑作用，因?yàn)椋校裕牛疲庵皇腔蜣D(zhuǎn)錄過(guò)程中所需要的眾多轉(zhuǎn)錄因子的一員。但逡逑有任何真核生物或病毒的基因要比ＨＩＶ－１病毒基因?qū)τ冢校撸裕牛疲獾氖褂萌绱隋义希欤常�，�?#176;］，ＨＩＶ－１采用了一種非常精細(xì)復(fù)雜的方式來(lái)捕捉和招募宿主細(xì)胞的逡逑ＥＦｂ來(lái)轉(zhuǎn)錄ＨＩＶ－１前病毒ＤＮＡ，因此，對(duì)于從ＨＩＶ－１邋ＬＴＲ起始的轉(zhuǎn)錄，Ｐ－ＴＥＦｂ逡逑為一種特殊的輔因子在ＨＩＶ－１的轉(zhuǎn)錄過(guò)程中發(fā)揮著重要作用事實(shí)上，我們逡逑于Ｐ－ＴＥＦｂ激活Ｐｏｌ邋ＩＩ轉(zhuǎn)錄延伸的機(jī)制研究極大程度上得益于對(duì)于Ｐ－ＴＥＦｂ在逡逑Ｖ－１轉(zhuǎn)錄方面的調(diào)控。逡逑．２邋Ｐ－ＴＥＦｂ的負(fù)性調(diào)控機(jī)制逡逑ＣＤＫ激酶的活性都是受到其相應(yīng)調(diào)控蛋白的嚴(yán)格調(diào)控的，ＣＤＫ９也不例外。逡逑表明，細(xì)胞內(nèi)并不是所有的ＣＤＫ９－ＣｙｃＴｌ復(fù)合物都有激酶和轉(zhuǎn)錄活性，，有兩逡逑

圖１．３邋ＨＩＶ－１編碼的Ｔａｔ通過(guò)與ＨＩＶ－１邋ＴＡＲ結(jié)合激活全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本的形成ｌ２９這個(gè)過(guò)程中，一方面Ｔａｔ可以與ＣｙｃＴｌ結(jié)合招募Ｐ－ＴＥＦｂ到鄰近的病毒ＲＴＡＲ上，另一方面，Ｔａｔ可以特異地與ＴＡＲ結(jié)合，ＣｙｃＴｌ也可以識(shí)別Ｔ的頂端環(huán)結(jié)構(gòu)，所以在Ｔａｔ的幫助下，Ｔａｔ、ＴＡＲ和Ｐ－ＴＥＦｂ形成一種穩(wěn)定的物，繼而招募Ｐ－ＴＥＦｂ到鄰近的處于暫停狀態(tài)的Ｐｏｌ邋ＩＩ上，Ｔａｔ招募的Ｐ－ＴＥ磷酸化Ｐｏ丨ＩＩ的最大亞基ＣＴＤ（Ｃ－ｔｅｍ＾ｉｎａ丨ｄｏｍａ丨ｎ）、ＤＳＩＦ和ＮＥＬＦ，導(dǎo)致級(jí)聯(lián)反應(yīng)最終激活ＨＩＶ－１的轉(zhuǎn)錄延伸％７３，邋Ｗ。逡逑如之前提到的，存在大量的結(jié)構(gòu)與功能的證據(jù)揭示了邋Ｔａｔ－ＴＡＲ－Ｐ－ＴＥＦｂ７ＳＫｓｎＲＮＰ之間有很多有趣的相似性。首先，Ｔａｔ上的精氨酸富集ＴＡＲ與ＨＥＸＩＭ１上與７ＳＫ結(jié)合基序具有功能可替換性Ｉ５３］。其次，ＴＡＲＲＮＡ上別結(jié)合的區(qū)域與７ＳＫＲＮＡ被ＨＥＸＩＭ１識(shí)別結(jié)合的區(qū)域在結(jié)構(gòu)和功能上也近［７５］。最后，蛋白ＣｙｃＴｌ的ｃｙｃｌｉｎ－ｂｏｘ既可以被ＨＥＸＩＭ１又可以被Ｔａｔ結(jié)合［
【學(xué)位授予單位】：廈門(mén)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2657397