【摘要】：目的:腦血管病是臨床多發(fā)病、常見病之一,給社會和家庭帶來沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。環(huán)維黃楊星D(CVB-D)是從黃楊木中提取得到的生物堿單體,具有改善腦缺血、心肌缺血等作用,目前以CVB-D為主的黃楊寧片是臨床上治療心腦血管疾病的一線用藥,然而,其水溶性差生物利用度低。此外血-腦屏障(BBB)的存在,阻擋了大部分藥物的入腦轉(zhuǎn)運,限制了其療效。脂質(zhì)體作為近年來制劑學(xué)領(lǐng)域的研究熱點,具有生物相容性好,降低毒副作用,提高靶向性等優(yōu)勢,因此選擇脂質(zhì)體作為遞送CVB-D的載體,可有效避免上述缺點。在前期研究基礎(chǔ)上,我們發(fā)現(xiàn)相比于灌胃和靜脈給藥,鼻腔給藥更具有腦靶向性。因此依據(jù)鼻黏膜與血腦屏障的特殊生理特征,選擇鼻腔給藥結(jié)合制劑學(xué)修飾,以期提高CVB-D的腦靶向性。綜上所述,本課題基于前期研究基礎(chǔ)上,制備具有腦靶向性的CVB-D脂質(zhì)體,并作出制劑學(xué)評價。后期,建立體外血腦屏障模型,評價制劑體外腦靶向性,并應(yīng)用微透析采樣技術(shù),開展血腦同步的藥動學(xué)研究,探討環(huán)維黃楊星D靶向脂質(zhì)體鼻腔給藥在腦靶向性方面的作用。方法:環(huán)維黃楊星D HPLC分析方法的建立CVB-D結(jié)構(gòu)不含有共軛雙鍵,無法直接采用紫外檢測器檢測。根據(jù)其結(jié)構(gòu)中含有仲氨基的特點,以異氰酸苯酯作為衍生劑,柱前衍生化后采用高效液相色譜法建立分析方法,并作方法學(xué)考察。Angiopep-2修飾吐溫-80包裹的環(huán)維黃楊星D靶向脂質(zhì)體的制備及制劑學(xué)評價前期通過核磁共振確證磷脂聚乙二醇馬來酰亞胺(DSPE-PEG-MAL)與Angiopep-2的連接,采用薄膜蒸發(fā)—探頭超聲法制備脂質(zhì)體,以包封率為指標(biāo)單因素考察優(yōu)化磷脂與膽固醇的質(zhì)量比,磷脂與CVB-D的質(zhì)量比,探頭超聲時間,磷脂與二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000)的摩爾比,磷脂與吐溫-80的摩爾比。并通過脂質(zhì)體形態(tài),粒徑,電位,多分散系數(shù)(PDI),穩(wěn)定性和溶血性等進行制劑學(xué)評價。環(huán)維黃楊星D脂質(zhì)體的體外靶向性評價永生化小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(bEnd.3)構(gòu)建體外血腦屏障(BBB)實驗?zāi)Ｐ?通過測量膜兩側(cè)電阻值,4h液面試漏試驗,以及辣根過氧化物酶(HRP)通透性試驗評價血腦屏障的建立。MTT細(xì)胞毒性試驗篩選給藥的安全濃度后,分別在血腦屏障模型的上層給予CVB-D溶液,CVB-D普通脂質(zhì)體和CVB-D靶向脂質(zhì)體,檢測透過血腦屏障的藥物的量以評價制劑的體外靶向性。環(huán)維黃楊星D HPLC-MS/MS分析方法的建立CVB-D的水溶性差,而微透析灌流液為水性灌流液,因此在生物樣品中CVB-D的含量極低,高效液相色譜法無法滿足分析要求,因此建立了CVB-D HPLC-MS/MS分析方法。環(huán)維黃楊星D脂質(zhì)體的體內(nèi)靶向性評價CVB-D靶向脂質(zhì)體、CVB-D普通脂質(zhì)體、CVB-D溶液和股靜脈給予CVB-D靶向脂質(zhì)體后,不同時間點采集血液和腦脊液樣品,測定藥物含量,并分析藥動學(xué)參數(shù)和腦靶向指數(shù),評價其腦靶向性。成果:1、建立了環(huán)維黃楊星D的HPLC分析方法色譜條件儀器:島津LC-20A;色譜柱:依利特C18(200×4.6,5μm);Phenomenex C18保護柱(4×2.0 mm);流速:1mL/min;流動相:甲醇:水=85:15;柱溫:室溫;進樣量:10uL;檢測波長:240nm;2、優(yōu)化了脂質(zhì)體制備工藝磷脂與CVB-D質(zhì)量比為20:1;磷脂與膽固醇質(zhì)量比為7:1;磷脂濃度203，

本文編號：2657284