【摘要】：目的通過二乙基亞硝胺(diethylnitrosamine,DEN)間歇給藥法建立大鼠原發(fā)性肝癌模型,探討人參皂苷CK對大鼠原發(fā)性肝癌生長的抑制作用及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激作用機制。方法選取54只雄性SD大鼠,隨機分為空白對照組9只,實驗組45只。通過DEN間歇給藥法建立大鼠原發(fā)性肝癌模型,實驗組大鼠給予0.01%DEN溶液自由飲用,連續(xù)5 w;第6周開始,大鼠自由飲用無菌用水,連續(xù)2 w;第8周開始,大鼠繼續(xù)給予0.01%DEN溶液自由飲用,連續(xù)6 w;第14周開始,大鼠再次自由飲用無菌用水,連續(xù)3 w。第16周末,實驗組大鼠行PET-CT檢測大鼠肝臟區(qū)域的腫瘤變化,并計算最大標準化攝取值(maximal standardized uptake value,SUV)。第17周開始,實驗組大鼠隨機分為模型組、人參皂苷CK低、中、高劑量組和陽性對照組,每組9只。人參皂苷CK低、中、高劑量組大鼠腹腔注射人參皂苷CK(2.5 mg/kg、5mg/kg、10mg/kg),陽性對照組腹腔注射5-Fu(5mg/kg),空白對照組、模型組大鼠腹腔注射等體積的生理鹽水,每天1次,連續(xù)2 w。第18周末,實驗組大鼠再次行PET-CT檢測大鼠肝臟區(qū)域的腫瘤變化并計算SUV值。利用HE染色檢測大鼠肝組織的形態(tài)學變化;采用TUNEL染色檢測大鼠肝組織細胞凋亡;利用Western blot法檢測大鼠肝癌組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)蛋白GRP78、p-elF2α、p-JNK、CHOP、Cleaved caspase-12 和凋亡蛋白 Cleaved caspase-3 的表達。結(jié)果1.實驗發(fā)現(xiàn),模型組大鼠出現(xiàn)精神萎靡、少食、鼠毛無光等改變,解剖后可見,肝臟腫大、邊緣頓挫,表面布有大小不一的灰白色結(jié)節(jié)并可見出血點;人參皂苷CK低、中、高劑量組、陽性對照組大鼠上述癥狀有所改善。2.PET-CT檢測結(jié)果顯示:給藥前大鼠肝組織出現(xiàn)腫瘤區(qū)域;與給藥前比較,人參皂苷CK給藥后,大鼠肝組織腫瘤區(qū)域減小;給藥后大鼠肝組織SUV值與給藥前相比,差異顯著,有統(tǒng)計學意義(P0.05或P0.01)。3.HE染色結(jié)果顯示:模型組大鼠肝細胞出現(xiàn)異型性改變,肝板發(fā)生融合成團;人參皂苷CK低、中、高劑量組中出現(xiàn)壞死細胞,且隨著人參皂苷劑量的增加壞死細胞的數(shù)量增加。4.TUNEL染色結(jié)果顯示:模型組中可見少量陽性棕色深染的凋亡細胞,人參皂苷CK低、中、高劑量組中陽性棕色深染的凋亡細胞數(shù)量增多;與模型組比較,人參皂苷CK低、中、高劑量組有顯著性差異,有統(tǒng)計學意義(P0.05)。5.Western blot檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)蛋白、凋亡蛋白表達結(jié)果顯示:與模型組比較,人參皂苷CK給藥后,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)蛋白GRP78、p-e1F2α、p-JNK、CHOP、Cleaved caspase-12和細胞凋亡執(zhí)行蛋白Cleaved caspase-3的表達差異顯著,有統(tǒng)計學意義(P0.05或P0.01)。結(jié)論人參皂苷CK可以抑制大鼠原發(fā)性肝癌的生長,其作用機制與激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應有關(guān)。
【圖文】：

延邊大學碩士學位論文逡逑Ｋ）屬于人參二醇型皂苷，它并不存在人參中，是通過人腸道細菌作用產(chǎn)生的一種降逡逑解物，具有保護肝臟、抗炎、抗腫瘤等多種藥理活性等點［２８］化學結(jié)構(gòu)式如圖１所示。逡逑與其他人參皂苷單體化合物相比，人參皂苷ＣＫ的抗腫瘤活性和增強免疫活性更強逡逑的，使人參皂苷ＣＫ在抗腫瘤研究備受國內(nèi)、外學者的關(guān)注。逡逑Ｈ０逡逑ＨＯｖ＾ｖ，ＯＨ逡逑0人0人＾０Ｈ逡逑ｊ＼邋Ｈ邐ＭＷ：邋６２２．８７８逡逑Ｇｉｎｓｓｎｃｓｉｄｅ邋ｃｏｍｐｏｕｎｄ邋Ｋ逡逑圖１．人參皂苷ＣＫ化學結(jié)構(gòu)式逡逑１．３．１人參皂苷ＣＫ抑制癌細胞增殖，誘導細胞凋亡逡逑人參皂苷ＣＫ可以抑制癌細胞增殖并誘導細脾凋亡，包括肝癌、肺癌ｐ９］、結(jié)腸逡逑癌［３（）］、乳腺癌［３１］等，其中對肝癌作用效果顯著。研究發(fā)現(xiàn)，人參皂苷ＣＫ人可以顯逡逑著地抑制人肝癌細胞ＳＭＭＣ－７７２１的增殖，并誘導細胞凋亡［３２］；可以抑制人肝癌細逡逑胞ＨｅｐＧ－２增殖、遷移和侵襲

ＰＥＴ－ＣＴ檢測結(jié)束后，，各組大鼠給予２０％烏拉坦麻醉后處死，取出肝組織，觀逡逑察肝組織形態(tài)與病理學變化，并拍照。將肝組織部分固定于１０％中性福爾馬林，部逡逑分凍存－８０°Ｃ冰箱，已備后續(xù)實驗使用。實驗流程圖如圖２所示。逡逑邐！邋人參筆苷ＣＫ２．５ｍｇ／ｋｇ逡逑腹腔＿人參鳥苷ＣＫ邋５邋ｍｇ／ｋｇ逡逑疰射邐人參皂苷ＣＫ邋１０邋ｍｇ／ｋｇ逡逑邐邋邐邋５－Ｆｕ邋５邋ｍｇ／ｋｇ逡逑０．０１％邋ＤＥＮ邐０．０１％邋ＤＥＮ邐｜邐Ｌ邋邐逡逑丨肀邋Ｉ邐￣￣ｉ￣￣邐｜處死ｐ鼠逡逑ｖ邐｜邐＞＇邐、ｆ邐＼ｒ邐邐＾逡逑１邋ｗ邐６ｗ邐８ｗ邐１４ｗ邐１７ｗ邐１９ｗ邐〉逡逑ｉ邋＼邐＊邋＼逡逑ＰＥＴ－ＣＴ邋ＰＥＴ－ＣＴ逡逑圖２．實驗流程圖逡逑３．邋２邋ＰＥＴ－ＣＴ邋檢測逡逑８逡逑
【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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