【摘要】：腸道免疫是果蠅抵抗外界有害物質侵染的防御系統(tǒng)。為探究大黃對果蠅腸道免疫的影響,本實驗通過對果蠅喂食百草枯(Paraquat)、十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulphate,SDS)及葡聚糖硫酸鈉(DSS),檢測果蠅生存率的變化。利用SDS構建腸道損傷模型,使用免疫染色的方法通過對前體細胞數(shù)目和體積、腸道干細胞的分裂、腸分泌細胞和腸吸收細胞的數(shù)目、JNK信號通路活性、腸道死亡細胞數(shù)目及腸道內活性氧自由基(ROS)水平進行檢測,同時還對腸道形態(tài)及腸道壽命進行分析。另外,腸道干細胞的增殖與分化受到多種因素的調節(jié),為探究CG7510基因對腸道干細胞增殖與分化的影響,本實驗通過對果蠅喂食百草枯(Paraquat)、葡聚糖硫酸鈉(DSS)以及革蘭氏陰性菌Ecc15檢測CG7510低表達突變體果蠅生存率。在腸道損傷狀態(tài)下,分析CG7510低表達突變體中前體細胞數(shù)目及腸道干細胞的分裂;正常狀態(tài)下,分析CG7510低突變體中,腸道干細胞數(shù)目與分裂、成腸細胞數(shù)目、腸吸收細胞及腸分泌細胞數(shù)目。實驗結果表明,大黃提取物顯著提高果蠅生存率;同時大黃提取物可以調節(jié)JNK信號途徑活性、緩解損傷誘導的腸道干細胞過度增殖與分化,增強果蠅腸道免疫;此外,大黃提取物還可以減少腸道上皮細胞死亡數(shù)目,降低腸道內活性氧自由基水平,從而維持果蠅腸道形態(tài),減少黑色素瘤的產生,提高果蠅壽命。實驗結果證明,大黃提取物緩解外界引起的腸道損傷,增強腸道的免疫功能。另外,在腸道感染下,CG7510低突變體可以降低果蠅生存率、減少前體細胞數(shù)目;正常狀態(tài)下,CG7510低突變體中出現(xiàn)腸道干細胞過度增殖和前體細胞過度分化的現(xiàn)象。實驗結果證明,CG7510對腸道干細胞的增殖和分化具有重要的調節(jié)作用。為進一步研究基因在腸道免疫中的功能奠定了基礎。
【圖文】：

圖 3-2 大黃提取物對 SDS 處理后果蠅中腸前體細胞數(shù)目和形態(tài)的影響（A）SDS 處理 16 個小時后果蠅腸道 GFP 染色 （B）定量分析腸道前體胞數(shù)目（C）定量分析腸道前體細胞大小 ***P<0.001Fig.3-2 The effects of Rheum officinale extract on numbers andsize of progenitor cells in in adult midgut of D. melanogaster after treatment with SDS(A) GFP staining of D.melanogaster intestinal after feeding SDS for 16 hours(B) Quantitative analysis of the numbers of progenitor cells(C) Quantitative analysis of the size of progenitor cells1.3 大黃提取物對腸道感染后果蠅腸道干細胞的影響實驗結果表明，大黃提取物可以緩解由 SDS 而引起的前體細胞過度增殖進一步探究大黃提取物在果蠅腸道免疫中的作用機制，下面分別討論大黃干細胞和成腸細胞的作用。首先討論大黃提取物對 SDS 誘導后腸道干的保護作用。驗使用 Delta-Gal4；UAS-GFP 品系的果蠅，該品系果蠅攜帶綠色熒光蛋白腸道干細胞（ISCs）。GFP 染色實驗結果表明：與對照蔗糖組相比，SDS

即正常狀態(tài)下處于分裂期的 ISCs 比較少；SDS 誘導 16 小時后，PH3+細胞數(shù)目顯著增加，如圖3-3D。這是由于誘導腸道組織損傷后，腸道干細胞（ISCs）快速進行分裂來替代損傷的細胞；而喂食 10%大黃后，PH3+細胞數(shù)目與 SDS 誘導后相比顯著減少（P<0.001）,恢復到正常狀態(tài)，，如圖 3-3D、E。實驗表明：大黃提取物可以抑制由于 SDS 誘導引起的 ISCs 面積增大和數(shù)目增加的現(xiàn)象。證明大黃可以抑制由 SDS 而誘導的 ISCs 過度增殖分化的現(xiàn)象。圖 3-3 大黃提取物對 SDS 處理后腸道干細胞數(shù)量、大小及分裂的影響（A）SDS 處理 16 小時 GFP 染色 （B）定量分析腸道干細胞數(shù)目（C）定量分析腸道干細胞大�。―）SDS 處理 16 小時后 PH3 染色 （E）定量分析分裂期腸道干細胞數(shù)目 ***P<0.001Fig.3-3 The effects of Rheum officinale extract on numbers，size and division of ISCsin adult midgut of D. melanogaster after treatment with SDS(A)GFP staining of D.melanogaster intestinal after feeding SDS for 16 hours（B）Quantitative analysis of the numbers of ISCs(C) Quantitative analysis of the size of ISCs(D) PH3 staining of D
【學位授予單位】：東北林業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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本文編號：2656129