發(fā)布時(shí)間：2020-05-09 12:19

【摘要】：腸道免疫是果蠅抵抗外界有害物質(zhì)侵染的防御系統(tǒng)。為探究大黃對(duì)果蠅腸道免疫的影響,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)果蠅喂食百草枯(Paraquat)、十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulphate,SDS)及葡聚糖硫酸鈉(DSS),檢測(cè)果蠅生存率的變化。利用SDS構(gòu)建腸道損傷模型,使用免疫染色的方法通過(guò)對(duì)前體細(xì)胞數(shù)目和體積、腸道干細(xì)胞的分裂、腸分泌細(xì)胞和腸吸收細(xì)胞的數(shù)目、JNK信號(hào)通路活性、腸道死亡細(xì)胞數(shù)目及腸道內(nèi)活性氧自由基(ROS)水平進(jìn)行檢測(cè),同時(shí)還對(duì)腸道形態(tài)及腸道壽命進(jìn)行分析。另外,腸道干細(xì)胞的增殖與分化受到多種因素的調(diào)節(jié),為探究CG7510基因?qū)δc道干細(xì)胞增殖與分化的影響,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)果蠅喂食百草枯(Paraquat)、葡聚糖硫酸鈉(DSS)以及革蘭氏陰性菌Ecc15檢測(cè)CG7510低表達(dá)突變體果蠅生存率。在腸道損傷狀態(tài)下,分析CG7510低表達(dá)突變體中前體細(xì)胞數(shù)目及腸道干細(xì)胞的分裂;正常狀態(tài)下,分析CG7510低突變體中,腸道干細(xì)胞數(shù)目與分裂、成腸細(xì)胞數(shù)目、腸吸收細(xì)胞及腸分泌細(xì)胞數(shù)目。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,大黃提取物顯著提高果蠅生存率;同時(shí)大黃提取物可以調(diào)節(jié)JNK信號(hào)途徑活性、緩解損傷誘導(dǎo)的腸道干細(xì)胞過(guò)度增殖與分化,增強(qiáng)果蠅腸道免疫;此外,大黃提取物還可以減少腸道上皮細(xì)胞死亡數(shù)目,降低腸道內(nèi)活性氧自由基水平,從而維持果蠅腸道形態(tài),減少黑色素瘤的產(chǎn)生,提高果蠅壽命。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,大黃提取物緩解外界引起的腸道損傷,增強(qiáng)腸道的免疫功能。另外,在腸道感染下,CG7510低突變體可以降低果蠅生存率、減少前體細(xì)胞數(shù)目;正常狀態(tài)下,CG7510低突變體中出現(xiàn)腸道干細(xì)胞過(guò)度增殖和前體細(xì)胞過(guò)度分化的現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,CG7510對(duì)腸道干細(xì)胞的增殖和分化具有重要的調(diào)節(jié)作用。為進(jìn)一步研究基因在腸道免疫中的功能奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

圖 3-2 大黃提取物對(duì) SDS 處理后果蠅中腸前體細(xì)胞數(shù)目和形態(tài)的影響（A）SDS 處理 16 個(gè)小時(shí)后果蠅腸道 GFP 染色 （B）定量分析腸道前體胞數(shù)目（C）定量分析腸道前體細(xì)胞大小 ***P<0.001Fig.3-2 The effects of Rheum officinale extract on numbers andsize of progenitor cells in in adult midgut of D. melanogaster after treatment with SDS(A) GFP staining of D.melanogaster intestinal after feeding SDS for 16 hours(B) Quantitative analysis of the numbers of progenitor cells(C) Quantitative analysis of the size of progenitor cells1.3 大黃提取物對(duì)腸道感染后果蠅腸道干細(xì)胞的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大黃提取物可以緩解由 SDS 而引起的前體細(xì)胞過(guò)度增殖進(jìn)一步探究大黃提取物在果蠅腸道免疫中的作用機(jī)制，下面分別討論大黃干細(xì)胞和成腸細(xì)胞的作用。首先討論大黃提取物對(duì) SDS 誘導(dǎo)后腸道干的保護(hù)作用。驗(yàn)使用 Delta-Gal4；UAS-GFP 品系的果蠅，該品系果蠅攜帶綠色熒光蛋白腸道干細(xì)胞（ISCs）。GFP 染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與對(duì)照蔗糖組相比，SDS

即正常狀態(tài)下處于分裂期的 ISCs 比較少；SDS 誘導(dǎo) 16 小時(shí)后，PH3+細(xì)胞數(shù)目顯著增加，如圖3-3D。這是由于誘導(dǎo)腸道組織損傷后，腸道干細(xì)胞（ISCs）快速進(jìn)行分裂來(lái)替代損傷的細(xì)胞；而喂食 10%大黃后，PH3+細(xì)胞數(shù)目與 SDS 誘導(dǎo)后相比顯著減少（P<0.001）,恢復(fù)到正常狀態(tài)，，如圖 3-3D、E。實(shí)驗(yàn)表明：大黃提取物可以抑制由于 SDS 誘導(dǎo)引起的 ISCs 面積增大和數(shù)目增加的現(xiàn)象。證明大黃可以抑制由 SDS 而誘導(dǎo)的 ISCs 過(guò)度增殖分化的現(xiàn)象。圖 3-3 大黃提取物對(duì) SDS 處理后腸道干細(xì)胞數(shù)量、大小及分裂的影響（A）SDS 處理 16 小時(shí) GFP 染色 （B）定量分析腸道干細(xì)胞數(shù)目（C）定量分析腸道干細(xì)胞大�。―）SDS 處理 16 小時(shí)后 PH3 染色 （E）定量分析分裂期腸道干細(xì)胞數(shù)目 ***P<0.001Fig.3-3 The effects of Rheum officinale extract on numbers，size and division of ISCsin adult midgut of D. melanogaster after treatment with SDS(A)GFP staining of D.melanogaster intestinal after feeding SDS for 16 hours（B）Quantitative analysis of the numbers of ISCs(C) Quantitative analysis of the size of ISCs(D) PH3 staining of D
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2656129