【摘要】：目的:通過研究椒目的質(zhì)量及其質(zhì)量控制方法,制訂有效評價(jià)椒目質(zhì)量的山西省地方標(biāo)準(zhǔn),為椒目藥材質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù);建立一種綠色、快速的樣品前處理技術(shù)——漂浮有機(jī)液滴凝固液相微萃取(solidification of floating organic liquid-phase microextraction,SFODLPME)聯(lián)合氣相色譜(gas chromatography,GC)的測定方法,測定椒目中油酸、亞油酸、α-亞麻酸、棕櫚酸及硬脂酸的含量,為多指標(biāo)控制椒目質(zhì)量提供一定的參考依據(jù),也為中藥脂肪酸的測定提供一種新的方法。方法:1.本課題采用常規(guī)的生藥鑒別方法,查閱《中國植物志》、《中國高等植物圖鑒》、《中藥大辭典》等有關(guān)專著,對收集的10批椒目藥材進(jìn)行了基源鑒別、性狀鑒別、顯微鑒別及薄層鑒別,建立了椒目的定性鑒別方法。參照2010版《中國藥典》(一部)附錄和2015版《中國藥典》第四部通則相關(guān)方法,對椒目藥材進(jìn)行常規(guī)的檢查,包括雜質(zhì)、水分、灰分、酸不溶性灰分、重金屬、砷鹽及醇溶性浸出物,并制訂椒目雜質(zhì)、水分、灰分、酸不溶性灰分及醇溶性浸出物的限度。采用單因素實(shí)驗(yàn),比較了索氏法與超聲法提取脂肪油的提取率,考察了溶劑、料液比、提取時(shí)間,優(yōu)化了提取脂肪油的工藝,建立了椒目脂肪油的最佳提取方法;優(yōu)化了椒目脂肪酸甲酯化的條件;對色譜柱類型、柱溫、檢測器溫度及進(jìn)樣口溫度進(jìn)行了考察,建立了α-亞麻酸的GC測定方法,測定了10批椒目中α-亞麻酸的含量;制訂了脂肪油及α-亞麻酸含量的限度,建立了椒目的定量研究方法。2.對SFODLPME的各項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,即有機(jī)溶劑的體積、鹽濃度、攪拌速度、萃取時(shí)間、供相體積,篩選出最佳的微萃取條件,優(yōu)化了色譜條件,建立sfodlpme gc的含量測定方法,同時(shí)測定椒目中油酸、亞油酸、α-亞麻酸、棕櫚酸、硬脂酸的含量,并對sfodlpme-gc法與傳統(tǒng)液液萃取(liquid-liquidextraction,lle)-gc法α-亞麻酸的測定結(jié)果進(jìn)行了比較。結(jié)果:1.本課題組收集的10批椒目均為蕓香科植物花椒zanthoxylumbungeanummaxim.的干燥成熟種子。卵圓形或類圓形,直徑3~5mm,表面具黑色光澤,外皮常脫落,脫落后呈網(wǎng)狀灰棕色或棕黑色紋理,富油性,氣香,味辛辣,為其性狀特征。以種皮表皮細(xì)胞、石細(xì)胞、內(nèi)種皮細(xì)胞(下皮細(xì)胞)、胚乳細(xì)胞、油滴等為主要顯微特征。采用硅膠g薄層板,以α-亞麻酸和椒目對照藥材為對照,以環(huán)己烷-乙酸乙酯-乙酸(10:1:0.1)為展開劑,以1%硫酸香草醛溶液為顯色劑,105℃顯色后,在日光下檢視,斑點(diǎn)清晰,重現(xiàn)性好。建立了椒目藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的性狀鑒別項(xiàng)、顯微鑒別項(xiàng)和薄層鑒別項(xiàng)。脂肪油提取工藝優(yōu)選的條件為:采用超聲提取法,以石油醚為溶劑,料液比為1:8,超聲提取30min。α-亞麻酸甲酯化優(yōu)選的條件為:0.5mol·l-1氫氧化鉀甲醇溶液1ml,60℃水浴加熱30min;14%三氟化硼甲醇溶液1ml,60℃水浴加熱20min。建立椒目α-亞麻酸含量的gc測定方法:采用聚乙二醇20000(peg-20m)毛細(xì)管柱(30m×0.25mm,0.5μm),在柱溫為190℃,檢測器溫度為250℃,進(jìn)樣口溫度為250℃的條件下,α-亞麻酸得到較好的分離;含量測定方法學(xué)研究表明,α-亞麻酸在0.3046~12.1840mg·ml-1濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,回歸方程為y=0.4871x+0.0015,r=0.9999(n=6),平均回收率為100.65%。10批椒目藥材樣品的雜質(zhì)含量1.08%~5.82%,含水量9.66%~11.55%,灰分含量5.13%~6.51%,酸不溶性灰分含量0.11%~0.56%,重金屬均在百萬分之十以下,砷鹽均在百萬分之二以下;以干燥品計(jì),椒目中浸出物含量16.77%~24.80%,脂肪油含量19.82%~28.08%,α-亞麻酸含量4.06%~6.56%。按照中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)限度制定原則,即最大(小)值±10%,提出了椒目質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中雜質(zhì)含量不得過3%,水分含量不得過12.7%,總灰分含量不得過7.2%,酸不溶性灰分含量不得過0.6%;浸出物含量不得少于15.1%,脂肪油含量不得少于17.84%,α-亞麻酸含量不得少于3.65%。建立了椒目質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢查項(xiàng)和含量測定項(xiàng)。建立了椒目藥材的山西省地方標(biāo)準(zhǔn)(已審核)及標(biāo)準(zhǔn)草案。2.SFODLPME條件優(yōu)化結(jié)果:萃取溶劑正十二醇體積20μL,鹽濃度為10%,攪拌速度為700 r/min,萃取時(shí)間為20 min,供相體積為6.0 mL。建立了SFODLPME-GC的測定方法,采用聚乙二醇20000(PEG-20M)毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.5μm),程序升溫,起始溫度170℃,以5℃/min速率升至190℃,保持10 min,再以5℃/min升溫至210℃,保持10 min,進(jìn)樣口溫度為250℃,FID檢測器溫度為250℃。含量測定方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明:油酸、亞油酸、α-亞麻酸、棕櫚酸、硬脂酸依次在8.37~99.12μg·mL-1、8.60~135.84μg·mL-1、1.62~161.68μg·mL-1、10.17~160.64μg·m L-1、10.13~120.00μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,檢出限1.2~1.6μg·mL-1;日內(nèi)精密度RSD6.43%;日間精密度RSD9.61%;椒目五個(gè)脂肪酸的回收率在90.18%~109.14%。3批椒目藥材的含量測定結(jié)果:油酸含量為4.31%~5.52%,亞油酸含量為3.32%~5.36%,α-亞麻酸含量為6.72%~7.81%,棕櫚酸含量為2.20%~3.41%,硬脂酸含量為0.22%~0.23%。對SFODLPME-GC法與傳統(tǒng)LLE-GC法的椒目α-亞麻酸的測定結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)比較,按α=0.05水準(zhǔn),P0.05,表明兩種方法沒有顯著性差異,SFODLPME-GC法可用于椒目脂肪酸的測定。結(jié)論:1.通過對10批不同產(chǎn)地的椒目藥材進(jìn)行了基源鑒別、性狀鑒別、顯微鑒別、薄層鑒別、常規(guī)檢查及含量測定等的研究,制訂了椒目藥材的山西省質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。該研究建立的方法具有良好的準(zhǔn)確性、專屬性和可行性,為椒目藥材的質(zhì)量控制和用藥安全提供科學(xué)依據(jù)。2.SFODLPME GC法具有有機(jī)溶劑用量少,對待測組分的富集效果明顯,且集分離、純化、濃縮于一步的優(yōu)點(diǎn),可用于椒目脂肪酸的測定,且為多指標(biāo)控制椒目質(zhì)量提供參考依據(jù),也為中藥脂肪酸的測定提供一種新方法。
【圖文】：

花椒原植物圖

原植物臘葉標(biāo)本圖
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R282.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2655530