【摘要】：研究背景:肺癌的發(fā)病率和死亡率居所有惡性腫瘤之首,其中非小細(xì)胞肺癌(N SCLC)占所有肺癌病理類型的80%。NSCLC的治療手段以手術(shù)、放化療、靶向治療和免疫治療為主。因NSCLC起病較為隱匿,多數(shù)患者確診時(shí)已屬晚期,而失去手術(shù)機(jī)會(huì),生存期短,預(yù)后差�；熓欠伟┲委煹闹匾侄�。但肺癌多藥耐藥(MDR)問題的出現(xiàn),常導(dǎo)致化療的失敗,并使化療臨床療效難以有更進(jìn)一步提高。大量研究表明NSCLC多藥耐藥的發(fā)生與P-gp和MRP1蛋白的表達(dá)密切相關(guān)。P-gp和MRP蛋白是JNK信號(hào)通路中的關(guān)鍵蛋白,課題組前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)二陳湯可抑制JNK通路的活性。因此我們提出“二陳湯是否通過JNK信號(hào)通路參與調(diào)控P-gp和MRP1蛋白的表達(dá),從而達(dá)到逆轉(zhuǎn)NSCLC多藥耐藥的作用”的假說。并擬通過MTT、免疫熒光和免疫蛋白印跡三種體外實(shí)驗(yàn),初步探索二陳湯對(duì)人肺腺癌耐順鉑細(xì)胞株(A549/DDP)的增殖抑制、及P-gp和MRP1蛋白表達(dá)情況的影響。為MDR發(fā)生機(jī)制及逆轉(zhuǎn)劑的中醫(yī)藥研究提供參考數(shù)據(jù),為臨床應(yīng)用二陳湯治療NSCLC提供理論依據(jù)。研究目的:通過體外實(shí)驗(yàn)研究二陳湯對(duì)A549/DDP細(xì)胞增殖抑制及多藥耐藥相關(guān)蛋白P-gp、MRPI表達(dá)的影響,為臨床應(yīng)用二陳湯治療NSCLC提供理論依據(jù)。研究方法:1.采用MTT法檢測(cè)二陳湯及二陳湯+六味方、二陳精簡(jiǎn)方、二陳湯+益氣養(yǎng)陰方,對(duì)A549/DDP細(xì)胞作用48小時(shí)后的生長抑制情況,并篩選出較優(yōu)的藥物及濃度作為下一步實(shí)驗(yàn)用藥的依據(jù)。2.免疫熒光技術(shù)觀察順鉑組、二陳湯組、二陳湯+順鉑組對(duì)A549/DDP細(xì)胞株形態(tài)學(xué)的影響及對(duì)P-gp蛋白表達(dá)的影響。3.免疫蛋白印跡(Western Blot)法檢測(cè)順鉑組、二陳湯組、二陳湯+順鉑組對(duì)A549/DDP細(xì)胞株的影響及對(duì)P-gp、MRP1蛋白表達(dá)的影響研究結(jié)果:1.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:不同的二陳湯加減方在藥物濃度為25.6mg/ml時(shí)對(duì)A549/DD P細(xì)胞株均有抑制作用,并且與空白對(duì)照組相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。二陳湯組(25.6mg/ml)與空白對(duì)照組相比,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異(P0.01)。其中二陳湯(25.6mg/ml)與順鉑(10ug/ml)組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。故選取濃度為25.6mg/ml二陳湯組完成進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。2.免疫熒光技術(shù)顯示:空白對(duì)照組和順鉑組的A549/DDP細(xì)胞株形態(tài)未發(fā)生變化,細(xì)胞質(zhì)中P-gp蛋白分布較為緊密。而含有二陳湯組的A549/DDP細(xì)胞株可觀察到細(xì)胞核萎縮,細(xì)胞質(zhì)中P-gp蛋白的表達(dá)也較弱,熒光顯示較為疏散。二陳湯+順鉑組中A549/DDP細(xì)胞株形態(tài)學(xué)改變更加明顯。3.Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示:與空白對(duì)照組相比,二陳湯組中P-gp、MRP1蛋白表達(dá)均明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在P-gp蛋白表達(dá)量上:二陳湯+順鉑組與空白對(duì)照組比較,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異(P0.01),與順鉑組相比較,差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。MRP1蛋白表達(dá)量上:二陳湯+順鉑組與空白組相比較,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異(P0.01)。結(jié)論:1.不同的二陳湯加減方在藥物濃度為25.6mg/ml時(shí)具有抑制A549/DDP細(xì)胞株增殖的作用。2.二陳湯具有一定逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥的作用,其機(jī)制與通過JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路降低多藥耐藥相關(guān)蛋白P-gp及MRP1表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

圖１：用二陳湯（２５．６ｍｇ／ｍｌ），，ＤＤＰ邋（１０｜ｉｇ／ｍＬ）和聯(lián)合組處理細(xì)胞４８小時(shí)
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2655311