【摘要】：中藥作為中醫(yī)治療疾病的主要載體,常以“膏丹丸散、片膠液針”等形式被患者使用。因此,中藥制劑則是藥材與臨床應用的主要紐帶,制劑原料便是療效高低的溯源,而原料的理化性質(zhì)卻影響中藥劑型的選擇。作為中藥制劑原料的基本單元,中藥組分的整體性質(zhì)表征是亟待解決的一個問題。本課題以赤芍萜苷為模型藥物,辨識、發(fā)現(xiàn)防治心肌缺血的代表性成分,嘗試對中藥組分的整體生物藥劑學性質(zhì)進行表征。主要研究內(nèi)容如下:1.赤芍萜苷組分防治心肌缺血代表性成分的辨識結(jié)合TCMSP數(shù)據(jù)庫和文獻查閱,利用UPLC-TOF/MS/MS對赤芍化學成分進行定性研究,再與心肌缺血的關鍵受體蛋白進行分子對接,發(fā)現(xiàn)Libdockscore分值大于平均值都為萜苷類成分,確證萜苷是赤芍防治心肌缺血的有效組分;對赤芍萜苷的入血成分進行分析,發(fā)現(xiàn)血漿中有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷和氧化芍藥苷等原型成分;將赤芍提取物與H9C2心肌細胞共孵育后,被檢出的親和成分有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷和苯甲酰芍藥苷,未發(fā)現(xiàn)其他帖苷類原型成分。通過辨識可知,赤芍萜苷組分的代表性成分可能是芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷和氧化芍藥苷。2.赤芍萜苷組分防治心肌缺血代表性成分的發(fā)現(xiàn)利用HPLC對赤芍萜苷組分進行結(jié)構(gòu)解析,芍藥苷含量為33.82%,芍藥內(nèi)酯苷含量為21.14%,苯甲酰芍藥苷含量1.91%;氧化芍藥苷含量為3.51%。4個成分的量比關系為17.69/11.14/1.0/1.83,總質(zhì)量占萜苷組分整體的60.38%。建立H9C2細胞缺氧損傷模型,遵循組分各萜苷成分的量比關系,通過配伍組合,以CK、LDH、AST、SOD、CAT、GSH-Px、MDA為評價指標,發(fā)現(xiàn)芍藥苷+芍藥內(nèi)酯苷+苯甲酰芍藥苷是赤芍萜苷防治心肌缺血的代表性成分。從細胞凋亡指數(shù)、凋亡相關蛋白Bax、Bc1-2、Caspase-3、細胞線粒體相關的Ndufa4、Ndufa8、Cox7a2、TFAMmRNA表達,進一步驗證了芍藥苷+芍藥內(nèi)酯苷+苯甲釀芍藥苷具有維持線粒體功能、抑制細胞凋亡的作用。3.赤芍萜苷組分代表性成分的體內(nèi)藥效學研究和各成分藥效貢獻率評價利用ISO誘導大鼠心肌缺血模型,以心肌病理改變、超微結(jié)構(gòu)變化、Tunnel凋亡指數(shù)、心肌酶水平(CK、LDH)、能量代謝(ATP、糖原)、凋亡蛋白(Caspase-3、Bax、Bc1-2)表達等多個方面,對赤芍萜苷與代表性成分的藥效情況進行對比分析。結(jié)果表明,芍藥苷+芍藥內(nèi)酯苷+苯甲酰芍藥苷與赤芍萜苷組分(300 mg/kg)對于心肌缺血損傷具有一定的保護作用,且與萜苷組分在多個評價指標的調(diào)節(jié)上沒有統(tǒng)計學差異。以動物體內(nèi)藥理效應為指標,利用多指標數(shù)據(jù)歸一化加權(quán)法對3個代表性成分的藥效貢獻率進行了綜合評價。結(jié)果發(fā)現(xiàn),赤芍萜苷組分中各成分的藥效貢獻率分別為:芍藥苷為54.87%,芍藥內(nèi)酯苷為32.46%,苯甲酰芍藥苷為12.67%。4.赤芍萜苷組分的生物藥劑學性質(zhì)表征在單成分或組分體系下,測定各代表性成分的平衡溶解度、表觀油水分配系數(shù),并進行相似度評價和離散度分析。組分中苯甲酰芍藥苷溶解度明顯增加,其與芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷的歐式距離分別為62.96和43.55,具有一定的相似性,油水分配系數(shù)的歐式距離卻都在2200左右,差異較大,理論上應將赤芍萜苷分為Ⅰ/Ⅲ兩個亞組分。考慮到I類成分的苯甲酰芍藥苷不需要進行專屬工藝研究,為了簡化制劑方法,未進行亞組分的劃分,仍將赤芍萜苷作為制劑原料的一個基本單元,并引入藥效貢獻率權(quán)重擬合表征組分的整體生物藥劑學性質(zhì)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),赤芍萜苷組分的平衡溶解度為36.09～38.39 mg·mL-1,油水分配系數(shù)1.52～1.63,Caco-2細胞的表觀吸收滲透系數(shù)為1.68×10-6cm·s-1,表觀吸收分泌系數(shù)為1.84×10-6cm·s-1,表明發(fā)現(xiàn)赤芍萜苷為高溶解性、低滲透性的中藥組分。5.赤芍萜苷組分吸收促進劑的篩選及藥動學研究采用大鼠離體外翻小腸吸收試驗,以2 h的芍藥苷累積滲透量為評價指標,篩選吸收促進劑的種類及用量,確定癸酸鈉/赤芍萜苷(3:1)效果最好;測定赤芍萜苷(300mg/kg)灌胃給藥后的大鼠體內(nèi)藥-時曲線,發(fā)現(xiàn)與癸酸鈉合用時,芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷AUC(0-24h)分別增加了36.33%和28.18%,當整合組分的藥動學后,赤芍萜苷組分的AUC(0-24h)增加了35.27%,說明吸收促進劑的加入,可以提高赤芍萜苷組分的整體生物利用度。
【圖文】：

圖２．２赤芍１４個候選成分的三維結(jié)構(gòu)逡逑Ｆｉｇ邋２．２邋Ｔｈｒｅｅ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋１４邋ｃａｎｄｉｄａｔｅ邋ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ逡逑２．１．３．２結(jié)果

圖２．３含原配體的靶蛋白分子對接方法的驗證逡逑
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 XIN Qi-qi;YANG Bin-rui;ZHOU He-feng;WANG Yan;YI Bo-wen;CONG Wei-hong;LEE Simon Ming-Yuen;CHEN Ke-ji;;Paeoniflorin Promotes Angiogenesis in A Vascular Insufficiency Model of Zebrafish in vivo and in Human Umbilical Vein Endothelial Cells in vitro[J];Chinese Journal of Integrative Medicine;2018年07期

2 伍珊娜;劉振杰;章從恩;何琴;王玄;牛明;王伽伯;肖小河;;基于譜效關系的燈盞細辛體外抗血小板聚集活性成分研究[J];中草藥;2017年24期

3 冷雪;宋囡;臧安緣;李其芳;谷麗艷;;JAK2/STAT3信號通路在人參皂苷Re預處理預防異丙腎上腺素致急性心肌缺血損傷中的作用[J];中國藥理學通報;2018年01期

4 鄭華珠;王利勝;吳銀愛;范有明;孟英姣;沈曉;;UPLC-MS/MS聯(lián)合細胞膜固相色譜法分析補陽還五湯作用于神經(jīng)元樣PC12細胞的效應成分[J];中國實驗方劑學雜志;2018年04期

5 趙偉;高宇勤;郝霽萍;賀少輝;馬宏恩;;芍藥苷預處理對微血管內(nèi)皮細胞缺氧復氧模型的干預作用[J];西南國防醫(yī)藥;2017年11期

6 王月;劉露絲;劉娟;彭成;熊亮;;川芎油對氯化鈷損傷PC12細胞保護作用及其活性成分研究[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2017年11期

7 王月紅;王磊;張洪兵;許浚;袁雪海;韓彥琪;龔蘇曉;張鐵軍;;基于HPLC-Q/TOF-MS的六經(jīng)頭痛片血中移行成分研究[J];中草藥;2017年20期

8 王艷宏;齊笑;關楓;馮宇飛;李永吉;陳大忠;;馬錢子總堿中2種成分的平衡溶解度、油水分配系數(shù)、體外透皮特性[J];中成藥;2017年10期

9 劉洋;尹秀文;王子禹;李雪蓮;潘孟;李彥萍;董玲;;黃連提取物的中藥生物藥劑學分類系統(tǒng)研究[J];中國中藥雜志;2017年21期

10 黎丹;李三華;楊龍江;管勇林;王剛;;基于組效關系的石上柏揮發(fā)油抗腫瘤有效成分的辨識[J];中國實驗方劑學雜志;2018年02期

相關碩士學位論文 前5條

1 周禮彬;川滇無患子總皂苷化學成分及表面活性的應用性能研究[D];云南中醫(yī)學院;2017年

2 朱智濤;芍藥苷鼻用原位凝膠的制備及體內(nèi)外釋放與吸收行為研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2017年

3 韓秀娟;丹酚酸組分結(jié)構(gòu)特征解析及整體生物藥劑學性質(zhì)的表征[D];南京中醫(yī)藥大學;2016年

4 何靜;基于目標成分“敲出/敲入”質(zhì)量控制模式的中藥姜黃抗氧化藥效物質(zhì)辨識[D];昆明理工大學;2011年

5 邱再明;桔梗皂苷類成分分離鑒定及其結(jié)構(gòu)與表面活性及溶血毒性的關系[D];揚州大學;2006年

，

本文編號：2655299