【摘要】：中藥作為中醫(yī)治療疾病的主要載體,常以“膏丹丸散、片膠液針”等形式被患者使用。因此,中藥制劑則是藥材與臨床應(yīng)用的主要紐帶,制劑原料便是療效高低的溯源,而原料的理化性質(zhì)卻影響中藥劑型的選擇。作為中藥制劑原料的基本單元,中藥組分的整體性質(zhì)表征是亟待解決的一個問題。本課題以赤芍萜苷為模型藥物,辨識、發(fā)現(xiàn)防治心肌缺血的代表性成分,嘗試對中藥組分的整體生物藥劑學(xué)性質(zhì)進(jìn)行表征。主要研究內(nèi)容如下:1.赤芍萜苷組分防治心肌缺血代表性成分的辨識結(jié)合TCMSP數(shù)據(jù)庫和文獻(xiàn)查閱,利用UPLC-TOF/MS/MS對赤芍化學(xué)成分進(jìn)行定性研究,再與心肌缺血的關(guān)鍵受體蛋白進(jìn)行分子對接,發(fā)現(xiàn)Libdockscore分值大于平均值都為萜苷類成分,確證萜苷是赤芍防治心肌缺血的有效組分;對赤芍萜苷的入血成分進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)血漿中有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷和氧化芍藥苷等原型成分;將赤芍提取物與H9C2心肌細(xì)胞共孵育后,被檢出的親和成分有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷和苯甲酰芍藥苷,未發(fā)現(xiàn)其他帖苷類原型成分。通過辨識可知,赤芍萜苷組分的代表性成分可能是芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷和氧化芍藥苷。2.赤芍萜苷組分防治心肌缺血代表性成分的發(fā)現(xiàn)利用HPLC對赤芍萜苷組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析,芍藥苷含量為33.82%,芍藥內(nèi)酯苷含量為21.14%,苯甲酰芍藥苷含量1.91%;氧化芍藥苷含量為3.51%。4個成分的量比關(guān)系為17.69/11.14/1.0/1.83,總質(zhì)量占萜苷組分整體的60.38%。建立H9C2細(xì)胞缺氧損傷模型,遵循組分各萜苷成分的量比關(guān)系,通過配伍組合,以CK、LDH、AST、SOD、CAT、GSH-Px、MDA為評價(jià)指標(biāo),發(fā)現(xiàn)芍藥苷+芍藥內(nèi)酯苷+苯甲酰芍藥苷是赤芍萜苷防治心肌缺血的代表性成分。從細(xì)胞凋亡指數(shù)、凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bc1-2、Caspase-3、細(xì)胞線粒體相關(guān)的Ndufa4、Ndufa8、Cox7a2、TFAMmRNA表達(dá),進(jìn)一步驗(yàn)證了芍藥苷+芍藥內(nèi)酯苷+苯甲釀芍藥苷具有維持線粒體功能、抑制細(xì)胞凋亡的作用。3.赤芍萜苷組分代表性成分的體內(nèi)藥效學(xué)研究和各成分藥效貢獻(xiàn)率評價(jià)利用ISO誘導(dǎo)大鼠心肌缺血模型,以心肌病理改變、超微結(jié)構(gòu)變化、Tunnel凋亡指數(shù)、心肌酶水平(CK、LDH)、能量代謝(ATP、糖原)、凋亡蛋白(Caspase-3、Bax、Bc1-2)表達(dá)等多個方面,對赤芍萜苷與代表性成分的藥效情況進(jìn)行對比分析。結(jié)果表明,芍藥苷+芍藥內(nèi)酯苷+苯甲酰芍藥苷與赤芍萜苷組分(300 mg/kg)對于心肌缺血損傷具有一定的保護(hù)作用,且與萜苷組分在多個評價(jià)指標(biāo)的調(diào)節(jié)上沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。以動物體內(nèi)藥理效應(yīng)為指標(biāo),利用多指標(biāo)數(shù)據(jù)歸一化加權(quán)法對3個代表性成分的藥效貢獻(xiàn)率進(jìn)行了綜合評價(jià)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),赤芍萜苷組分中各成分的藥效貢獻(xiàn)率分別為:芍藥苷為54.87%,芍藥內(nèi)酯苷為32.46%,苯甲酰芍藥苷為12.67%。4.赤芍萜苷組分的生物藥劑學(xué)性質(zhì)表征在單成分或組分體系下,測定各代表性成分的平衡溶解度、表觀油水分配系數(shù),并進(jìn)行相似度評價(jià)和離散度分析。組分中苯甲酰芍藥苷溶解度明顯增加,其與芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷的歐式距離分別為62.96和43.55,具有一定的相似性,油水分配系數(shù)的歐式距離卻都在2200左右,差異較大,理論上應(yīng)將赤芍萜苷分為Ⅰ/Ⅲ兩個亞組分。考慮到I類成分的苯甲酰芍藥苷不需要進(jìn)行專屬工藝研究,為了簡化制劑方法,未進(jìn)行亞組分的劃分,仍將赤芍萜苷作為制劑原料的一個基本單元,并引入藥效貢獻(xiàn)率權(quán)重?cái)M合表征組分的整體生物藥劑學(xué)性質(zhì)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),赤芍萜苷組分的平衡溶解度為36.09～38.39 mg·mL-1,油水分配系數(shù)1.52～1.63,Caco-2細(xì)胞的表觀吸收滲透系數(shù)為1.68×10-6cm·s-1,表觀吸收分泌系數(shù)為1.84×10-6cm·s-1,表明發(fā)現(xiàn)赤芍萜苷為高溶解性、低滲透性的中藥組分。5.赤芍萜苷組分吸收促進(jìn)劑的篩選及藥動學(xué)研究采用大鼠離體外翻小腸吸收試驗(yàn),以2 h的芍藥苷累積滲透量為評價(jià)指標(biāo),篩選吸收促進(jìn)劑的種類及用量,確定癸酸鈉/赤芍萜苷(3:1)效果最好;測定赤芍萜苷(300mg/kg)灌胃給藥后的大鼠體內(nèi)藥-時(shí)曲線,發(fā)現(xiàn)與癸酸鈉合用時(shí),芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷AUC(0-24h)分別增加了36.33%和28.18%,當(dāng)整合組分的藥動學(xué)后,赤芍萜苷組分的AUC(0-24h)增加了35.27%,說明吸收促進(jìn)劑的加入,可以提高赤芍萜苷組分的整體生物利用度。
【圖文】：

圖２．２赤芍１４個候選成分的三維結(jié)構(gòu)逡逑Ｆｉｇ邋２．２邋Ｔｈｒｅｅ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋１４邋ｃａｎｄｉｄａｔｅ邋ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ逡逑２．１．３．２結(jié)果

圖２．３含原配體的靶蛋白分子對接方法的驗(yàn)證逡逑
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2655299