【摘要】：目的本課題旨在篩選出人面子葉抗銅綠假單胞桿菌活性部位,并對其活性部位進(jìn)行系統(tǒng)分離、純化和鑒定,并將從活性部位分離得到的主要成分進(jìn)行抗銅綠假單胞桿菌活性評價,為下一步人面子葉抗菌機(jī)制的研究以及研制控制皮膚感染藥提供質(zhì)量控制依據(jù)。方法首先,將人面子葉粉碎后,80%乙醇加熱回流提取,采用系統(tǒng)溶劑法結(jié)合微量熱法進(jìn)行人面子葉抗銅綠假單胞桿菌活性部位篩選。其次,對篩選出的活性部位采用薄層色譜法、硅膠柱層析色譜法、MCI柱色譜法、ODS柱色譜法、凝膠柱色譜法(Sephadex LH-20)、半制備液相色譜法、高效液相色譜法(HPLC)和重結(jié)晶等多種方法進(jìn)行分離、純化,運用質(zhì)譜法(MS)、~1H NMR和~(13)C NMR波譜法等對所得到的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。最后,基于文獻(xiàn)調(diào)研,采用微量量熱法對所得主要化合物進(jìn)行抗銅綠假單胞桿菌活性評價。結(jié)果本研究選篩選出人面子葉抗銅綠假單胞桿菌的活性部位為乙酸乙酯部位,其半數(shù)抑制濃度(IC_(50))為18.06μg/mL。通過對人面子葉乙酸乙酯部位采用多種色譜法進(jìn)行分離、純化和富集得到21個化合物,主要利用質(zhì)譜和核磁等方法進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定得到19個化合物,分別為β-谷甾醇(β-sitosterol)(1)、沒食子酸(gallic acid)(2)、沒食子酸酰甲酯(methyl gallate)(3)、沒食子酸酰乙酯(ethyl gallate)(4)、(R)-六羥基聯(lián)苯二甲酸甲酯(dimethyl(R)-hexahydroxy diphenoate)(5)、對-二沒食子酸(p-digalloyl acid)(6)、間-二沒食子酸(m-digalloyl acid)(7)、對二沒食子酰甲酯(methyl-p-digallate)(8)、間二沒食子酰甲酯(methyl-m-digallate)(9)、對-二沒食子酰乙酯(ethyl-p-digallate)(10)、間二沒食子酰乙酯(ethyl-m-digallate)(11)、木犀草素(luteolin)(12)、槲皮素(quercetin)(13)、4H-1-Benzopyran-4-one,2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy-8-[1-(4-hydroxyphenyl)ethyl]-(14)、4H-1-Benzopyran-4-one,2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy-8-[1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)ethyl]-(15)、柏木雙黃酮(cupressuflavone)(16)、taxifolin-(4`→O→3```)-4```-methoxy-taxifolin(17)、槲皮素3-O-β乳糖(quercetin 3-O-β-glucopyranoside)(18)、槲皮素3-O-β乳糖(quercetin 3-O-β-galactopyranoside)(19)。首次從人面子葉中分離得到的19個化合物中,黃酮衍生物化合物14和15為首次作為天然產(chǎn)物從分離得到,二氫雙黃酮化合物17為新化合物,命名為taxifolin-(4`→O→3```)-4```-methoxy-taxifolin。對化合物兒茶素、表兒茶素、化合物12、化合物13、化合物18和化合物19進(jìn)行抗銅綠假單胞桿菌活性評價,發(fā)現(xiàn)除兒茶素和表兒茶素外,其余4個化合物均對銅綠假單胞桿菌具有體外抗菌活性,從抗菌活性強(qiáng)度來看,化合物12最強(qiáng),其抗銅綠假單胞桿菌活性次序為木犀草素槲皮素quercetin 3-O-β-glucopyranosidequercetin 3-O-β-galactopyranoside。結(jié)論通過對人面子葉活性部位(乙酸乙酯部位)的研究,主要得到酚酸和黃酮兩大類物質(zhì),進(jìn)一步厘清了人面子葉的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)。通過對主要化合物進(jìn)行抗銅綠假單胞桿菌活性評價研究,確定了木犀草素(luteolin)(12)和槲皮素(quercetin)(13)及其糖苷化合物對銅綠假單胞桿菌有較強(qiáng)的體外抗菌活性,為下一步利用人面子葉深入研究及研制抗菌藥物奠定基礎(chǔ)。
【圖文】：

銅綠假單胞桿菌正常生長代謝的產(chǎn)熱曲線（37℃）

成都中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文.2 人面子葉抗銅綠假單胞桿菌生長代謝的生物熱活性指紋圖譜37 ℃時，通過安瓿法測定人面子葉不同部位樣品作用下銅綠假單胞桿菌生謝的生物熱活性指紋圖譜，即產(chǎn)熱“功率-時間”（P-t）曲線，如圖 2。從圖以看出，當(dāng)樣品溶液加入到安瓿瓶中之后，細(xì)菌生長代謝的 D - E 段、第二的峰高及出峰時間呈現(xiàn)明顯的規(guī)律性變化，隨著受試樣品濃度的增加，產(chǎn)熱降低，與之對應(yīng)，出峰時間延長，表明人面子葉不同部位均對銅綠假單胞桿生長代謝有影響，，甚者，細(xì)菌整個生長代謝的基本形狀都發(fā)生變化或者幾近。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284;R285

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 舒希凱;段文娟;劉偉;耿巖玲;王曉;楊丙田;楊鵬;;芍藥花化學(xué)成分研究[J];中藥材;2014年01期

2 龔建英;廖美蘭;杜鈴;覃杰;何芳;;1年生人面子容器苗苗木質(zhì)量的分級研究[J];西部林業(yè)科學(xué);2011年02期

3 蘇秀芳;陳明蘭;農(nóng)克良;;超聲波輔助提取人面子葉總黃酮的工藝研究[J];中藥材;2010年12期

4 蘇秀芳;農(nóng)萬廷;;人面子葉提取物抑菌作用研究[J];中國藥房;2010年23期

5 蘇秀芳;;正交設(shè)計法提取人面子莖皮揮發(fā)油[J];江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年01期

6 蘇秀芳;張一獻(xiàn);黃錫山;;人面子根揮發(fā)油化學(xué)成分的研究[J];時珍國醫(yī)國藥;2009年04期

7 蘇秀芳;;人面子莖皮揮發(fā)油提取的優(yōu)選工藝[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年12期

8 蘇秀芳;梁振益;農(nóng)克良;;人面子葉揮發(fā)油化學(xué)成分的研究[J];中成藥;2008年10期

9 蘇秀芳;梁振益;張一獻(xiàn);;人面子莖皮揮發(fā)油化學(xué)成分的研究[J];時珍國醫(yī)國藥;2008年07期

10 余華;;人面子的繁育技術(shù)[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技;2008年02期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 侯海燕;中藥余甘子抗HBV活性成分研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2006年

本文編號：2655041