【摘要】：目的本課題旨在篩選出人面子葉抗銅綠假單胞桿菌活性部位,并對(duì)其活性部位進(jìn)行系統(tǒng)分離、純化和鑒定,并將從活性部位分離得到的主要成分進(jìn)行抗銅綠假單胞桿菌活性評(píng)價(jià),為下一步人面子葉抗菌機(jī)制的研究以及研制控制皮膚感染藥提供質(zhì)量控制依據(jù)。方法首先,將人面子葉粉碎后,80%乙醇加熱回流提取,采用系統(tǒng)溶劑法結(jié)合微量熱法進(jìn)行人面子葉抗銅綠假單胞桿菌活性部位篩選。其次,對(duì)篩選出的活性部位采用薄層色譜法、硅膠柱層析色譜法、MCI柱色譜法、ODS柱色譜法、凝膠柱色譜法(Sephadex LH-20)、半制備液相色譜法、高效液相色譜法(HPLC)和重結(jié)晶等多種方法進(jìn)行分離、純化,運(yùn)用質(zhì)譜法(MS)、~1H NMR和~(13)C NMR波譜法等對(duì)所得到的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。最后,基于文獻(xiàn)調(diào)研,采用微量量熱法對(duì)所得主要化合物進(jìn)行抗銅綠假單胞桿菌活性評(píng)價(jià)。結(jié)果本研究選篩選出人面子葉抗銅綠假單胞桿菌的活性部位為乙酸乙酯部位,其半數(shù)抑制濃度(IC_(50))為18.06μg/mL。通過對(duì)人面子葉乙酸乙酯部位采用多種色譜法進(jìn)行分離、純化和富集得到21個(gè)化合物,主要利用質(zhì)譜和核磁等方法進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定得到19個(gè)化合物,分別為β-谷甾醇(β-sitosterol)(1)、沒食子酸(gallic acid)(2)、沒食子酸酰甲酯(methyl gallate)(3)、沒食子酸酰乙酯(ethyl gallate)(4)、(R)-六羥基聯(lián)苯二甲酸甲酯(dimethyl(R)-hexahydroxy diphenoate)(5)、對(duì)-二沒食子酸(p-digalloyl acid)(6)、間-二沒食子酸(m-digalloyl acid)(7)、對(duì)二沒食子酰甲酯(methyl-p-digallate)(8)、間二沒食子酰甲酯(methyl-m-digallate)(9)、對(duì)-二沒食子酰乙酯(ethyl-p-digallate)(10)、間二沒食子酰乙酯(ethyl-m-digallate)(11)、木犀草素(luteolin)(12)、槲皮素(quercetin)(13)、4H-1-Benzopyran-4-one,2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy-8-[1-(4-hydroxyphenyl)ethyl]-(14)、4H-1-Benzopyran-4-one,2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy-8-[1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)ethyl]-(15)、柏木雙黃酮(cupressuflavone)(16)、taxifolin-(4`→O→3```)-4```-methoxy-taxifolin(17)、槲皮素3-O-β乳糖(quercetin 3-O-β-glucopyranoside)(18)、槲皮素3-O-β乳糖(quercetin 3-O-β-galactopyranoside)(19)。首次從人面子葉中分離得到的19個(gè)化合物中,黃酮衍生物化合物14和15為首次作為天然產(chǎn)物從分離得到,二氫雙黃酮化合物17為新化合物,命名為taxifolin-(4`→O→3```)-4```-methoxy-taxifolin。對(duì)化合物兒茶素、表兒茶素、化合物12、化合物13、化合物18和化合物19進(jìn)行抗銅綠假單胞桿菌活性評(píng)價(jià),發(fā)現(xiàn)除兒茶素和表兒茶素外,其余4個(gè)化合物均對(duì)銅綠假單胞桿菌具有體外抗菌活性,從抗菌活性強(qiáng)度來看,化合物12最強(qiáng),其抗銅綠假單胞桿菌活性次序?yàn)槟鞠菟亻纹に豵uercetin 3-O-β-glucopyranosidequercetin 3-O-β-galactopyranoside。結(jié)論通過對(duì)人面子葉活性部位(乙酸乙酯部位)的研究,主要得到酚酸和黃酮兩大類物質(zhì),進(jìn)一步厘清了人面子葉的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)。通過對(duì)主要化合物進(jìn)行抗銅綠假單胞桿菌活性評(píng)價(jià)研究,確定了木犀草素(luteolin)(12)和槲皮素(quercetin)(13)及其糖苷化合物對(duì)銅綠假單胞桿菌有較強(qiáng)的體外抗菌活性,為下一步利用人面子葉深入研究及研制抗菌藥物奠定基礎(chǔ)。
【圖文】：

銅綠假單胞桿菌正常生長(zhǎng)代謝的產(chǎn)熱曲線（37℃）

成都中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文.2 人面子葉抗銅綠假單胞桿菌生長(zhǎng)代謝的生物熱活性指紋圖譜37 ℃時(shí)，通過安瓿法測(cè)定人面子葉不同部位樣品作用下銅綠假單胞桿菌生謝的生物熱活性指紋圖譜，即產(chǎn)熱“功率-時(shí)間”（P-t）曲線，如圖 2。從圖以看出，當(dāng)樣品溶液加入到安瓿瓶中之后，細(xì)菌生長(zhǎng)代謝的 D - E 段、第二的峰高及出峰時(shí)間呈現(xiàn)明顯的規(guī)律性變化，隨著受試樣品濃度的增加，產(chǎn)熱降低，與之對(duì)應(yīng)，出峰時(shí)間延長(zhǎng)，表明人面子葉不同部位均對(duì)銅綠假單胞桿生長(zhǎng)代謝有影響，，甚者，細(xì)菌整個(gè)生長(zhǎng)代謝的基本形狀都發(fā)生變化或者幾近。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284;R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2655041