【摘要】：目的:利用體外培養(yǎng)的人胚肺成纖維細(xì)胞(MRC-5),探究中藥黃芩提取物黃芩素是否具有抗水痘-帶狀皰疹病毒(Varicella Zoster Virus,VZV)感染的作用。方法:首先制備VZV感染人胚肺成纖維細(xì)胞(MRC-5)模型,依據(jù)Read-Muench法計(jì)算TCID50,以確定VZV的毒力,采用四甲基偶氮唑鹽比色(MTT)法和細(xì)胞觀察法確定實(shí)驗(yàn)藥物黃芩素和陽(yáng)性對(duì)照藥阿昔洛韋(Acyclovir,ACV)的最大無(wú)毒濃度TC_0和最小有效濃度MEC,以有效濃度為加藥劑量,將實(shí)驗(yàn)分為四組:空白對(duì)照組、VZV接種組、VZV+藥物黃芩素實(shí)驗(yàn)組、陽(yáng)性對(duì)照阿昔洛韋組。在給藥方式,細(xì)胞因子,病毒核酸,蛋白表達(dá)四個(gè)方面對(duì)黃芩素體外抗VZV作用進(jìn)行評(píng)估。首先進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察法對(duì)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)觀察,分別通過(guò)先接毒后加藥,藥和毒同時(shí)加入兩種給藥途徑進(jìn)行接毒加藥并連續(xù)觀察五天,初步判斷黃芩素對(duì)VZV是否具有抑制作用,與陽(yáng)性對(duì)照ACV組、單獨(dú)VZV組、空白對(duì)照組比較,觀察不同組間細(xì)胞狀態(tài)的差異;收集不同組細(xì)胞上清液,通過(guò)測(cè)定細(xì)胞因子IFN-β(β干擾素)、FGF(細(xì)胞生長(zhǎng)因子)的濃度進(jìn)行比較分析,根據(jù)不同組細(xì)胞的細(xì)胞因子濃度差異判斷黃芩素以及陽(yáng)性對(duì)照藥物對(duì)VZV的抑制作用;通過(guò)實(shí)時(shí)熒光PCR(Real Time Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)各組細(xì)胞的病毒拷貝數(shù),進(jìn)行各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞病毒拷貝數(shù)差異比較分析;用蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)比較不同組VZV重要蛋白gE(glycoprotein E)的表達(dá)情況,對(duì)各組VZV gE測(cè)定的灰度值進(jìn)行差異分析,綜合分析以上各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果,比較分析黃芩素是否具有體外抗VZV作用并對(duì)其效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果:黃芩素用藥的最大無(wú)毒濃度和最小有效濃度分別100μg/ml和25μg/ml,黃芩素藥物治療指數(shù)與阿昔洛韋相同。通過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)黃芩素實(shí)驗(yàn)組、陽(yáng)性對(duì)照阿昔洛韋組細(xì)胞的細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect,CPE)約為20%,只接毒實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞逐漸呈現(xiàn)皺縮狀態(tài)并發(fā)生特征性葡萄串珠樣病變,CPE約為80%;不同給藥方式對(duì)VZV的抑制作用無(wú)明顯差異。藥物黃芩素組、陽(yáng)性對(duì)照阿昔洛韋組所收集的細(xì)胞上清液中細(xì)胞因子IFN-β和FGF濃度接近,且分別高于VZV接種組細(xì)胞因子濃度;結(jié)果顯示,VZV接種組DNA拷貝數(shù)與其他組相比增長(zhǎng)迅速;VZV接種組細(xì)胞內(nèi)的VZV gE含量高于黃芩素實(shí)驗(yàn)組以及陽(yáng)性對(duì)照阿昔洛韋組。結(jié)論:黃芩素具有體外抗VZV感染人胚肺成纖維的作用,在細(xì)胞因子層面黃芩素與阿昔洛韋作用效果相似,在核酸和蛋白表達(dá)方面,阿昔洛韋作用效果略強(qiáng)于黃芩素。
【圖文】：

圖 1 不同給藥方式對(duì) MRC-5 形態(tài)影響觀察可以看出，黃芩素在體外對(duì) VZV 具有一定的抑制作用。兩種不同給藥途徑對(duì)細(xì)胞病變程度影響差別不大。接毒加藥后連續(xù)觀察細(xì)胞五天，只接毒組細(xì)胞逐漸出現(xiàn)葡萄串珠樣病變，，每孔 CPE 約有 80%；黃芩素實(shí)驗(yàn)組和 ACV 陽(yáng)性對(duì)
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2654974