發(fā)布時間：2020-05-07 22:27

【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?解剖學(xué)肝臟為機(jī)體重要的消化代謝器官,與中醫(yī)學(xué)“脾主運(yùn)化”的功能相關(guān)性很高,“運(yùn)化”其中包括運(yùn)化水濕的功能,AQPs可控制水在細(xì)胞的進(jìn)出,故肝臟AQPs的功能與中醫(yī)學(xué)“健脾利濕”、“疏導(dǎo)水液”息息相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)通過對濕阻中焦證大鼠肝臟內(nèi)AQP-1和AQP-4的分布、定量、活性及調(diào)控方式的系統(tǒng)研究,探究濕阻中焦證對AQP-1和AQP-4的影響,以及平胃散是否通過影響AQPs的表達(dá)分布來調(diào)控水液代謝狀態(tài),揭示濕阻中焦證引起細(xì)胞水液代謝失衡的部分分子機(jī)制和平胃散在調(diào)控細(xì)胞跨膜水轉(zhuǎn)運(yùn)方面的作用靶點(diǎn)。其中選擇AQP-1、AQP-4作為研究的原因是:前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)AQP-1、AQP-4在肝、肺、腎、胃腸道都有表達(dá),為共同表達(dá)的AQPs,且這幾個臟器與水液代謝密切相關(guān),因?yàn)槠渌K器前期都有研究~([1]),此次選擇肝臟內(nèi)AQP-1和AQP-4研究以期達(dá)到多臟器共同評價的目的。故為了研究AQPs的表達(dá)規(guī)律以及濕阻中焦對AQPs的影響,此次研究特別選擇這兩個蛋白進(jìn)行探究。實(shí)驗(yàn)方法:辨證論治中,“濕阻中焦證”動物模型選用20天成熟的大鼠造模,再檢測大鼠胃殘留率和腸推進(jìn)率,然后檢測:1.實(shí)施化學(xué)比色法檢測確定肝臟鈉離子-鉀離子-三磷酸腺苷酶活性,2.實(shí)施間苯三酚法檢測確定D-木糖的相關(guān)含量,3.實(shí)施酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測定肝組織中AQP-1、AQP-4含量,4.實(shí)施平均光密度測定法,免疫組織化學(xué)SP法,PCR和AQPs磷酸化法測定肝組織中AQP-1和AQP-4的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1建立“濕阻中焦證”大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?(1)一般觀察現(xiàn)象:模型組每只大鼠的體重均有顯著減輕,食物攝入量和飲水量顯著降低,精神狀態(tài)差。(2)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測:動物模型組大鼠胃部食物代謝不通暢,排不凈,血清D-木糖含量下降,鈉離子-鉀離子-三磷酸腺苷酶活性下降。(3)用平胃散對模型組大鼠給予藥物治療:模型組大鼠的食物攝入量、飲水?dāng)z入量、個體體重、胃內(nèi)殘留率、腸內(nèi)推進(jìn)率,血清D-木糖攝入量和鈉離子-鉀離子-三磷酸腺苷酶活性均有顯著變化,因此可知,動物實(shí)驗(yàn)“濕阻中焦證”大鼠模型的制造具有科學(xué)真實(shí)性。2解剖學(xué)肝臟內(nèi)AQP-1、AQP-4的含量(1)動物實(shí)驗(yàn)造模完成后,與空白組對照比較分析;動物模型組的大鼠AQPs含量降低,即肝臟AQP-1,AQP-4和鈉離子,鉀離子,三磷酸腺苷降低。(2)用藥物平胃散對大鼠治療后,平胃散治療組大鼠AQPs水平與自然恢復(fù)組相比較,其有所增加,即肝臟AQP1,AQP4和鈉離子,鉀離子,三磷酸腺苷酶水平升高。(3)與模型組比較,經(jīng)過自然恢復(fù)后,大鼠肝臟AQP-1在自然恢復(fù)組含量上升,大鼠AQPs肝臟鈉離子,鉀離子,三磷酸腺苷酶在自然恢復(fù)組含量下降。3解剖學(xué)肝臟內(nèi)AQP-1,AQP-4蛋白的表達(dá)分布(1)動物實(shí)驗(yàn)造模完成后,與空白組相比分析,動物模型組的大鼠AQPs表達(dá)提高,即肝臟AQP-1,AQP-4表達(dá)提高。(2)用藥物平胃散對大鼠治療后,平胃散治療組大鼠AQPs與自然恢復(fù)組相比較,其蛋白表達(dá)有明降低,即肝臟AQP-1,AQP-4表達(dá)下降。(3)與模型組比較,通過自然恢復(fù)后,大鼠肝臟AQP-1在自然恢復(fù)組表達(dá)提高,大鼠AQP-4在自然恢復(fù)組表達(dá)下調(diào)。實(shí)驗(yàn)結(jié)論(1)平胃散能夠改善解剖學(xué)肝臟內(nèi)AQP-1、AQP-4的蛋白表達(dá)和含量的分布水平,可以調(diào)劑鈉離子,鉀離子,三磷酸腺苷酶活性。(2)平胃散可以調(diào)控機(jī)體能量代謝和水液代謝輸布,這或許是平胃散具有燥濕運(yùn)脾的作用機(jī)理之一。(3)濕阻中焦證模型既可以影響機(jī)體能量代謝,還可以影響肝臟內(nèi)AQP-1和AQP-4的蛋白含量和蛋白表達(dá)情況,這也是動物實(shí)驗(yàn)“濕阻中焦證”模型大鼠機(jī)體內(nèi)津液代謝紊亂的原理。
【圖文】：

大鼠造模箱

造模大鼠
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2653641