【摘要】：目的:探討青藤堿(SIN)對紫杉醇(PT)所致的病理性疼痛及其抗腫瘤效應(yīng)的影響,為SIN的開發(fā)利用和PT的臨床合理使用提供提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.為考察SIN單次給藥對PT引起的神經(jīng)病理性疼痛的影響,將45只SD大鼠(200±20 g)隨機(jī)分為5組(每組9只):對照組(A組),PT組(B組),PT+SIN 10 mg/kg組(C組),PT+SIN 20 mg/kg組(D組),PT+SIN 40 mg/kg組(E組)。B、C、D、E組大鼠在第1、3、5和7 d分別腹腔注射PT(2 mg/kg,每天1次)制備神經(jīng)病理性疼痛模型,A組大鼠注射等體積溶媒。第9 d,C、D、E組大鼠分別腹腔注射SIN 10、20和40 mg/kg(每天1次),A、B組大鼠分別腹腔注射等體積生理鹽水。采用機(jī)械刺激法和熱刺激法分別在第-1 d、8 d和第9 d注射SIN后的0、60、180、240 min測定大鼠機(jī)械刺激縮足閾值(MWT)和熱刺激縮足潛伏期(TWL)。2.為考察SIN多次給藥對PT引起的神經(jīng)病理性疼痛的影響,將40只小鼠(20±2 g)隨機(jī)分為4組(每組10只):對照組(A組),PT組(B組),PT+SIN 40 mg/kg組(C組),PT+SIN 80 mg/kg組(D組)。B、C、D組小鼠在第1、3、5和7 d分別腹腔注射PT(4 mg/kg,每天1次),A組小鼠注射等體積溶媒。另外,在第1至15 d,C、D組小鼠分別腹腔注射SIN 40和80 mg/kg(每天1次),A、B組小鼠分別腹腔注射等體積生理鹽水。采用機(jī)械刺激法和熱刺激法分別分別從-1 d開始直至第16 d每兩天測定一次小鼠MWT和TWL。3.為考察SIN對PT抗腫瘤效應(yīng)的影響及其機(jī)制,首先采用MTT法檢測不同濃度的SIN和PT分別單獨(dú)作用24、48和72 h后對胰腺癌BXPC3細(xì)胞活力的影響;然后將SIN和PT按一定比例聯(lián)合作用于胰腺癌BXPC3細(xì)胞48h,測定其抑制率和聯(lián)合指數(shù)(Combined Index,CI);最后采用蛋白免疫印跡法測定SIN和PT分別單獨(dú)和聯(lián)合作用于胰腺癌BXPC3細(xì)胞后AKT和mTOR表達(dá)及其磷酸化水平的變化。結(jié)果:1.SIN單次給藥對PT引起的大鼠神經(jīng)病理性疼痛的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與對照組比較,PT組的MWT和TWL在注射PT后明顯降低,具有顯著性差異(p0.01);與PT組比較,PT+SIN 10 mg/kg組各時間點(diǎn)的MWT和TWL均沒有明顯差別,而PT+SIN 20 mg/kg組和PT+SIN 40 mg/kg組的MWT和TWL在注射SIN后均明顯增加(p0.05或p0.01),且PT+SIN 40 mg/kg組的MWT增加的幅度和持續(xù)的時間均明顯高于PT+SIN 20 mg/kg組。2.SIN多次給藥對PT引起的小鼠神經(jīng)病理性疼痛的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與對照組比較,PT組的MWT和TWL分別從第4d和第8 d開始降低,第10 d至16 d均具有顯著性差異(p0.01或p0.05)。與PT組比較,PT+SIN 40 mg/kg和PT+SIN 80 mg/kg組的MWT分別從第4d開始增加,第4 d至16 d均具有顯著性差異(p0.01),而TWL分別從第8 d開始增加,第10 d至16 d均具有顯著性差異(p0.01);PT+SIN 40 mg/kg組和PT+SIN 80 mg/kg組的MWT和TWL均沒有隨著時間的延長而降低。3.SIN對PT抗腫瘤效應(yīng)的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:不同濃度的SIN(0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 mmol/L)和不同濃度的PT(10、20、40、80、160 nmol/L)分別作用24、48及72 h后對胰腺癌BXPC3細(xì)胞增殖均出現(xiàn)抑制作用;SIN和PT按一定濃度比例(25000∶1)聯(lián)用對胰腺癌BXPC3細(xì)胞增殖的抑制作用明顯高于單用SIN或PT。不同濃度的PT(10、20、40、80、160 nmol/L)聯(lián)用SIN(1.5 mmol/L)的抑制率明顯高于單用PT,產(chǎn)生相同抑制率時聯(lián)用SIN所需的PT濃度明顯低于單用PT。無論SIN和PT單用還是聯(lián)用,p-AKT和p-mTOR的表達(dá)水平均顯著性降低(p0.05 vs control);PT與SIN聯(lián)用后p-AKT和p-mTOR表達(dá)水平均明顯低于單用PT(p0.05 vs PT)。結(jié)論:1.SIN單次給藥可緩解PT誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛,其鎮(zhèn)痛效應(yīng)和持續(xù)時間呈現(xiàn)劑量依賴性,但鎮(zhèn)痛作用持續(xù)時間不長。2.SIN多次給藥能產(chǎn)生持續(xù)平穩(wěn)地鎮(zhèn)痛作用,有效緩解紫杉醇引起的病理性疼痛而不產(chǎn)生耐受性。3.PT與SIN聯(lián)用產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤效應(yīng),聯(lián)用SIN可減少PT的用量而不改變其抗腫瘤效應(yīng),其機(jī)制可能與其抑制AKT/mTOR信號通路有關(guān)。
【圖文】：

圖 1 青藤堿對紫杉醇引起的大鼠機(jī)械刺激縮足閾值（MWT）的影響（注：#p<0.05,##p<0.01 VS control；*p<0.05,**p<0.01, VS PT）。1.2 青藤堿單次給藥對紫杉醇引起的大鼠熱刺激痛的影響為進(jìn)一步證實(shí)青藤堿單次給藥可緩解紫杉醇引起的疼痛反應(yīng)，接下來采用熱刺激法測定了紫杉醇引起的疼痛反應(yīng)以及青藤堿的鎮(zhèn)痛效果。熱刺激痛閾值測定結(jié)果顯示，PT 組大鼠的 TWL 在第 8 d 和第 9 d 均明顯降低，與 control 組比較具有顯著性差異（圖 2 A，p<0.01），表明紫杉醇誘導(dǎo)疼痛模型成功。與 PT 組比較，PT + SIN 10 mg/kg 組大鼠各時間點(diǎn)的 TWL 均沒有明顯差別（圖 2 B）；而PT + SIN 20 mg/kg 組大鼠的 TWL 在注射 SIN 后 120 min 明顯增加（圖 2 C，p<0.01），180 min 后不再增加；PT + SIN 40 mg/kg 組在注射 SIN 后 120 和 180 min的 MWT 均明顯增加，且在 120 min 達(dá)峰值，240 min 后不再增加（圖 2 D，p<0.05或 p<0.01）。PT + SIN 20 mg/kg 組與 PT + SIN 40 mg/kg 組大鼠的 TWL 均在注射 SIN 后 120 min 出現(xiàn)峰值，但峰值的幅度沒有明顯差別。但令人意外的是，PT+ SIN 20 mg/kg 組與 PT + SIN 40 mg/kg 組在注射 SIN 后第 60 和 240min 的 TWL

圖 2 青藤堿對紫杉醇引起的大鼠熱痛縮足閾值（TWL）的影響（注：#p<0.05,##p<0.01 VS control；*p<0.05,**p<0.01 VS PT）。2 青藤堿多次給藥對紫杉醇引起的神經(jīng)病理性痛的影響由圖 1 和圖 2 可知，青藤堿單次給藥可緩解紫杉醇引起的神經(jīng)病理性痛，，但鎮(zhèn)痛作用持續(xù)時間不長。為考察 SIN 多次給藥是否能持續(xù)緩解 PT 引起的神經(jīng)病理性疼痛，本實(shí)驗(yàn)采用小鼠在第 1、3、5、7 d 分別腹腔注射 PT（4 mg/kg，每天1 次）制備神經(jīng)病理性疼痛模型，在第 1 至 15 d 連續(xù)腹腔注射 SIN（40 或 80 mg/kg，每天 1 次），然后分別從－1 d 開始每兩天測定一次小鼠 MWT 值和 TWL 值，直至第 16 d。給藥時間和測定痛閾時間如表 2 所示。表 2 紫杉醇（PT）造模和青藤堿（SIN）多次給藥及痛閾測定時間表實(shí)驗(yàn)時間（d） －1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16腹腔注射 PT + + + +
【學(xué)位授予單位】：湖北科技學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 銀聯(lián)飛;韋婷婷;黃容容;楊璨瑜;蘇盈;韋山;沈讓;賓曉蕓;;紫杉醇誘導(dǎo)大鼠神經(jīng)病理性疼痛模型的建立[J];右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2015年03期

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3 劉愛華;;抗腫瘤藥紫杉醇的臨床應(yīng)用及不良反應(yīng)[J];中國傷殘醫(yī)學(xué);2013年08期

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本文編號：2653201