【摘要】：目的:研究化痰活血解毒方對LPS誘導的RASMC分泌炎癥因子、增殖、遷移、凋亡、表型轉(zhuǎn)化的影響及其機制是否受MAPKs信號通路的調(diào)節(jié)。方法:1.含藥血清的制備:選取16只2.5±0.53彽腟D日本大耳白兔,隨機分為四組:瑞舒伐他汀組(RS,2.5mg/kg/d)、化痰活血解毒方低劑量組(ZD,17.2mg/kg/d)、化痰活血解毒方高劑量組(ZG,34.4mg/kg/d)和空白組(Control,同等體積的生理鹽水),連續(xù)灌胃7天,末次給藥3小時腹主動脈取血、取上清,過濾、滅活,-80℃冰箱儲存?zhèn)溆谩?.實驗分組:本實驗共分為5組:空白組、LPS組、LPS+瑞舒伐他汀組、LPS+化痰活血解毒方低劑量組、LPS+化痰活血解毒方高劑量組。3.MTT法檢測LPS對RASMC增殖的影響。4.MTT法檢測化痰活血解毒方對LPS誘導的RASMC增殖的干預作用。5.ELISA法檢測化痰活血解毒方對LPS誘導的RASMC分泌炎癥因子及TIMP-1表達的作用。6.流式細胞儀檢測化痰活血解毒方對RASMC凋亡的影響。7.Transwell小室檢測化痰活血解毒方對LPS誘導的RASMC遷移的作用。8.RT-PCR和Weston blotting檢測RASMC中MAPKs信號通路相關基因和蛋白(p38MAPK、ERK、JNK)、主要表型標志基因和蛋白(α-SM-actin、OPN)及相關凋亡基因和蛋白(caspase-3,Bax,Bcl-2)的表達水平。結果:1.LPS對RASMC生長及增殖的影響:0.01、0.1、0.5、1、5、10μg/ml濃度的LPS作用RASMC 6、12、24、48h細胞活力均顯著增強(P0.05);100μg/ml濃度的LPS作用6、12、24h細胞活力上升(P0.05),但作用48h細胞活力顯著下降(P0.05)。0.5μg/ml濃度的LPS作用24h的促增殖能力最顯著(P0.05)。2.化痰活血解毒方對LPS作用下RASMC增殖活性的影響:10%、20%、40%濃度的瑞舒伐他汀和高劑量化痰活血解毒方作用24、48h均能顯著抑制LPS的促增殖作用(P0.05),二者之間無顯著差異(P0.05);10%濃度的化痰活血解毒方低劑量組作用24h及20%、40%濃度的化痰活血解毒方低劑量組作用24、48h均可以抑制LPS的促增殖作用(P0.05),但顯著弱于瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方高劑量組(P㩳0.05)。3.化痰活血解毒方對LPS誘導RASMC分泌炎癥因子的干預作用:與空白組相比,LPS組TNF-α、IL-6、MCP-1、MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1的比例顯著升高、TIMP-1水平顯著降低(P0.05)。與LPS組相比,瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方低劑量組、化痰活血解毒方高劑量組TNF-α、IL-6、MCP-1、MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1的比例顯著降低,TIMP-1水平顯著升高(P0.05)。瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方低劑量組間TNF-α水平無顯著差異(P0.05),瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方低劑量組TNF-α水平顯著高于化痰活血解毒方高劑量組(P0.05);瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方低劑量組、化痰活血解毒方高劑量組三者之間IL-6水平無顯著差異(P0.05);化痰活血解毒方高劑量組MCP-1水平顯著低于化痰活血解毒方低劑量組(P0.05),瑞舒伐他汀組MCP-1水平顯著低于化痰活血解毒方低劑量組、化痰活血解毒方高劑量組(P0.05);瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方低劑量組間MMP-9水平無顯著差異(P0.05),化痰活血解毒方高劑量組MMP-9水平顯著低于瑞舒伐他汀組(P0.05),化痰活血解毒方低劑量組、化痰活血解毒方高劑量組間MMP-9水平無顯著差異(P0.05);瑞舒伐他汀組TIMP-1水平顯著高于化痰活血解毒方低劑量組、化痰活血解毒方高劑量組(P0.05),化痰活血解毒方高劑量組TIMP-1表達水平顯著低于化痰活血解毒方低劑量組(P0.05);瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方低劑量組、化痰活血解毒方高劑量組之間MMP-9/TIMP-1的比例無顯著差異(P0.05)。4.化痰活血解毒方對LPS作用下RASMC凋亡的影響:與空白組比較,LPS組RASMC凋亡率顯著降低(P0.05);與LPS組比較,瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方低劑量組、化痰活血解毒方高劑量組的凋亡率顯著升高(P0.05);瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方高劑量組間的凋亡率無顯著差異(P0.05),瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方高劑量組間的凋亡率顯著高于化痰活血解毒方低劑量組(P0.05)。5.化痰活血解毒方對LPS誘導下RASMC遷移能力的影響:與空白組比較,LPS組的RASMC遷移能力顯著提高(P0.05);與LPS組比較,瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方低劑量組、化痰活血解毒方高劑量組RASMC的遷移能力均顯著降低(P0.05);瑞舒伐他汀組與化痰活血解毒方高劑量組間的遷移能力無顯著差異(P0.05),瑞舒伐他汀組與化痰活血解毒方高劑量組的遷移能力顯著高于化痰活血解毒方低劑量組(P0.05)。6.化痰活血解毒方對RASMC表型轉(zhuǎn)化的影響:與空白組比較,LPS組α-SM-actin mRNA和蛋白的表達減少(P0.05),OPNmRNA和蛋白表達升高(P0.05);與LPS組比較,瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方低劑量組、化痰活血解毒方高劑量組α-SM-actin mRNA和蛋白的表達升高(P0.05)和OPNmRNA和蛋白表達減少(P0.05);瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方高劑量組抑制RASMC表型變化無顯著差異(P0.05),化痰活血解毒方低劑量組抑制RASMC表型變化弱于瑞舒伐他汀組與化痰活血解毒方高劑量組(P0.05)。7.化痰活血解毒方對LPS誘導RASMC中ERk、p38MAPK、JNKmRNA及p-ERK1/2、p-p38MAPK、p-JNK蛋白表達的影響:與空白組比較,LPS組E RK1/2、JNK、p38MAPKmRNA及p-ERK1/2、p-p38MAPK、p-JNK蛋白的表達水平顯著升高(P0.05);與LPS組比較,瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方低劑量組、化痰活血解毒方高劑量組ERK1/2、JNK、p-38MAPKmRNA及p-ERK1/2、p-p38MAPK、p-JNK蛋白的表達水平顯著降低(P0.05);瑞舒伐他汀組與化痰活血解毒方高劑量組之間ERK、JNK、p38MAPKmRNA及p-ERK1/2、p-JNK蛋白的表達水平無顯著差異(P0.05),化痰活血解毒方低劑量組ERK、JNK、p38MAPKmRNA及p-ERK1/2、p-JNK蛋白的表達水平顯著高于瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方高劑量組(P0.05);化痰活血解毒方高劑量組p-p38MAPK蛋白的表達水平顯著低于瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方低劑量組(P0.05),化痰活血解毒方低劑量組p-p38MAPK蛋白水平顯著高于瑞舒伐他汀組(P0.05)。8.化痰活血解毒方對LPS誘導的RASMC Bax、caspase-3、Bcl-2mRNA和蛋白的表達的影響:與空白組比較,LPS組促凋亡蛋白Bax、caspase-3mRNA和蛋白的表達降低(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2mRNA和蛋白表達升高;與LPS組比較,瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方低劑量組、化痰活血解毒方高劑量組組促凋亡蛋白bax、caspase3mRNA和蛋白的表達水平升高(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2mRNA和蛋白表達降低(P0.05)。結論:1.LPS可明顯促進RASMC的增殖、遷移、表型轉(zhuǎn)化并可誘導RASMC分泌TNF-α、IL-6、MCP-1、MMP-9及降低TIMP-1的表達。2.化痰活血解毒方可顯著降低LPS誘導的RASMC分泌炎癥因子的水平及上調(diào)TIMP-1的表達,誘導RASMC凋亡、抑制RASMC的增殖、遷移及表型轉(zhuǎn)化。3.化痰活血解毒方干預炎癥反應,抑制RASMC的增殖、遷移和表型轉(zhuǎn)化可能與抑制MAPKs信號通路有關。4.化痰活血解毒方可以顯著促進LPS誘導的RASMC凋亡可能是通過抑制ERK信號通路,下調(diào)Bcl-2、上調(diào)Bax、caspase-3蛋白表達實現(xiàn)的。
【圖文】：

血清、⑤LPS+化痰活血解毒方高劑量組：RASMC+0.5μg/ml LPS+40%高劑量化痰活血解毒方含藥血清圖1 技術路線圖2.6 MTT 法檢測 LPS 對 RASMC 增殖的影響及化痰活血解毒方的干預作用2.6.1 細胞分組（1）LPS 的濃度、時間梯度組：①對照組：RASMC+10%FBS 培養(yǎng)基、②LPS 刺激組：RASMC+10%FBS 培養(yǎng)基+不同濃度 LPS(0.1μg/ml、0.01μ g/ ml、 0.5μ g/ ml、 1μ g/ ml、 10μ g/ ml、 100μ g/ ml），各組的 LPS作用時間分別為6h、12h、24h、48h。（2）含藥血清干預組：0.5μg/ml LPS 誘導 RASMC 24h 后分別加入5%、 10%、 20%、 40%濃度的空白血清、瑞舒伐他汀含藥血清、低劑量化痰活血解毒方含藥血清、高劑量化痰活血解毒方含藥血清，分別干預24h、48h。

圖 2 LPS 對 RASMC 活力的影響0μg/ml 濃度的 LPS 比較，aP＜0.05；與 0.5μg/ml 濃度bP＜0.05活血解毒方對 LPS 促 RASMC 增殖的干預作用μ g/ ml 濃度的 LPS 誘導 RASMC 24h 后加入 5%、10%、20空白血清、瑞舒伐他汀血清、化痰活血解毒方血清作用24果顯示：與空白組比較，LPS 作用24、48h 均可促進 RAS0.05）。與 LPS 組相比，5%濃度的含藥血清均不能抑制 的增殖作用（ P＞ 0.05），，而 10%濃度的瑞舒伐他汀和高劑毒方均能抑制 LPS 對 RASMC 的增殖作用（P＜0.05），二差異（P＞0.05）。與 LPS 組比較，10%濃度的化痰活血解干預24h 能抑制 LPS 對 RASMC 的增殖，差異有統(tǒng)計學意但弱于瑞舒伐他汀組、化痰活血解毒方高劑量組（ P㩳 0.
【學位授予單位】：河南中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 張麗;;冠狀動脈支架內(nèi)再狹窄的研究進展[J];山東醫(yī)藥;2013年33期

2 房炎;于波;;支架內(nèi)新生動脈粥樣硬化斑塊的研究進展[J];國際心血管病雜志;2013年01期

3 趙心彬;倪敏;陶霞;;他汀類藥物多效藥理作用及其機制研究進展[J];藥學實踐雜志;2013年01期

4 王永霞;王彩歌;任琳琳;吳先杰;王幼平;朱明軍;;調(diào)脂通絡膠囊對心肌IRI大鼠炎癥反應的影響[J];中國實驗方劑學雜志;2013年01期

5 楊征;邱敏;郭曉華;李俊萍;陳麗珠;孫淑艷;;瓜蔞皮提取物對PDGF-BB所致血管平滑肌細胞增殖周期的影響[J];中國動脈硬化雜志;2012年10期

6 趙韌;張建華;徐巖;;骨橋蛋白在冠心病中作用的研究進展[J];心臟雜志;2011年02期

7 張舜;楊曉蕾;任國誠;;MCP-1、CCR2與動脈粥樣硬化研究進展[J];科技信息;2011年06期

8 劉章起;李春亮;鄧云;;冠狀動脈支架置入后炎癥因子和細胞因子水平與血管再狹窄的相關性[J];中國組織工程研究與臨床康復;2010年38期

9 韓明磊;王紹欣;王宏運;;TNF-α與急性心肌梗死患者PCI術后相關并發(fā)癥的關系[J];醫(yī)學綜述;2010年01期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張修澤;血清PCSK9水平在冠心病患者中的變化及其與LPS的相關性研究[D];石河子大學;2017年

2 譚艷美;脂多糖通過ERK1/2-PPARγ途徑上調(diào)adipophilin表達促進巨噬細胞炎癥因子分泌[D];南華大學;2016年

3 喻麗;不同fimA型牙齦卟啉單胞菌脂多糖對人臍動脈平滑肌細胞功能的影響[D];遵義醫(yī)學院;2016年

4 趙亞男;血漿miRNA-1、miRNA-21與冠狀動脈支架內(nèi)再狹窄關系的研究[D];天津醫(yī)科大學;2016年

5 張琳;運動經(jīng)PI3K/Akt和MAPK通路間平衡介導調(diào)控高血壓VSMC的表型轉(zhuǎn)換[D];北京體育大學;2016年

6 符美靈;SZ-21/VEGF/RAPA藥物洗脫支架的體外和動物實驗研究[D];重慶大學;2016年

7 范星;miRNA在頸動脈狹窄患者外周血中的動態(tài)表達及血管支架植入對其影響的實驗研究[D];西南醫(yī)科大學;2016年

8 成龍;水蛭酶解提取物抑制脂多糖誘導的大鼠血管平滑肌細胞ICAM-1、VCAM-1及MCP-1的表達[D];山東大學;2015年

9 李智燕;益氣活血化痰方抗細胞凋亡防治動脈粥樣硬化的機制研究[D];長春中醫(yī)藥大學;2015年

10 蔣凱;CD38缺失對LPS誘導巨噬細胞炎性因子表達和分泌的影響及其分子機制[D];南昌大學醫(yī)學院;2013年

本文編號：2653175