【摘要】：目的:觀察人參皂苷Rh1對人乳腺癌細胞MDA-MB-231和MCF-7增殖和侵襲能力的影響,并比較人參皂苷Rh1對兩種細胞系抑制作用強弱。探究人參皂苷Rh1對人乳腺癌細胞MDA-MB-231和MCF-7中DDIT3和HYAL1、PLD1三種基因表達的影響,驗證人參皂苷Rh1對乳腺癌的抑制作用并探討可能的作用靶點。材料與方法:人參皂苷Rh1分別作用于三陰型乳腺癌細胞MDA-MB-231和luminal A型型人乳腺癌細胞MCF-7,觀察其對兩種乳腺癌細胞的抑制作用,計算抑制率,通過Origin軟件得到半抑制濃度(IC50);根據(jù)IC50計算合理的最佳藥物濃度作用于細胞,采用MTT法檢測細胞的增殖能力;通過Transwell小室觀察細胞侵襲力;細胞成球實驗觀察細胞活性及增殖轉移能力;RT-PCR法檢測細胞中的DDIT3和HYAL1、PLD1的表達,探討這些基因在乳腺癌細胞中差異性表達對乳腺癌的增殖、轉移是否有調控作用,從而找到人參皂苷Rh1在乳腺癌中可能的作用靶點。結果:1.研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh1對人乳腺癌細胞MDA-MB-231、MCF-7均有抑制作用,其中人參皂苷Rh1對人乳腺癌細胞系MDA-MB-231的抑制作用較強,最大抑制率達到82.66%,IC50在0.59-0.64×10~(-3)mol/L之間,而MCF-7細胞的最大抑制率為80.46%,IC50在0.63-0.71×10~(-3)mol/L之間,IC50的數(shù)值越大反而抑制作用越弱。2.研究發(fā)現(xiàn)當人參皂苷Rh1濃度分別為250μM、500μM、750μM時對人乳腺癌細胞MDA-MB-231/MCF-7的最大抑制率分別為23.31%/18.93%、43.18%/39.53%、82.45%/80.39%,可見當人參皂苷Rh1濃度為750μM時對腫瘤細胞抑制作用最為明顯,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),而且隨著藥物作用時間的延長抑制作用也隨之增強,說明人參皂苷Rh1有明顯的濃度依賴性和時間依賴性。我們選擇人參皂苷Rh1濃度750μM時繪制細胞生長曲線,相同濃度的人參皂苷Rh1抑制MDA-MB-231細胞增殖作用強于MCF-7細胞,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.統(tǒng)計24小時穿過基底膜的細胞數(shù)目,結果顯示:MDA-MB-231實驗組(21±1.14)、MDA-MB-231對照組(85.6±2.18);實驗組與對照組相比差別有統(tǒng)計學意義(P0.05);MCF-7實驗組(25.7±1.25),MCF-7對照組(84.8±1.37),實驗組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。對比人參皂苷Rh1對MDA-MB-231細胞侵襲能力抑制率(75%)與對MCF-7細胞侵襲能力抑制率(69%)差異有統(tǒng)計學意義。4.本實驗發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh1對腫瘤細胞成球能力有影響,一周后拍照對比發(fā)現(xiàn)對照組細胞成球率明顯高于實驗組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。對比發(fā)現(xiàn)MDA-MB-231實驗組成球率較MCF-7實驗組低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。5.RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh1使兩種細胞中的DDIT3、HYAL1、PLD1基因差異表達,但只有HYAL1的低表達有統(tǒng)計學意義。結論:1.本實驗中人參皂苷Rh1對人乳腺癌細胞MDA-MB-231、MCF-7細胞活性均有抑制作用,其中人參皂苷Rh1對人乳腺癌細胞MDA-MB-231的抑制作用較強,IC50的數(shù)值在600-700μM之間。2.本實驗中人參皂苷Rh1有明顯的濃度依賴性和時間依賴性,當人參皂苷Rh1濃度750μM時對人乳腺癌細胞MDA-MB-231、MCF-7的增殖抑制作用最強,隨著藥物作用時間的延長抑制作用也隨之增強。相同濃度的人參皂苷Rh1抑制MDA-MB-231細胞增殖作用強于MCF-7細胞,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.本實驗中人參皂苷Rh1降低人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7細胞的活力,影響細胞的增殖和侵襲能力,對乳腺癌細胞MDA-MB-231和MCF-7的增殖和轉移有抑制作用,且對MDA-MB-231細胞的抑制作用強于MCF-7細胞。4.本實驗中人參皂苷Rh1對乳腺癌細胞MDA-MB-231和MCF-7的成球能力均有抑制作用,說明人參皂苷Rh1可能對乳腺癌細胞的干性有影響。5.基因HYAL1可能是人參皂苷Rh1抑制乳腺癌生物學行為的作用靶點。
【圖文】：

圖 1.不同濃度人參皂苷 Rh1 對細胞增殖抑制率 圖 2. 人參皂苷 Rh1750μM 時的細胞生長曲線.Transwell 實驗結果：人參皂苷 Rh1 濃度為 750μM 處理細胞，培養(yǎng) 24h 后實驗結果拍照并檢測侵襲數(shù)目果顯示：MDA-MB-231 實驗組（21±1.14）、MDA-MB-231 對照組（85.6±2.18）；組與對照組相比差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；MCF-7 實驗組（25.7±1.25），MC照組（84.8±1.37），實驗組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。對比人苷 Rh1 對 MDA-MB-231 細胞侵襲能力抑制率（75％）與對 MCF-7 細胞侵襲能力抑制69％）有差異，，且差異有統(tǒng)計學意義。下圖（圖 3、圖 4）對比了 MDA-MB-231 細胞未經人參皂苷 Rh1 作用與經人參皂苷 用后的細胞侵襲遷移能力，可以明顯的看出經人參皂苷 Rh1 作用后的細胞數(shù)量明顯，說明人參皂苷 Rh1 對人乳腺癌 MDA-MB-231 細胞的侵襲遷移能力有抑制作用。

圖 1.不同濃度人參皂苷 Rh1 對細胞增殖抑制率 圖 2. 人參皂苷 Rh1750μM 時的細胞生長曲線.Transwell 實驗結果：人參皂苷 Rh1 濃度為 750μM 處理細胞，培養(yǎng) 24h 后實驗結果拍照并檢測侵襲數(shù)目果顯示：MDA-MB-231 實驗組（21±1.14）、MDA-MB-231 對照組（85.6±2.18）；組與對照組相比差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；MCF-7 實驗組（25.7±1.25），MC照組（84.8±1.37），實驗組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。對比人苷 Rh1 對 MDA-MB-231 細胞侵襲能力抑制率（75％）與對 MCF-7 細胞侵襲能力抑制69％）有差異，且差異有統(tǒng)計學意義。下圖（圖 3、圖 4）對比了 MDA-MB-231 細胞未經人參皂苷 Rh1 作用與經人參皂苷 用后的細胞侵襲遷移能力，可以明顯的看出經人參皂苷 Rh1 作用后的細胞數(shù)量明顯，說明人參皂苷 Rh1 對人乳腺癌 MDA-MB-231 細胞的侵襲遷移能力有抑制作用。
【學位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

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本文編號：2653132