【摘要】：吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth.、石虎Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.officinalis(Dode)Huang或疏毛吳茱萸Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huang的干燥近成熟果實,為臨床常用中藥。吳茱萸配方顆粒是用符合炮制規(guī)范的吳茱萸飲片作為原料,經(jīng)現(xiàn)代制藥技術(shù)提取、濃縮、分離、干燥、制粒、包裝精制而成,它解決了傳統(tǒng)湯劑制備和使用不方便的問題,具有免煎易服、安全衛(wèi)生、攜帶方便等優(yōu)點。本研究采用液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)技術(shù)建立了吳茱萸配方顆粒中10種成分同時定量的分析方法,并采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法對其中4種生物堿類成分及檸檬苦素的肝細胞毒性作用進行研究,初步探討吳茱萸致肝毒性的物質(zhì)基礎(chǔ),為吳茱萸配方顆粒的質(zhì)量控制及評價提供參考,為其安全性評價提供先期的實驗依據(jù)。第一部分液質(zhì)聯(lián)用法同時測定吳茱萸配方顆粒中10種成分的含量目的:基于HPLC-MS技術(shù)建立一種高靈敏度的方法對吳茱萸配方顆粒中吳茱萸堿、吳茱萸次堿(Rut)、去氫吳茱萸堿、吳茱萸卡品堿、蘆丁、橙皮苷、金絲桃苷、檸檬苦素、咖啡酸、綠原酸10種成分進行同時定量研究。方法:色譜柱為Diamonsil C_(18)柱(150×4.6 mm,5μm);柱溫為40℃;流速為0.8 mL/min;進樣量為10μL;流動相為A-B(0.12%乙酸/1mmol/L乙酸銨-乙腈),梯度洗脫,梯度洗脫程序如下:0~6 min,85%A~72%A;6~10 min,72%A~32%A;10~11 min,32%A~10%A;11~22min,10%A;總分析時間為22 min;再快速返回初始比例A-B(85:15,V/V),運行10 min。采用多重反應(yīng)監(jiān)測(MRM)的掃描方式下正負離子同時監(jiān)測,離子噴霧電壓為5500和-4500 V,源溫度(TEM)為650℃,霧化氣(GS1,N2)為60 psi,輔助氣(GS2,N2)為65 psi,氣簾氣(N2)為25 psi。結(jié)果:10種被測成分的峰面積和濃度在一定濃度范圍內(nèi)均有良好的線性關(guān)系(r≥0.9954),日內(nèi)和日間精密度相對標準偏差(RSD)值分別小于2.48%和2.90%,24 h內(nèi)的穩(wěn)定性良好,平均回收率范圍為95.7%~104.6%。結(jié)論:該方法簡便快速、靈敏度高、專屬性好,可用于吳茱萸配方顆粒中10種成分的同時定量分析,為吳茱萸配方顆粒的質(zhì)量控制及評價提供科學依據(jù)。第二部分吳茱萸致肝毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)研究目的:探討吳茱萸中吳茱萸堿、吳茱萸次堿、去氫吳茱萸堿、吳茱萸卡品堿、檸檬苦素是否具有肝細胞毒性作用,探討吳茱萸致肝毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)。方法:人源肝癌HepG2細胞分別經(jīng)不同濃度的5種吳茱萸主要單體成分吳茱萸堿、吳茱萸次堿、去氫吳茱萸堿、吳茱萸卡品堿、檸檬苦素孵育24 h后,采用MTT法檢測藥物對HepG2細胞存活率的影響。結(jié)果:MTT法顯示,5~200μmol/L的吳茱萸堿、5~200μmol/L的吳茱萸次堿、50~200μmol/L的去氫吳茱萸堿、25~200μmol/L的吳茱萸卡品堿和10~200μmol/L的檸檬苦素對人肝癌HepG2細胞活力有明顯的抑制作用(P0.01或P0.05),且呈現(xiàn)較好的量效關(guān)系。結(jié)論:吳茱萸堿、吳茱萸次堿、去氫吳茱萸堿、吳茱萸卡品堿、檸檬苦素對HepG2細胞均有不同程度的毒性作用。
【圖文】：

27附 圖圖1 吳茱萸堿對HepG2細胞增殖的影響與對照組比，*P < 0.05，**P < 0.01Fig.1 The effects of evodiamine on the proliferation of HepG2 cellsvs control group，*P < 0.05，**P < 0.01圖2 吳茱萸次堿對HepG2細胞增殖的影響與對照組比，*P < 0.05，**P < 0.01Fig.2 The effects of rutaecarpin on the proliferation of HepG2 cellsvs control group，*P < 0.05

**P < 0.01圖2 吳茱萸次堿對HepG2細胞增殖的影響與對照組比，*P < 0.05，**P < 0.01Fig.2 The effects of rutaecarpin on the proliferation of HepG2 cellsvs control group，，*P < 0.05，**P < 0.01
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R286.0;R285

【參考文獻】

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本文編號：2651971