【摘要】：1研究背景放射治療是胸部惡性腫瘤常用的治療手段之一,肺是對(duì)射線(xiàn)中度敏感的器官,接受放射治療后不可避免的會(huì)對(duì)正常肺組織造成一定的損傷,包括早期的放射性肺炎和晚期的放射性肺纖維化。放射性肺炎的主要臨床表現(xiàn)有:咳嗽、咯痰、胸痛、發(fā)熱、乏力等。目前,關(guān)于放射性肺炎的發(fā)病機(jī)制尚不明確,存在多種假說(shuō),有靶細(xì)胞學(xué)說(shuō)、細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)學(xué)說(shuō)、自由基學(xué)說(shuō)等。放射性肺炎的治療常用的有糖皮質(zhì)激素、ACEI類(lèi)、抗氧化劑、其他藥物療法及干細(xì)胞療法等。近年來(lái)有學(xué)者研究證實(shí)自噬作為細(xì)胞的一種自我保護(hù)性機(jī)制,可以減輕射線(xiàn)對(duì)于正常組織的損傷,因此自噬在放射性肺炎中可能會(huì)起到一定的作用。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,放射線(xiàn)屬于火熱毒邪。本病的病機(jī)在于熱毒、陰虛、血瘀、氣虛等,往往相兼出現(xiàn)。導(dǎo)師多年的臨床經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為,本病早期主要是熱毒傷陰為主,應(yīng)以清熱養(yǎng)陰為治療原則,常用臨床經(jīng)驗(yàn)方“清肺益陰方”加減防治放射性肺炎,取得了較好的臨床療效。本研究以放射性肺炎大鼠為研究對(duì)象,圍繞AMPK介導(dǎo)的自噬通路,對(duì)導(dǎo)師經(jīng)驗(yàn)方“清肺益陰方”防治放射性肺炎的機(jī)制進(jìn)行初步探討。2研究目的通過(guò)觀察中藥“清肺益陰方”對(duì)放射性肺炎大鼠肺組織病理形態(tài)、肺系數(shù)、肺泡灌洗液中炎性因子的表達(dá)、自噬小體及自噬相關(guān)蛋白表達(dá)量的影響,探討本方在防治放射性肺炎的起效機(jī)制,為指導(dǎo)臨床用藥治療提供一定的理論依據(jù)。3研究方法3.1放射性肺炎大鼠模型的建立將大鼠用10%的水合氯醛按3ml/kg腹腔注射麻醉,平躺,四肢固定于自制木架,充分暴露胸部,用6MV-X線(xiàn)加速器,單次全胸照射16Gy,照射面積約為3.5cm X4.0cm(上至兩腋窩、下至胸骨劍突,其余部分用10cm厚鉛磚屏蔽),源靶距為100cm,劑量率250cGy/min�？瞻捉M大鼠在同等條件下肺部假照射OGy,實(shí)驗(yàn)組大鼠正常劑量全胸照射。3.2動(dòng)物給藥方法各組大鼠于照射后一天開(kāi)始給藥,每日1次,持續(xù)28d。每周稱(chēng)重三次,并根據(jù)體重情況調(diào)整給藥劑量,按1ml/l00g給藥�？瞻捉M:生理鹽水,1次/日灌胃;模型組:生理鹽水,1次/日灌胃;中藥組:107g/kg/d生藥藥液,1次/日灌胃;激素組:1-2周給予1.25mg/kg/d,第三周給予0.625mg/kg/d醋酸潑尼松龍水溶液灌胃給藥,第4周給予生理鹽水1次/日灌胃;中藥加激素組:1-2周予中藥+激素藥液(10.7g生藥+1.25mg潑尼松/kg/d),1次/日灌胃;3周起予中藥+激素藥液(10.7g 生藥+0.625mg潑尼松/kg/d),1次/日灌胃;4周時(shí)改予中藥(10.7.g/kg/d生藥藥液),1次/日灌胃。3.3肺組織病理切片觀察及ELISA法檢測(cè)肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α、TGF-β等炎性因子的表達(dá)量。3.4電鏡掃描觀察各組大鼠照射后14d肺組織細(xì)胞內(nèi)自噬小體的形成情況。3.5運(yùn)用Western-Blot法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3 II與LC3 I的比值、P62蛋白的表達(dá)及AMPK通路蛋白的表達(dá)。4研究結(jié)果4.1各組大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)觀察照射后4周放血處死大鼠,取出肺組織,HE染色后,空白組大鼠肺泡壁結(jié)構(gòu)完整,平滑肌厚度正常,未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變;照射組大鼠表現(xiàn)出不同程度的炎性改變,包括肺泡壁增厚,肺泡間隙變窄,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)滲出明顯,毛細(xì)血管充血等病理學(xué)改變。4.2炎性因子指標(biāo)檢測(cè)照射后4周放血處死大鼠,運(yùn)用支氣管肺泡灌洗術(shù)進(jìn)行大鼠全肺灌洗,收集灌洗液,離心取上清,運(yùn)用ELISA試劑盒進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果是照射組大鼠IL-6、TNF-α、TGF-β等的表達(dá)量均高于空白組,聯(lián)合用藥組在降低炎性因子表達(dá)量方面優(yōu)于單用中藥或單用激素組。4.3電鏡觀察自噬小體形成照射后28d取材,用電鏡液固定后,運(yùn)用電鏡掃描觀察到各組大鼠肺組織細(xì)胞內(nèi)均有自噬小體的形成,且同一視野下,聯(lián)合用藥組細(xì)胞內(nèi)自噬小體數(shù)量多于其他組。4.4自噬相關(guān)蛋白及AMPK通路的檢測(cè)照射后28d取材,運(yùn)用Western-Blot法檢測(cè)LC3II與LC3 I的比值、P62蛋白的表達(dá)量及AMPK蛋白的表達(dá),結(jié)果表明照射組大鼠肺組織細(xì)胞內(nèi)自噬程度收到了一定的抑制,中藥清肺益陰方、醋酸潑尼松龍及二者聯(lián)合用藥可以提高自噬程度,并且可以激活A(yù)MPK通路,聯(lián)合用藥組效果優(yōu)于單用中藥或單用激素。5研究結(jié)論中藥清肺益陰方可以減輕放射性肺炎大鼠炎癥程度,其起效機(jī)制可能是通過(guò)激活A(yù)MPK通路進(jìn)而增強(qiáng)大鼠肺組織內(nèi)細(xì)胞自噬的程度而實(shí)現(xiàn)的。
【圖文】：

ｌ逡逑Ｃ邐Ｍ邐Ｚ邐Ｊ邐Ｘ逡逑圖ｌ各組大鼠肺系數(shù)逡逑２．邋２肺組織病理學(xué)觀察ＨＥ染色及病理學(xué)評(píng)分逡逑ＨＥ染色后病理切片顯示：正常組大鼠肺組織支氣管及肺泡結(jié)構(gòu)正常，無(wú)炎癥逡逑改變；照射組均有不同程度的放射性肺炎的發(fā)生，表現(xiàn)為肺泡壁增厚、肺間隔變逡逑小，有較多中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，少部分有紅細(xì)胞浸潤(rùn)；給藥干預(yù)四周后，，中藥組、逡逑激素組、聯(lián)合用藥組肺組織病理學(xué)改變較模型對(duì)照組均有一定程度的減輕，見(jiàn)圖逡逑２，圖３，表３。逡逑

有較多中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，少部分有紅細(xì)胞浸潤(rùn)；給藥干預(yù)四周后，中藥組、逡逑激素組、聯(lián)合用藥組肺組織病理學(xué)改變較模型對(duì)照組均有一定程度的減輕，見(jiàn)圖逡逑２，圖３，表３。逡逑＿

本文編號(hào)：2652105