【摘要】：近幾十年來中國乃至全球糖尿病患病率迅速增加,糖尿病及其并發(fā)癥是造成患者死亡的最主要原因之一,嚴(yán)重威脅人類健康。糖尿病神經(jīng)病理性疼痛(diabetic neuropathic pain,DNP)是糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥之一,屬于慢性疼痛�，F(xiàn)有的醫(yī)療手段對于DNP不僅很難治愈,還有較大的副作用,所以亟待開發(fā)新型有效副作用少的治療藥物。鉤吻素子(koumine,KM)為藥用植物鉤吻(Gelsemium elegans)中含量最高的吲哚生物堿成分,本課題組研究發(fā)現(xiàn)鉤吻素子具有高效低毒抗DNP作用。為了深入探索鉤吻素子抗DNP的作用靶標(biāo)與作用途徑,本研究在鏈脲佐菌素(streptozocin,STZ)誘導(dǎo)的大鼠DNP模型上,觀察鉤吻素子抗DNP的作用與其抑制脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞M1極化的關(guān)聯(lián)規(guī)律;進(jìn)而闡釋鉤吻素子抑制小膠質(zhì)細(xì)胞M1極化作用的分子機(jī)制,明確其作用的分子通路以及關(guān)鍵效應(yīng)分子。主要研究內(nèi)容如下:本文采用單次腹腔注射STZ溶液(70 mg/kg)建立SD大鼠Ⅰ型DNP模型,研究發(fā)現(xiàn)灌胃給予鉤吻素子可以顯著減輕糖尿病大鼠的機(jī)械痛敏,提示鉤吻素子具有顯著的抗DNP的作用,并具有劑量依賴性。為了進(jìn)一步探究鉤吻素子抗大鼠DNP的作用是否與小膠質(zhì)細(xì)胞活化及M1極化有關(guān),而干擾素調(diào)節(jié)因子8(Interferon Regulatory Factor 8,IRF8)是調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞極化(激活態(tài))的關(guān)鍵效應(yīng)分子,因此本文運(yùn)用RT-q PCR和western blot方法來檢測大鼠脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞IRF8、小膠質(zhì)細(xì)胞活化標(biāo)志物iba-1及M1極化標(biāo)志物CD86、CD68、TNF-α和IL-1β等m RNA和蛋白的表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn),鉤吻素子可能通過下調(diào)IRF8的表達(dá)而抑制小膠質(zhì)細(xì)胞M1極化,降低致炎細(xì)胞因子CD86、CD68、TNF-α、IL-1β等的表達(dá),從而抗DNP。Jagged 1是Notch受體的重要配體之一,Jagged 1與Notch受體水平結(jié)合并激活Notch信號通路。為了探索鉤吻素子抗DNP的作用是否通過調(diào)控Notch信號通路實(shí)現(xiàn),本研究在大鼠Ⅰ型DNP模型上,以動(dòng)物痛閾為指標(biāo),觀察脊髓鞘內(nèi)注射Jagged 1對灌胃給予鉤吻素子鎮(zhèn)痛作用的可能拮抗作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn),鉤吻素子可以抑制STZ誘導(dǎo)的DNP,但給予Jagged 1激活Notch信號通路后可拮抗鉤吻素子的抗DNP效應(yīng),使痛敏增加,提示鉤吻素子抗DNP的作用可能與其調(diào)控Notch信號通路有關(guān)。在此基礎(chǔ)上,采用RT-q PCR和western blot方法來檢測大鼠脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞IRF8、小膠質(zhì)細(xì)胞活化標(biāo)志物iba-1及M1極化標(biāo)志物CD86、CD68、TNF-α和IL-1β等的表達(dá)水平,結(jié)果觀察到,與STZ+PBS+KM組相比,STZ+Jagged 1+KM組的IRF8、iba-1、CD86、CD68、TNF-α和IL-1β表達(dá)顯著增加,表明脊髓鞘內(nèi)給予Jagged 1可以拮抗鉤吻素子的效應(yīng),表現(xiàn)為脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞IRF8上調(diào),小膠質(zhì)細(xì)胞M1極化增強(qiáng),致炎細(xì)胞因子表達(dá)增加,痛敏加劇。綜上,本文研究結(jié)果提示,鉤吻素子對大鼠糖尿病神經(jīng)病理性疼痛具有顯著的鎮(zhèn)痛作用;鉤吻素子可能通過Notch信號通路下調(diào)IRF8的表達(dá),進(jìn)而抑制脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞M1極化,從而降低致炎細(xì)胞因子的表達(dá),發(fā)揮抗糖尿病神經(jīng)病理性疼痛的作用。
【圖文】：

圖 1 小膠質(zhì)細(xì)胞 M1 和 M2 兩種極化類型Figure 1 Two polarization types of microglia M1 and M2如上所述，鉤吻素子可能通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞 M1 極化而發(fā)揮抗 DNP 作用，那么它是通過什么途徑調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞 M1 極化，值得探究。國內(nèi)外大量研究表明，干擾素調(diào)節(jié)因子 8（Interferon Regulatory Factor 8，，IRF8）是調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞極化（激活態(tài)）的關(guān)鍵效應(yīng)分子[25]。IRF8 是一種轉(zhuǎn)錄因子，屬于干擾素家族。研究表明，在生理狀態(tài)下脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞幾乎不表達(dá) IRF8，可一旦神經(jīng)系統(tǒng)遭受應(yīng)激或者損傷，IRF8 在小膠質(zhì)細(xì)胞核內(nèi)的表達(dá)激增，但在神經(jīng)元以及星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)則不受影響[25]。IRF8 在小膠質(zhì)細(xì)胞核內(nèi) IL-1β、IL-6、TNF-α等致炎細(xì)胞因子啟動(dòng)子附近募集，并激活轉(zhuǎn)錄，從而使小膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)?M1 極化態(tài)，分泌促炎因子，致使脊髓背角神經(jīng)元興奮性傳導(dǎo)加劇，引起慢性疼痛[25, 26]。

圖 2 機(jī)械刺激縮足閾測痛點(diǎn)easured position of mechanical withdr髓蛋白濃度醛腹腔注射麻醉大鼠（劑量為 0.35 、剝離脊髓兩側(cè)肌肉和韌帶，充分暴暴露脊髓腔，去除脊髓腔邊緣椎骨，預(yù)冷的生理鹽水，注射器頭部緊緊貼住髓便可完整、快捷地從脊髓腔中取出凍存管，迅速置于液氮中，取材結(jié)束提取及濃度測定
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 張錦華;楊承祥;仲吉英;張磊;熊青明;王靖;王漢兵;;腰交感神經(jīng)節(jié)射頻對糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2016年24期

2 郭艷嬌;王高霞;劉培雯;牛娟;劉曉紅;曾俊偉;;MRS2211對糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用及可能的機(jī)制[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2015年04期

3 納仁高娃;塔娜;米炎;;P2X4受體在糖尿病神經(jīng)病理性疼痛模型中的作用[J];疾病監(jiān)測與控制;2015年02期

4 許盈;李蘇平;廖婉婷;金桂林;俞昌喜;;鉤吻素子抗外周神經(jīng)損傷導(dǎo)致誘發(fā)痛的效應(yīng)[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年06期

5 Li Cao;Cheng He;;Polarization of macrophages and microglia in inflammatory demyelination[J];Neuroscience Bulletin;2013年02期

6 劉浩;沈潔;劉銘;許盈;俞昌喜;;高速逆流色譜分離制備鉤吻素子[J];中藥新藥與臨床藥理;2013年02期

7 史蕾;張弘弘;胡吉;蔣星紅;徐廣銀;;糖尿病神經(jīng)病理性疼痛與嘌呤受體P2X(英文)[J];生理學(xué)報(bào);2012年05期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 張昕;ATP調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞極化狀態(tài)進(jìn)而參與神經(jīng)病理性疼痛的研究[D];上海交通大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 郭艷嬌;脊髓背角P2Y_（13）受體參與糖尿病大鼠神經(jīng)病理性疼痛的實(shí)驗(yàn)研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2016年

本文編號：2651889