【摘要】：目的:觀察四逆軟肝方對乙醛作用下的人肝星狀細(xì)胞肝纖四項(xiàng)(CG、HA、LN、PCⅢ)及MMP-1、TIMP-1的影響,探討其抗肝纖維化的機(jī)制及作用。方法:1、取LX-2細(xì)胞(濃度為1x10~5個/m L)接種于無菌96孔培養(yǎng)板中,200μL/孔,放置培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h,待細(xì)胞長滿單層,棄培養(yǎng)液。加入不同濃度的乙醛作用24h、48h、72h后(每24h換液一次),采用CCK-8法檢測細(xì)胞的OD值,分析乙醛對LX-2細(xì)胞損傷的程度,并選取細(xì)胞存活率最高的乙醛濃度和時間作為實(shí)驗(yàn)的損傷濃度及時間。2、將LX-2細(xì)胞接種于無菌96孔板,待細(xì)胞長滿單層后,隨機(jī)分為正常組(正常培養(yǎng)液培養(yǎng)),乙醛組(含250mmol/L乙醛的細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)),培養(yǎng)72h(每24h換液一次),搜集兩組細(xì)胞培養(yǎng)液上清待測,繼續(xù)將乙醛組LX-2細(xì)胞隨機(jī)分為脫離組、四逆組、清熱組、扶正組;四逆組、清熱組、扶正組分別用其相對應(yīng)的含藥血清培養(yǎng),脫離組及正常組用正常培養(yǎng)液培養(yǎng),培養(yǎng)24h,搜集各組細(xì)胞培養(yǎng)液上清待測。3、采用ELISA試劑盒對各組細(xì)胞培養(yǎng)液上清進(jìn)行肝纖四項(xiàng)及MMP-1、TIMP-1的檢測。結(jié)果:1.不同乙醛濃度及時間對LX-2細(xì)胞的損傷不同,其中250mmol/L乙醛培養(yǎng)72小時,損傷最小,細(xì)胞存活率最高。2.在實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞倒置顯微鏡下(200倍)觀察,與正常組相比,乙醛組細(xì)胞密度明顯稀疏,細(xì)胞形態(tài)未改變。3.與正常組相比,乙醛組PCⅢ含量明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.01),CG、HA、LN、MMP-1、TIMP-1的含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4.與脫離組比較,四逆組HA、PCⅢ、TIMP-1均明顯降低(P㩳0.01,P㩳0.05);CG、LN、MMP-1無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。5.四逆組、清熱組、扶正組三組間無差異(P0.05)。結(jié)論:四逆軟肝方可降低受損的LX-2細(xì)胞HA、PCⅢ、TIMP-1指標(biāo)的表達(dá),可能有一定的抗肝纖維化作用。
【圖文】：

1 不同濃度乙醛和作用時間對 LX-2 細(xì)胞的影響（n=3）含 50mmol/L 乙醛的細(xì)胞培養(yǎng)液含 100mmol/L 乙醛的細(xì)胞培養(yǎng)液含 150mmol/L 乙醛細(xì)胞培養(yǎng)液D 值( s) 存活率（%）OD 值( s) 存活率（%）OD 值( s) 存活（%257 0.028 20.7 0.246 0.064 19.9 0.510 0.066 41205 0.041 13.1 0.225 0.035 14.4 0.554 0.088 35201 0.001 16.3 0.212 0.007 17.3 0.518 0.048 42 乙醛作用 72 小時后 LX-2 細(xì)胞情況形態(tài)學(xué)觀察 胞 倒置 顯微 鏡 下（ 200 倍 ）觀 察 ，，與 正常 組相疏 ，形 態(tài)未 改變 。見 圖 1。A B

液 上 清 中 肝 纖 四 項(xiàng) 及 MMP-1、 TIMP-1 水 平 的 比HA（ ng/ml）LN（ ng/ml） PCIII（ ng/ml）MMP-1（ ng/m20.89 3.34 30.80 12.86 7.46 0.10 17.64 20.59 1.20 37.89 6.66 32.44 8.74△△17.32 相 比 ，△△P㩳 0.01；后 LX-2 細(xì)胞情況形態(tài)學(xué)觀察胞 倒置 顯微 鏡下 （ 200 倍） 觀察 ，與 正常 組 離組 比 ， 各 給 藥組 細(xì)胞 疏密 度、 形態(tài) 學(xué)上 均AC
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2651868