發(fā)布時(shí)間：2020-05-06 20:47

【摘要】：沙棘(Hippophae rhamnoides L.)隸屬胡頹子科沙棘屬,是一種兼有食用、藥用和生態(tài)價(jià)值的多年生落葉灌木或小喬木。沙棘的果實(shí)是沙棘價(jià)值的主要利用部位,含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生物活性物質(zhì)。目前沙棘果實(shí)主要用于沙棘果汁、沙棘籽油、沙棘果油的生產(chǎn),其加工的主要副產(chǎn)物是果渣和籽渣。許多研究已表明,這些殘?jiān)泻胸S富的黃酮類、酚酸類、原花青素類等天然多酚類成分,而這些成分與沙棘的抗氧化、抗炎、抗菌和保護(hù)心血管等活性密切相關(guān)。因此合理利用加工副產(chǎn)物,構(gòu)建工業(yè)固體廢棄物資源利用的綠色模式,對(duì)促進(jìn)沙棘的綜合利用,延長(zhǎng)產(chǎn)業(yè)鏈,具有積極的意義。為充分利用這一資源,本文以超臨界CO_2萃取沙棘籽油后的沙棘籽渣為研究對(duì)象,在優(yōu)化沙棘籽渣抗氧化物質(zhì)的超聲輔助低共熔溶劑提取及純化工藝基礎(chǔ)上,制備了具有強(qiáng)抗氧化活性和高原花青素含量的沙棘籽渣提取物。初步對(duì)沙棘籽渣富集物進(jìn)行定性,并對(duì)其體外抗氧化活性以及對(duì)HepG2細(xì)胞免于受到H_2O_2損傷的保護(hù)作用進(jìn)行了初步研究。主要研究結(jié)果如下:1.以DPPH清除率和FRAP值為考察指標(biāo),通過(guò)單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn)分析,確定了超聲輔助低共熔溶劑提取沙棘籽渣中抗氧化物質(zhì)的最佳提取工藝條件為:氯化膽堿-草酸(摩爾比1:1,含水量30%)低共熔溶劑為提取溶劑,液固比14:1(mL/g),超聲功率420W,超聲時(shí)間52 min,超聲溫度44℃。在此條件下,提取液DPPH清除率和FRAP值分別為60.06±0.08%,63.86±0.13 mmol/L。2.利用紫外的方法測(cè)定了提取液中的主要活性成分的含量。結(jié)果顯示,沙棘籽渣提取液中含有大量的原花青素(22.71 mg/gDW),多酚含量比較高(11.61 mg/gDW),含量均遠(yuǎn)高于黃酮含量(3.08 mg/100gDW)。并對(duì)抗氧化試驗(yàn)結(jié)果及總多酚、總黃酮、總原花青素含量進(jìn)行了相關(guān)性分析,得出DPPH清除率和FRAP值與總多酚、總黃酮、總原花青素含量?jī)蓛砷g均呈顯著正相關(guān)系。3.在7種國(guó)產(chǎn)樹(shù)脂中,HPD400大孔樹(shù)脂表現(xiàn)出良好的沙棘籽原花青素吸附與解吸性能,是較好的富集純化沙棘籽原花青素的樹(shù)脂。HPD400樹(shù)脂的優(yōu)化動(dòng)態(tài)吸附解吸條件為:提取液稀釋4倍后上樣,上樣流速1 mL/min,吸附時(shí)間5 h;70%乙醇洗脫,洗脫體積2.5 BV。經(jīng)過(guò)上述方法處理后,可得到原花青素含量為60.17±1.14%的褐色沙棘籽原花青素粉末。4.通過(guò)對(duì)純化后的樣品進(jìn)行紫外光譜(UV)、紅外光譜(IR)和高效液相色譜(HPLC)分析,紫外方法分析表明沙棘籽渣中原花青素在270 nm處有特征吸收峰,且有酚類物質(zhì)的性質(zhì);紅外光譜證實(shí)了沙棘籽原花青素的基本骨架結(jié)構(gòu);經(jīng)過(guò)高效液相色譜顯示分析其中含有兒茶素和表兒茶素單體成分。5.利用DPPH、ABTS、鐵還原法對(duì)沙棘籽原花青素的體外抗氧化能力進(jìn)行測(cè)定,并以HepG2細(xì)胞建立H_2O_2損傷細(xì)胞模型來(lái)研究沙棘籽原花青素對(duì)氧化受損細(xì)胞的保護(hù)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn):沙棘籽原花青素有較強(qiáng)的抗氧化能力,在較低濃度下便可具有較高的自由基清除能力和鐵離子還原能力,DPPH自由基和ABTS自由基清除率的IC_(50)值分別為0.83 mg/mL,0.12 mg/mL,沙棘籽原花青素在質(zhì)量濃度為1.5 mg/mL時(shí)的FRAP值為7.42 mmol/L。并且沙棘籽原花青素對(duì)HepG2細(xì)胞具有保護(hù)作用,能夠使其較少受到H_2O_2的損傷作用。50μg/mL-400μg/mL的沙棘籽原花青素能夠顯著提高細(xì)胞的存活率,預(yù)處理濃度為200μg/mL時(shí),細(xì)胞存活率達(dá)82.76%。熒光顯微鏡觀察說(shuō)明發(fā)生凋亡的細(xì)胞數(shù)量減少。綜上所述,沙棘籽渣可作為一種經(jīng)濟(jì)的天然抗氧化劑的新來(lái)源。
【圖文】：

取出冷卻。在室溫及 4o縮寫C條件下，放置一周時(shí)間體系仍為均勻透明的液體如圖2-1。表 2-2 不同類型的低共熔溶劑Table 2-2 Different types of deep eutectic solvents (DES)溶劑體系摩爾比季銨鹽 氫供體DES-1 氯化膽堿 葡萄糖 1:1DES-2 氯化膽堿 蘋果酸 1.5:1DES-3 氯化膽堿 草酸 1:1DES-4 氯化膽堿 丙三醇 1:2DES-5 氯化膽堿 乳酸 1:1圖 2-1 不同類型的低共熔溶劑Figure 2-1 Different types of deep eutectic solvents (DES)

2 沙棘籽渣抗氧化提取及活性成分含量測(cè)定[70]。根據(jù)相似相溶原理，DES-3 和 DES-5 更易提取出極性較大的多也可能由于 DES-3 相對(duì)于其他低共熔溶劑的運(yùn)動(dòng)分散性好，能更好地，故在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，選擇氯化膽堿-草酸（DES-3）低共熔溶劑為萃取參考文獻(xiàn)報(bào)道[71, 72]，，比較了低共熔溶劑與有機(jī)溶劑（60%丙酮和 80%化能力的大�。ㄒ嘁�(jiàn)圖 2-2），結(jié)果表明：低共熔溶劑 DES-3 提取液優(yōu)于傳統(tǒng)溶劑提取液。
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2651836