【摘要】：目的:研究燕窩酸小鼠單次給藥毒性,對(duì)小鼠急性腦缺血的保護(hù)作用,活血化瘀作用及對(duì)D-半乳糖(D-gal)聯(lián)合氯化鋁(AlCl_3)致大鼠阿爾茨海默病(AD)的作用及機(jī)制,為燕窩酸用于AD臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:單次灌胃給藥毒性試驗(yàn),適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境3 d后,70只小鼠被隨機(jī)分為7組:溶媒組和6個(gè)燕窩酸劑量組(6.0、7.2、8.7、10.4、12.5和15.0 g·kg~(-1)),每組5雌5雄。試驗(yàn)前禁食不禁水14~16 h,溶媒組小鼠按30 mL·kg~(-1)灌胃給予0.5%羧甲基纖維素鈉(0.5%CMC-Na),燕窩酸各劑量組按30 mL·kg~(-1)分別灌胃給予相應(yīng)濃度的燕窩酸,觀察和記錄各組小鼠急性毒性反應(yīng),藥后觀察14 d。急性腦缺血損傷試驗(yàn),適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境3 d后,100只小鼠被隨機(jī)分為5組:溶媒組、尼莫地平組(18 mg·kg~(-1))和3個(gè)燕窩酸劑量組(28、55、110mg·kg~(-1)),每組10雌10雄。溶媒組小鼠按20 mL·kg~(-1)灌胃給予純凈水,尼莫地平組和燕窩酸各劑量組分別灌胃給予相應(yīng)濃度的尼莫地平或燕窩酸,連續(xù)給藥7 d。最后1次給藥前禁食不禁水14~16 h,藥后1 h,每組選取5雌5雄,采用斷頭術(shù)復(fù)制全腦缺血小鼠模型,記錄張口次數(shù)(n)和喘息時(shí)間(s);每組剩余小鼠采用結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈及迷走神經(jīng)復(fù)制不完全缺血小鼠模型,記錄小鼠存活時(shí)間(s)和生存時(shí)間延長(zhǎng)率(%);解剖取材各組小鼠大腸和小腸,記錄大腸和小腸水份含量�；钛鲈囼�(yàn),適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境3 d后,50只小鼠被隨機(jī)分為5組:溶媒組、阿司匹林組(18 mg·kg~(-1))和3個(gè)燕窩酸劑量組(28、55、110 mg·kg~(-1)),每組5雌5雄。溶媒組小鼠按20 mL·kg~(-1)灌胃給予純凈水,阿司匹林組和燕窩酸各劑量組分別灌胃給予相應(yīng)濃度的阿司匹林或燕窩酸,連續(xù)給藥30d。最后1次給藥前禁食不禁水14~16 h,藥后30 min,剪尾3 mm,記錄剪尾出血時(shí)間(s),剪尾試驗(yàn)后,玻璃毛細(xì)管法和玻片法同時(shí)進(jìn)行,采血測(cè)定并記錄每只小鼠凝血時(shí)間(s)。對(duì)D-gal聯(lián)合AlCl_3致AD大鼠的影響試驗(yàn),適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境7 d后,66只雄性大鼠被隨機(jī)分為6組:溶媒組、模型組、吡拉西坦組(504 mg·kg~(-1))和3個(gè)燕窩酸劑量組(19、38、76 mg·kg~(-1)),每組11只。每天上午,溶媒組大鼠按1 mL·kg~(-1)腹腔注射0.9%生理鹽水和按10 mL·kg~(-1)灌胃給予純凈水,其余大鼠按1 mL·kg~(-1)腹腔注射D-gal(120 mg·kg~(-1))和按10 mL·kg~(-1)灌胃給予AlCl_3(15 mg·kg~(-1)),每天造模1次,連續(xù)處理16 w;每天下午,溶媒組和模型組大鼠按10 mL·kg~(-1)灌胃給予純凈水,吡拉西坦組和燕窩酸各劑量組分別灌胃給予相應(yīng)濃度的吡拉西坦或燕窩酸,每天給藥1次,連續(xù)給藥16 w。D_(112),各組大鼠觀察并記錄出現(xiàn)白內(nèi)障大鼠數(shù)目,并計(jì)算白內(nèi)障形成率(%)。D_(113),每只大鼠訓(xùn)練自由泳90 s。D_(114)~D_(118),進(jìn)行定向航行試驗(yàn)。直徑10 cm的平臺(tái)被置于水面1 cm以下,訓(xùn)練各組大鼠在水迷宮中尋找水下隱藏平臺(tái),連續(xù)訓(xùn)練5天,每天每只大鼠訓(xùn)練4次,如果某只大鼠超過(guò)90 s未能找到平臺(tái),應(yīng)引導(dǎo)其到平臺(tái)上,并站立10 s。記錄每天4次訓(xùn)練逃避潛伏期(s),并計(jì)算均值。D_(119),進(jìn)行空間探索試驗(yàn)。移除平臺(tái),記錄首次穿越原平臺(tái)時(shí)間(s)、原象限停留時(shí)間(s)、穿越原平臺(tái)次數(shù)(n)和總路程(cm)。D_(120),采血,大腦和海馬取材。生化檢測(cè)血清白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、肌酐(CREA)、血尿素氮(BUN)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDLC)、低密度脂蛋白(LDLC)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用ELISA法檢測(cè)炎癥因子腫瘤壞死因子(TNF-α)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)、白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)水平;大腦和海馬的病理結(jié)構(gòu)改變采用蘇木精-伊紅染色法(HE)檢查。結(jié)果:單次灌胃給藥毒性試驗(yàn),溶媒組小鼠未觀察到臨床癥狀異常,無(wú)死亡。燕窩酸主要臨床癥狀改變有:自發(fā)活動(dòng)減少、安靜怠動(dòng)、俯臥、皮膚蒼白、體涼等,死亡時(shí)間集中在20 min~5 h,燕窩酸LD_(50)=8823.07 mg·kg~(-1),95%可信限為8078.78~9625.18 mg·kg~(-1),LD_5=6832.20 mg·kg~(-1),LD_(95)=11394.07mg·kg~(-1)。急性腦缺血損傷試驗(yàn),與溶媒組比較,經(jīng)燕窩酸(28、55、110 mg·kg~(-1))連續(xù)灌胃給藥7 d后,全腦缺血小鼠的張口時(shí)間和喘息時(shí)間顯著增加(P0.01),喘息時(shí)間延長(zhǎng)率分別為33.54%、35.98%、56.71%,不完全腦缺血小鼠生存時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P0.01),生存時(shí)間延長(zhǎng)率分別為41.24%、47.45%、94.35%,小腸、大腸水分含量顯著增加(P0.01)。活血化瘀試驗(yàn),與溶媒組相比,經(jīng)燕窩酸(28、55、110 mg·kg~(-1))連續(xù)灌胃給藥30 d后,小鼠斷尾出血時(shí)間明顯延長(zhǎng),出血時(shí)間延長(zhǎng)率為26.24%、28.14%、29.28%;玻片法凝血時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P0.05或P0.01),凝血時(shí)間延長(zhǎng)率分別為21.48%、34.07%、42.22%;玻璃毛細(xì)管法凝血時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P0.05),凝血時(shí)間延長(zhǎng)率分別為27.74%、20.51%、32.90%。對(duì)D-gal聯(lián)合AlCl_3致AD大鼠的影響試驗(yàn),經(jīng)燕窩酸(19、38、76mg·kg~(-1))連續(xù)灌胃給藥16 w后,與模型組比較,白內(nèi)障形成率明顯降低,白內(nèi)障形成率分別為40.0%、9.09%、0;體重增長(zhǎng)顯著增加(P0.05或P0.01);定向航行試驗(yàn)中逃避潛伏期明顯縮短;空間探索試驗(yàn)中首次穿越原平臺(tái)時(shí)間和總路程明顯縮短,穿越原平臺(tái)次數(shù)增加差距具有顯著性(P0.05或P0.01),但原象限停留時(shí)間無(wú)明顯差異(P0.05);血清肝功能指標(biāo)ALB和TP水平明顯升高,AST、ALT和TBIL水平顯著降低(P0.05或P0.01);血清腎功能指標(biāo)CREA和BUN水平顯著降低(P0.05或P0.01);血清血脂指標(biāo)TC和LDLC明顯降低,但TG和HDLC水平無(wú)明顯差異(P0.05);血清SOD水平明顯增加,血清MDA水平顯著降低(P0.01);血清炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平顯著降低(P0.05或P0.01),TGF-β水平顯著增加(P0.01);大腦和海馬病理結(jié)構(gòu)損傷得到明顯減輕。結(jié)論:參照WHO毒性物質(zhì)分類標(biāo)準(zhǔn),燕窩酸屬于低毒物質(zhì);燕窩酸有很好的抗急性腦缺血、增加腸道水份含量和活血化瘀作用;燕窩酸可有效改善D-gal聯(lián)合AlCl_3致AD大鼠學(xué)習(xí)和記憶障礙,可能與降低炎癥因子(IL-1β、IL-6和TNF-α),增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力,降低血脂水平,保護(hù)肝腎功能,保護(hù)大腦神經(jīng)元等作用有關(guān)。
【圖文】：

圖 1-1 燕窩酸對(duì)小鼠單次灌胃給藥毒性試驗(yàn)存活動(dòng)物數(shù)的影響Fig1-1 Effects of sialic acid on survival count of the mice in the single dose toxicity test2 體重與溶媒組比較，藥后D1，6000~8657 mg·kg-1劑量組存活小鼠體重均降低（P＜0.05或P＜0.01），藥后D4，6000~10398 mg·kg-1劑量組存活小重均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），藥后D7及以后，各劑量組存活小重未見(jiàn)明顯差異（P＞0.05），詳見(jiàn)表1-2、圖1-2。表 1-2 燕窩酸對(duì)小鼠單次灌胃給藥毒性試驗(yàn)體重的影響（g）Table 1-2 Effects of sialic acid on body mass of the mice in single dose toxicity test (g)oupsg/kg)Body mass (n)D0D1D4D7D14ntrol 20.19±0.95(10) 21.73±1.14(10) 26.32±1.65(10) 27.76±1.94(10) 30.32±2.30

圖 1-3 燕窩酸對(duì)臟器病理改變?nèi)庋蹤z查Fig 1-3 Effects of sialic acid on pathological changes of organs by visual examination燕窩酸LD50的結(jié)果經(jīng)Bliss法計(jì)算，燕窩酸對(duì)KM小鼠單次灌胃給藥LD5為 6832.20 mg5為11394.07 mg·kg-1，LD50為8823.07 mg·kg-1，95 %的可信限為80785.18 mg·kg-1，按世界衛(wèi)生組織（WHO）的毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)為屬于質(zhì)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2651734