【摘要】：中藥中常見的真菌毒素主要有黃曲霉毒素(aflatoxins,AFs)、赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)、伏馬菌素(fumonisins,FBs)、T-2毒素等。其中AFs與OTA是中藥中較易污染的真菌毒素兩者都屬于人類致癌物,嚴重威脅著用藥安全性。因此,針對常見中藥材中真菌毒素的定量化檢測及防霉變控制技術(shù)的研究至關(guān)重要。本論文主要研究:1.IAC-HPLC-FLD方法測定5種典型中藥飲片中黃曲霉毒素采用IAC-HPLC-FLD方法,樣品經(jīng)70%甲醇提取、免疫親和柱凈化后,利用液相色譜分離-熒光檢測中藥飲片中4種黃曲霉毒素(AFB_1,AFB_2,AFG_1和AFG_2)的含量。通過優(yōu)化前處理方法,使得此方法能同時滿足5種中藥飲片遠志、柏子仁、決明子、黨參、薏苡仁的檢測要求。收集并檢測5種中藥飲片114批次,其中26批柏子仁(AFs 1.22~46.67μg·kg~(-1),AFB_1 1.22~31.40μg·kg~(-1))、4批薏苡仁(AFs 1.97~41.13μg·kg~(-1),AFB_1 1.97~36.40μg·kg~(-1))、1批決明子(AFs 13.65μg·kg~(-1),AFB_1 12.60μg·kg~(-1))檢出陽性、黨參未檢出、13批遠志(AFs 2.40~194.46μg·kg~(-1),AFB_1 2.03~90.04μg·kg~(-1)),陽性率為41%,超標率為15%。2.遠志初加工過程中黃曲霉毒素易發(fā)生關(guān)鍵環(huán)節(jié)的考察及脫除越來越多的研究報道出遠志中黃曲霉毒素污染嚴重,但對其產(chǎn)生毒素的關(guān)鍵點及防霉變控制方面的研究較少。本章通過實地考察山西產(chǎn)地的遠志的初加工過程,同時于實驗室簡單模擬遠志產(chǎn)地初加工過程,包括埋土、發(fā)汗、抽芯等過程,檢測在初加工的各個關(guān)鍵環(huán)節(jié)下黃曲霉毒素B_1,B_2,G_1,G_2的產(chǎn)生狀況;并將由初加工得到的遠志飲片在28℃,濕度范圍為82%~90%和96%條件下分別進行儲藏后一段時間后,測定毒素產(chǎn)生的情況,以此考察遠志初加工-儲藏過程中黃曲霉毒素的易污染環(huán)節(jié)。檢測結(jié)果顯示,遠志在初加工各環(huán)節(jié)的樣品檢測結(jié)果均為陰性;其次2種濕度條件下儲藏結(jié)果顯示,當濕度為96%時,在7天的時間內(nèi)遠志發(fā)霉嚴重,并檢測出了AFB_1、AFs的含量分別為4.01μg·kg~(-1),5.36μg·kg~(-1)。因此,將采收的遠志鮮品進行及時處理和干燥,對遠志真菌毒素污染的防控至關(guān)重要。以黃曲霉毒素含量高于限量(14號樣品AFs,AFB_1分別為159.44,68.66μg·kg~(-1))與與低于限量(39號樣品AFs,AFB_1分別為2.08,2.08μg·kg~(-1))的2個批次遠志分別為進行黃曲霉毒素脫除研究。首先測定了在水洗及75%乙醇洗2種脫除方法下遠志中黃曲霉毒素含量的變化,結(jié)果表明14號遠志樣品進行水洗和75%乙醇洗后對AFB_1的脫除率分別為92.47%和64.01%;39號樣品在水洗和75%乙醇洗后,黃曲霉毒素未檢出,對AFB_1的脫除率均為≤100%。其次測定了由飲片到顆粒劑的過程中毒素含量的變化,測得39號遠志中AF_S和AFB_1,分別為60.61和11.97μg·kg~(-1),轉(zhuǎn)移率分別為38.01%,17.43%;39號遠志中未檢出黃曲霉毒素,其轉(zhuǎn)移率約為ND。3.柏子仁初加工過程中黃曲霉毒素易發(fā)生關(guān)鍵環(huán)節(jié)的考察及脫除中藥柏子仁中毒素的脫毒是指采用物理、化學、生物等處理方法除去已受到污染的中藥材表面或內(nèi)部的毒素,中藥在產(chǎn)地加工儲藏中有效的監(jiān)控將避免真菌毒素成為威脅人類健康的污染源。本章通過模擬柏子仁產(chǎn)地初加工過程,考察在不同初加工條件下各個關(guān)鍵環(huán)節(jié)下AFB_1,AFB_2,AFG_1,AFG_2的產(chǎn)生狀況。結(jié)果表明模擬過程中的柏子仁未成品(處于初加工過程中某個環(huán)節(jié)的產(chǎn)品)未檢出AFs,說明此加工過程不易被毒素污染。此外收集的隔年柏子仁未成品及柏子仁成品中AFs檢測結(jié)果均超過限量,污染嚴重,說明藥材基地在初加工的過程中,存在在得到柏子之前就已經(jīng)被毒素污染或在儲藏柏子的過程中被毒素污染這兩種情況,更進一步說明了對中藥加工初始環(huán)節(jié)監(jiān)控的重要性。選取黃曲霉毒素毒素含量高于限量和低于限量的2個批次柏子仁樣品(AFs,AFB_1毒素初始含量分別為23.95和23.17μg·kg~(-1)(1號樣品);3.94和3.94μg·kg~(-1)(2號樣品))進行進一步毒素脫除實驗,測定在水洗及75%乙醇洗2種脫除方法下,比較被AFs污染的柏子仁中毒素含量的變化,得到1號樣品進行水洗和75%乙醇洗后對AFB_1的脫除率分別為77.69%和≤100%,對AFs的脫除率分別為78.41%和≤100%;2號樣品在水洗和75%乙醇洗后,2種脫除方式均無黃曲霉毒素檢出,對AFB_1、AFs的脫除率均為≤100%。4.OTA免疫試紙條的制備及簡單應用以膠體金標記抗體作為探針,通過優(yōu)化金標抗體的偶聯(lián)比、重懸液體系、C線與T線濃度等條件,自組裝基于競爭法原理檢測OTA的膠體金免疫試紙條�？贵w加入量為5μg,10 mM PBS(1%蔗糖,0.02%MgSO_4,0.1%Tween 20)的重懸溶液體系下,采用NC140硝酸纖維素膜,肉眼檢測限為2.5μg·mL~(-1),檢測時間10~20 min。并采用70%甲醇-水提取收集的中藥材樣品,探討膠體金試紙條在不同中藥基質(zhì)下的測定影響,檢測方法滿足歐盟限量標準15μg·kg~(-1)的要求。同時液質(zhì)確證了免疫層析分析方法樣品檢測結(jié)果的準確性。
【圖文】：

稀釋 3 倍，白芨經(jīng) 60 %甲醇提取，稀釋 4 倍，白芷以 70 %甲 4 倍可獲得優(yōu)異的檢測靈敏度，為了克服基質(zhì)、pH 干擾，獲得準確的紙條應用于不同中藥基質(zhì)需采用適宜的樣品制備方案。與 ELISA 法相測卡檢測法更輕巧省功、方便攜帶，然而膠體金在試紙條上呈現(xiàn)的是淡景干擾掩蔽其顏色變化影響主觀判斷，且裸眼觀測試紙條只能達到定性，無法滿足定量檢測需求，為了克服此類難題，研究者嘗試通過改變標利用儀器辨別的方式等改善結(jié)果的靈敏度和準確度。武會娟等[38]開發(fā)了磁性免疫層析試劑盒（包括試紙條和超順磁性復合粒子標記 AFB1抗體結(jié)合在超順磁微粒上的目標物來定量檢測生物樣品中 AFB1水平。王艷料作為標記物，示蹤待測物水平，該法檢測限低至 0.1～0.3 ng·mL 1，.3～4 ng·mL 1。Urusov A E[40]采用二次標記抗體放大顯色標記，實現(xiàn)該倍的目的（見圖 1.1）�；诖判詮秃狭Ｗ�、金磁納米以及二次放大模式度可達到 ELISA 水平，通過改善標記物能顯著改善傳統(tǒng)金納米免疫層應對復雜基質(zhì)中痕量檢測的需求，放寬樣品前處理制備條件，降低樣品，尤其適合中藥樣品的檢測，此類方法有望在中藥 AFB1有待嘗試。

圖 1.1 混合對照品溶液（A）、決明子陽性樣品（B）、薏苡仁陽性樣品（C）、黨參陰性樣品（D）、柏子仁陽性樣品（E）、遠志陽性樣品（F）的 HPLC 圖Fig. 1.1 Chromatograms of reference substances solution (A), cassia positive sample(B), coixseed positive sample (C), codonopsis negative sample(D), platycladi seed positive sample (E) 、Polygalae Radix positive sample (F)1.3.2 線性關(guān)系取 AFG2，AFG1，AFB2，AFB1混合對照品儲備液，用甲醇-水（50：50）配制成一系列濃度的混合對照品溶液（AFG1，AFB1濃度：0.25，0.5，1，2.5，5，10，25 μg·L-1；AFG2，AFB2濃度：0.0625，0.125，，0.25，0.625，1.25，2.5，6.25 μg·L-1），分別進樣 10 μL，記錄色譜圖，并記錄濃度與峰面積的參數(shù)來繪制標準曲線，計算 4 組成分的回歸方程分別為：y=50215 x+1435.1；y=23159 x+1424.6；y=81614 x+759.41；y=36325 x+192.24，其中 AFG2和 AFB2在 0.0625～6.25 μg·L-1范圍內(nèi)，AFG1和 AFB1在 0.25～25 μg·L-1范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù) R2均大于 0.9996。1.3.3 精密度、重復性和穩(wěn)定性試驗精密稱取供試品藥材粉末(過 2 號篩)5 g，加入混合對照品溶液，按 2.2 項下方法制備
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R284;O652

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李區(qū);;黃曲霉毒素分析方法進展[J];廣西水產(chǎn)科技;2005年03期

2 陳勇;榮道興;任利民;;黃曲霉毒素對家禽的危害與防控措施[J];阿壩科技;2012年02期

3 王少軍;于春娣;唐娟;程果;謝曉麗;楊慶利;;黃曲霉毒素生物脫毒法研究進展[J];食品研究與開發(fā);2018年24期

4 諸晨;錢勇;;高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定薏苡仁藥材中黃曲霉毒素[J];食品安全質(zhì)量檢測學報;2019年05期

5 曹長會;;臨沂市煎餅類食品中黃曲霉毒素含量測定及分析[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2019年05期

6 汪恩婷;鄒振宇;楊皓;楊京;;應用高效液相色譜法檢測食品中黃曲霉毒素[J];食品安全導刊;2018年36期

7 彭永敏;;食品中黃曲霉毒素的檢測方法[J];食品安全導刊;2018年36期

8 葉穎苓;;食品中黃曲霉毒素檢測方法概述[J];科技資訊;2019年09期

9 王善鈺;;食品中的黃曲霉毒素檢測措施分析[J];食品安全導刊;2019年09期

10 李智高;毛永楊;狄朋敏;蘇濤;田金蘭;;食品中黃曲霉毒素的降解方法的研究進展[J];食品安全質(zhì)量檢測學報;2019年14期

相關(guān)會議論文 前10條

1 喬宏興;姜亞樂;王永芬;史洪濤;邊傳周;;黃曲霉毒素的危害及其脫毒方法研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物微生態(tài)學分會第五屆第十三次全國學術(shù)研討會論文集[C];2018年

2 孫淑娟;曾于洋;江海洋;;中藥中黃曲霉毒素檢測方法研究進展[A];中國毒理學會獸醫(yī)毒理學委員會與中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)食品衛(wèi)生學分會聯(lián)合學術(shù)研討會暨中國毒理學會獸醫(yī)毒理學委員會第5次全國會員代表大會會議論文集[C];2017年

3 胡麗莎;謝春芳;姚冬生;劉大嶺;;用等溫滴定微量熱技術(shù)對黃曲霉毒素氧化酶動力的研究[A];第八屆中國酶工程學術(shù)研討會論文集[C];2011年

4 黎玉鳳;張賽;謝春芳;劉大嶺;姚冬生;;黃曲霉毒素解毒酶體外分子定向進化(Ⅱ)[A];第八屆中國酶工程學術(shù)研討會論文集[C];2011年

5 施曉晨;安雅男;申鳳鴿;于錄;;黃曲霉毒素誘導巨噬細胞自噬機制的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)藥理毒理學分會第十一屆會員代表大會暨第十三次學術(shù)討論會與中國毒理學會獸醫(yī)毒理專業(yè)委員會第五次學術(shù)研討會論文集[C];2015年

6 王文龍;李成成;安立龍;;簡述環(huán)境中黃曲霉毒素對蛋雞產(chǎn)業(yè)潛在的生態(tài)和健康風險[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2014年學術(shù)年會論文集[C];2014年

7 孟慶利;;黃曲霉毒素的檢測及控制[A];《2010中國豬業(yè)進展》論文集[C];2010年

8 翁善鋼;Kaori Nishide;;亞太地區(qū)的黃曲霉毒素[A];第十二屆（2014）中國豬業(yè)發(fā)展大會論文集[C];2014年

9 陳建民;張雪輝;楊美華;金鉞;;中藥中黃曲霉毒素檢測概況[A];第八屆全國中藥和天然藥物學術(shù)研討會與第五屆全國藥用植物和植物藥學學術(shù)研討會論文集[C];2005年

10 馬靜;朱惠蓮;唐志紅;凌文華;;尿糞黃曲霉毒素排泄及生物干預[A];中國環(huán)境誘變劑學會抗誘變劑和抗癌劑專業(yè)委員會第三次全國學術(shù)會議、中國毒理學會生化與分子毒理專業(yè)委員會第五屆學術(shù)交流會、貴州省環(huán)境誘變劑學會成立大會暨首屆學術(shù)交流會論文集[C];2004年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 趙熙熙;昆蟲催生致命黃曲霉毒素[N];中國科學報;2017年

2 山西省農(nóng)業(yè)科學院生物技術(shù)研究中心研究員 原農(nóng)業(yè)部第八屆科技委員會委員 孫毅;從黃曲霉毒素污染說開去[N];中國科學報;2018年

3 余曉琴 四川省食品藥品檢驗檢測院;相關(guān)標準中黃曲霉毒素限量解讀[N];中國市場監(jiān)管報;2019年

4 本報記者 馬愛平;黃曲霉毒素超標“致命”怎么破？[N];科技日報;2018年

5 國家食品安全風險評估中心副研究員 鐘凱;普洱茶中攜帶黃曲霉會不會產(chǎn)生毒素？[N];中國醫(yī)藥報;2017年

6 食品與營養(yǎng)信息交流中心副主任 鐘凱;花生醬含黃曲霉 吃了會怎樣[N];健康報;2017年

7 科信食品與營養(yǎng)信息交流中心副主任 中華預防醫(yī)學會健康傳播分會常務委員 鐘凱;農(nóng)家花生油既便宜又放心？[N];保健時報;2017年

8 美國普度大學農(nóng)業(yè)與生物工程系博士 云無心;檢測出黃曲霉毒素 普洱茶還能喝嗎[N];保健時報;2017年

9 記者 季征;云南農(nóng)大研究表明普洱茶不含黃曲霉毒素[N];云南日報;2017年

10 本報記者 付麗麗 馬波;茶照喝 牙照刷[N];科技日報;2017年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 任文潔;抗黃曲霉毒素B_1納米抗體免疫學性能分析及其隨機突變庫的研究[D];南昌大學;2019年

2 郝澍;硒對黃曲霉毒素B_1抑制豬細胞免疫的拮抗作用及其機理研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2016年

3 關(guān)絢麗;基于轉(zhuǎn)錄組學的氧化脅迫下調(diào)控黃曲霉毒素合成的基因篩選和確證[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2018年

4 范_g;黃曲霉毒素降解酶基因克隆表達和降解劑在肉雞中的應用研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2015年

5 武琳霞;中國花生黃曲霉毒素污染風險預警模型研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2019年

6 王倩;代謝組學分析純品黃曲霉毒素B1添加和自然霉變飼料對奶牛健康和牛奶品質(zhì)的影響[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2019年

7 史瑩華;納米級硅酸鹽結(jié)構(gòu)微粒（NSP）吸附豬飼糧中黃曲霉毒素的研究[D];浙江大學;2005年

8 胡娜;基因芯片技術(shù)在黃曲霉毒素生物合成相關(guān)基因檢測中的應用研究[D];南昌大學;2006年

9 張雪輝;中藥中黃曲霉毒素檢測方法研究及模式識別在中藥領(lǐng)域中的應用[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2004年

10 申海濤;黃曲霉毒素G_1誘發(fā)小鼠肺腺癌的組織發(fā)生及其對肺泡Ⅱ型上皮細胞影響的研究[D];河北醫(yī)科大學;2007年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 王春燕;基于金屬—有機配位聚合物的電化學生物傳感器對黃曲霉毒素B1的檢測[D];南京師范大學;2019年

2 申澤良;花生油加工過程中黃曲霉毒素的控制與脫除[D];河南工業(yè)大學;2019年

3 包曉宇;黃曲霉毒素M1及其與黃曲霉毒素B1共存時對人腸道上皮細胞Caco-2的毒性作用研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2019年

4 葛正法;磁固相萃取用于芝麻油中黃曲霉毒素和多環(huán)芳烴檢測的研究[D];河南工業(yè)大學;2019年

5 李敏;黃曲霉毒素M_1兩種高靈敏度酶免疫檢測方法的建立及其雙特異性抗體的制備[D];江西科技師范大學;2019年

6 王琪;抗黃曲霉素的深海細菌的發(fā)酵過程優(yōu)化與放大研究[D];哈爾濱工業(yè)大學;2018年

7 蔣采貝;乳酸菌對黃曲霉毒素B_1的吸附作用效果[D];上海海洋大學;2019年

8 單利楠;五種典型中藥材中黃曲霉毒素的污染狀況檢測及赭曲霉毒素免疫試紙條的制備和簡單應用[D];吉林農(nóng)業(yè)大學;2019年

9 何婷婷;低共熔溶劑在食品中黃曲霉毒素和多環(huán)芳烴分析的應用研究[D];南昌大學;2019年

10 張利永;基于智能手機黃曲霉菌毒素的快速檢測[D];電子科技大學;2019年

本文編號：2650528