【摘要】：目的:基于金銀花中分離到的雙抗素六元環(huán)狀過氧化物結構,通過骨架躍遷設計和有機小分子仲胺催化劑催化串聯(lián)反應合成新穎的手性六氫噠嗪類化合物,對該類化合物及其衍生物進行體外抗腫瘤活性測試,并闡明其作用機制。方法:1.采用醛、硝基烯烴和偶氮二羧酸酯的串聯(lián)反應,合成一類雙抗素氮雜衍生物,并用~1H-NMR、~(13)C-NMR、HRMS進行結構鑒定,X-ray單晶衍射測定絕對構型,手性HPLC分析對映體過量百分數(shù),從而建立多官能團化的手性六氫噠嗪類化合物庫;2.運用MTT法測定供試化合物對MCF-7乳腺癌細胞和HCT116結腸癌細胞的體外抗增殖活性,并以細胞增殖活力、細胞形態(tài)學為評價指標,在細胞水平驗證其體外抗腫瘤活性;3.采取生物信息學技術中的相關手段建立系統(tǒng)的藥物相關樞紐蛋白作用網(wǎng)絡;4.利用流式細胞儀和熒光染色檢測其在體外誘導細胞凋亡的活性和對細胞周期的影響,借助蛋白印跡試驗技術檢測調控細胞凋亡相關靶點蛋白的表達,從而對抑制MCF-7細胞增殖活性高的化合物做進一步的分子機制研究。結果:1.高對映選擇性合成得到17個新化合物(4a-4eH和5a-5c),目標化合物的結構都經過~1H-NMR、~(13)C-NMR、HRMS正確分析表征,ee值用手性HPLC測定,均大于90%;2.體外抗腫瘤活性結果表明,各化合物物均有一定抑制腫瘤細胞增殖的作用,呈劑量相依的正相關。其中化合物5c作用最為明顯。3.作用機制研究表明,化合物5c產生抗腫瘤作用是通過兩條凋亡的信號轉導通路的實現(xiàn)的,細胞外信號調節(jié)激酶(ERK)和多聚(二磷酸腺苷-核糖)聚合酶(PARP)相關通路。結論:我們已經建立了一種通用于構建多官能團化的雙抗素氮雜衍生物的有機催化串聯(lián)反應Michael-amination-hemiaminalization。由醛、硝基烯烴、偶氮二羧酸酯作為起始原料,能夠以中等到優(yōu)異的收率和高的立體選擇性得到一個具有抗腫瘤活性的產品化合物庫。化學合成得到的手性六氫噠嗪類化合物通過誘導細胞凋亡而具有一定的體外抗人乳腺癌細胞和結腸癌細胞增殖作用。
【圖文】：

成都中醫(yī)藥大學 2017 屆碩士畢業(yè)論文化合物中，化合物 5c 具有劑量依賴性抑制 MCF-7 和 HCT116 癌細胞的增殖的活力，給藥 24 h 的 50%抑制率對應濃度分別是 15 μM (8.5 μg mL-1)和 29.8 μM (16.9μg mL-1)。故隨后進一步重點觀察化合物 5c 對 MCF-7 細胞抗腫瘤的機制探討。

44圖 7A) 在剛加入 15 μM 的 5c 時或處理 24 h 后用相差顯微鏡觀察到 MCF-7 細胞的細胞形態(tài)學特征。最右邊的圖片是中間圖片方框區(qū)域的放大。B) 進行和 A)相同的實驗，，不同點在于培養(yǎng)中用 Hoechst 染料染色并用熒光顯微鏡觀察。C) 在實驗 A)中培養(yǎng)的細胞在未加 5c 處理和 5c 處理 12 h 或 24 h 后分別用流式細胞儀分析的結果。Figure 7. A) Cellular morphology of the MCF-7 cells was observed by phasecontrast microscopyin the absence of 15 μM 5c or after 24 h of exposure. The panel on the far right is a magnificationof the boxed region in the central panel. B) The same experiment as that in A) was conducted,except that cultures were stained with Hoechst dye and examined by fluorescence microscopy. C)Cultures from the experiment in A) were analyzed by flow cytometry (FCM) without exposure to5c or after exposure for 12 or 24 h.
【學位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285

【參考文獻】

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本文編號：2649890